朱江
- 作品数：21 被引量：15H指数：3
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- 分化诱导剂PMA对THP-1源性巨噬细胞膜表面受体MD-2表达的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对诱导分化后THP-1细胞膜表面受体髓样分化蛋白-2(MD-2)表达和分布的影响及其与炎症因子TNF-α、IL-6分泌的关系。方法采用PMA梯度剂量(0、1、5、10、50、100 ng/ml)诱导THP-1细胞48 h后观察贴壁细胞形态并计算贴壁率;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测贴壁细胞膜表面受体MD-2、CD14 mRNA相对表达量,ELISA检测细胞培养上清中分泌性MD-2(sMD-2)、TNF-α和IL-6的分泌水平;进一步通过Western blot检测贴壁细胞的MD-2蛋白表达、激光扫描共聚焦显微镜观察MD-2在贴壁细胞的分布和定位。结果梯度PMA剂量(1~100 ng/ml)48 h成功诱导悬浮THP-1细胞贴壁;激光扫描共聚焦显微镜观察显示PMA诱导后MD-2主要表达于胞膜和胞浆,诱导质量浓度增加对MD-2的表达和分布均无显著影响;RT-qPCR检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后MD-2和CD14 mRNA相对表达量较诱导前均显著升高(P<0.01),诱导剂量组之间无显著差异(P>0.05);ELISA检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后,细胞培养上清中的TNF-α、IL-6分泌水平依次显著增加(P<0.01),sMD-2仅诱导前后有明显统计学差异(P<0.01);Western blot检测显示梯度剂量PMA诱导后细胞内MD-2蛋白表达较诱导前显著增加,诱导剂量组之间无显著差异。结论 1~100 ng/ml PMA均可将THP-1细胞诱导分化为成熟巨噬细胞,增加诱导质量浓度可显著提高炎症因子TNF-α、IL-6的分泌水平,但对其膜表面受体MD-2表达和分布无明显影响。
- 许建华段光杰朱江徐小明刘友生
- 关键词：巨噬细胞髓样分化蛋白-2
- 内毒素结合蛋白样分子p48体内外生物学活性的初步研究
- 2008年
- 目的以LBP为对照,对比研究p48的体内、外生物学功能。方法采用生物传感器、流式细胞分析技术研究p48与LPS及Lipid A的结合力。通过体外培养人单核细胞(U937)和小鼠体内TNF-α的分泌实验,研究p48的生物学功能。采用ELISA方法初步探索p48与LBP是否具有一定相似的空间结构。结果p48能促进LPS与PBMC结合,其活性为LBP的81%。p48能与LPS及Lipid A结合,其亲和常数(KD)分别为1.59×10-6、1.48×10-6mol/L。体内外实验中p48均能促进TNF-α的分泌,其生物学活性约为LBP的77%。高浓度抗NH-LBP Fab抗体能与p48特异性结合,p48部分空间结构与LBP可能有一定的相似性。结论p48具有与LBP相近似的生物学功能,在机体炎症反应中也发挥较重要的作用。
- 葛晓冬杨艳丽段光杰陈锐潘峰朱江刘友生
- 关键词：生物传感器流式细胞分析技术
- 髓样分化蛋白-2模拟肽抑制巨噬细胞吞噬革兰阴性菌
- 2016年
- 目的探讨髓样分化蛋白-2模拟肽(MD-2 mimetic peptide,MDMP)对巨噬细胞吞噬革兰阴性菌的影响及所致炎症因子分泌的抑制效应。方法采用PCR从p EGFP-C3质粒中扩增出表达EGFP的基因片段,通过基因重组构建原核表达载体p ET-32a(+)-EGFP,经测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)PLys S中筛选出稳定表达的重组菌p ET-32a(+)-EGFP-BL21(DE3)PLys S(简称为EGFPBL21)。以IPTG诱导重组质粒表达后,通过免疫荧光和流式细胞术检测RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力以验证EGFP-BL21的构建情况。进一步检测RAW264.7细胞对经不同浓度MDMP(1.0、10、100μg/m L)预处理后的EGFP-BL21的吞噬效应;采用ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的分泌水平。结果筛选获得稳定表达EGFP的重组大肠杆菌BL21(DE3)PLys S,重组菌经巨噬细胞RAW264.7吞噬后流式和激光共聚焦检测结果显示细胞内出现明显的绿色荧光。MDMP预处理后,流式检测结果显示RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力受到明显抑制,预处理组(10、100μg/m L)的吞噬系数(PI)显著低于经血清调理的阳性对照组(P<0.01),且细胞培养上清TNF-α和IL-6的分泌水平显著降低(P<0.01)。结论 MDMP预处理可明显抑制RAW264.7细胞对革兰阴性菌的吞噬作用,并降低该过程中炎症因子TNF-α和IL-6的分泌。
- 王虎杨俊霞黄家君周运江随何欢朱江吴友莉段光杰
- 关键词：革兰阴性菌
- PKD inhibitor protects against LPS/D-GalN-induced acute liver injury in mice
- Background and Aim:Protein kinase D (PKD) is a newly described serine/threonine protein kinase that plays a pi...
- 段光杰刘友生朱江许成燕
- 关键词：LIPOPOLYSACCHARIDED-GALACTOSAMINEHEPATITIS
- 文献传递
- 在制备防治脂多糖诱导的急性肝损伤的药物中的应用
- 本发明涉及化合物的新应用，特别涉及<Image file="201010201166.1_AB_0.GIF" he="23" imgContent="undefined" imgFormat="GIF" wi="75"/...
- 段光杰刘友生朱江许成燕徐小明
- 文献传递
- 内毒素中和肽突变体及其应用
- 本发明公开了一种内毒素中和肽突变体，是将由SEQ ID No.1所示氨基酸序列组成的内毒素中和肽第5位、第8位、第11位和第15位氨基酸残基中的至少两个替换为以下对应氨基酸残基而得到：第5位氨基酸残基由赖氨酸替换为丙氨酸...
- 段光杰刘友生邓军朱江
- 文献传递
- 人源N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)的原核表达及抗原性分析
- 2009年
- 目的在大肠杆菌表达系统中大量表达、纯化N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)并检测其抗原性。方法构建pET28a-NHLBP质粒,转入大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达成功后扩大培养、提取包涵体、亲和层析分离纯化,并将纯化得到的NH-LBP融合蛋白经Western blot鉴定。结果成功构建pET28a-NH-LBP表达质粒并转入BL21细菌进行诱导表达,目的蛋白以包涵体形式表达为主;经扩大培养、分离纯化产物大小与NH-LBP融合蛋白理论计算值一致,经Western blot检测具有B细胞表位。结论原核表达人源N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)是制备抗原的一种可行方便的方法,为筛选针对NH-LBP的人源性小分子抗体提供了材料。
- 陈锐刘友生朱江段光杰易维京胡川闽
- 关键词：原核表达抗原性
- 包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区基因的克隆和原核表达
- 2008年
- 目的为研究包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区功能及TREM-1分子的活化方式奠定基础。方法从正常成年昆明小鼠组织中提取细胞基因组DNA,利用PCR技术扩增出包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区基因片断。构建PET-30a(+)-CDR1原核表达载体,并转化到BL21(DE3)plysS大肠杆菌中通过IPTG诱导表达,将表达产物进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析。结果从小鼠组织中成功获得包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区的目的基因片断并定向克隆到原核表达载体中。克隆菌表达的蛋白电泳分析见一新的条带,相对分子质量在1.0×104左右,Westen Blot检测显示其有与Anti-His单克隆抗体特异性结合的能力。结论成功构建了包含CDR1在内的小鼠TREM-1保守区基因的原核表达载体,并在BL21(DE3)plysS大肠杆菌中稳定大量表达。
- 朱江刘友生段光杰
- 关键词：小鼠原核表达
- 认知结构迁移理论在病理学实习课教学中的运用和体会
- 2009年
- 朱江郭乔楠
- 关键词：认知结构迁移理论病理学实习课教学
- 内毒素结合肽模拟肽P11的体外活性研究
- 2010年
- 目的对从噬菌体展示随机肽库筛选获得的内毒素结合肽模拟肽进行体外拈抗内毒素活性鉴定。方法采用FMOC固相合成法化学合成内毒素结合肽模拟肽P11，并进行拮抗内毒素活性和细胞毒性测定。结果亲和ELISA检测显示P11与LPS有较高的亲和力，通过生长曲线和流式细胞学分析细胞周期显示P11对人U937细胞生长无明显影响。流式细胞检测显示P11呈剂量依赖性抑制FITC—LPS与人外周血单核细胞（PBMC）结合。细胞因子生成抑制实验显示10μg/mlP11可显著抑制LPS诱导PBMC和U937细胞TNF—αmRNA转录和蛋白表达。结论体外活性鉴定结果表明化学合成的模拟肽P11可抑制LPS诱导的炎性反应。
- 杨海捷段光杰朱江陈锐刘友生
- 关键词：脓毒血症模拟肽生物活性
