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一种合成的新型内毒素结合肽突变体的体内外拮抗内毒素效应初步研究被引量：1: 2012年; 目的设计构建新型内毒素结合肽突变体(mutant of endotoxin binding peptide,mEBP),并研究其体内外拮抗内毒素效应。方法采用F-moc固相合成法获得内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)及其突变体mEBP;CCK-8法检测mEBP对RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法检测mEBP对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6的影响;Western blot法检测mEBP对LPS诱导的RAW264.7细胞表达p-p38 MAPK的影响;中性红法测定mEBP对LPS诱导的RAW264.7细胞吞饮功能的影响。复制烧伤合并内毒素血症小鼠模型;检测mEBP对建模后6 h小鼠血浆中TNF-α、ALT和AST浓度的影响;检测mEBP对模型小鼠48 h生存率的影响。结果 mEBP无可见的细胞毒性;mEBP可降低LPS诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6(P<0.05);抑制p-p38 MAPK信号通路的激活;抑制RAW264.7细胞的吞饮功能(P<0.01);mEBP预处理可明显降低烧伤合并内毒素血症模型小鼠血浆中的TNF-α、ALT和AST浓度(P<0.05),提高模型小鼠48h生存率。结论 mEBP和EBP均具有明显的拮抗内毒素活性,其中mEBP拮抗活性更强。; 徐小明段光杰朱江许建华刘友生; 关键词：内毒素生物活性

分化诱导剂PMA对THP-1源性巨噬细胞膜表面受体MD-2表达的影响被引量：3: 2013年; 目的探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对诱导分化后THP-1细胞膜表面受体髓样分化蛋白-2(MD-2)表达和分布的影响及其与炎症因子TNF-α、IL-6分泌的关系。方法采用PMA梯度剂量(0、1、5、10、50、100 ng/ml)诱导THP-1细胞48 h后观察贴壁细胞形态并计算贴壁率;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测贴壁细胞膜表面受体MD-2、CD14 mRNA相对表达量,ELISA检测细胞培养上清中分泌性MD-2(sMD-2)、TNF-α和IL-6的分泌水平;进一步通过Western blot检测贴壁细胞的MD-2蛋白表达、激光扫描共聚焦显微镜观察MD-2在贴壁细胞的分布和定位。结果梯度PMA剂量(1~100 ng/ml)48 h成功诱导悬浮THP-1细胞贴壁;激光扫描共聚焦显微镜观察显示PMA诱导后MD-2主要表达于胞膜和胞浆,诱导质量浓度增加对MD-2的表达和分布均无显著影响;RT-qPCR检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后MD-2和CD14 mRNA相对表达量较诱导前均显著升高(P<0.01),诱导剂量组之间无显著差异(P>0.05);ELISA检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后,细胞培养上清中的TNF-α、IL-6分泌水平依次显著增加(P<0.01),sMD-2仅诱导前后有明显统计学差异(P<0.01);Western blot检测显示梯度剂量PMA诱导后细胞内MD-2蛋白表达较诱导前显著增加,诱导剂量组之间无显著差异。结论 1~100 ng/ml PMA均可将THP-1细胞诱导分化为成熟巨噬细胞,增加诱导质量浓度可显著提高炎症因子TNF-α、IL-6的分泌水平,但对其膜表面受体MD-2表达和分布无明显影响。; 许建华段光杰朱江徐小明刘友生; 关键词：巨噬细胞髓样分化蛋白-2

新型重组人内毒素结合肽突变体的构建及原核表达纯化: 2010年; 目的构建新型人内毒素结合肽（a new endotoxin binding peptide consisting of 25 amino acid residues，EBP25）及其突变体（mutant of EBP25，mEBP25）的原核表达重组质粒，并在大肠埃希菌中诱导表达。方法采用PCR法，扩增EBP25基因，构建pET-30-EBP25.融合表达载体并转化Ecoli DH5α扩增。重组质粒经酶切和测序鉴定后，应用快速定点突变法将EBP25第2位缬氨酸和第5位谷氨酰胺所对应碱基均替换成赖氨酸所对应的碱基，突变后重组质粒再经测序鉴定后，将二者转化至E．coli BL21（DE3）PlysS后经IPTG诱导表达，表达产物采用Western印迹进行鉴定后，用His—Tag亲和层析对融合蛋白进行纯化。结果两次测序结果显示人EBP25，和mEBP25重组序列和理论设计序列完全一致后，经IPTG诱导表达获得目的融合蛋白，通过SDS—PAGE电泳、Western印迹证实蛋白表达的特异性，并对蛋白进行纯化，获得EBP25和mEBP25融合蛋白。结论构建、表达纯化了EBP25和mEBP25融合蛋白，为进一步研究其中和内毒素／月旨多糖活性奠定了基础。; 许成燕刘友生段光杰朱江徐小明; 关键词：定点突变原核表达纯化

合成的MD-2模拟肽体外抑制LPS诱导的过度炎症反应: 背景与目的抑制Toll样受体4(TLR4)信号通路的过度激括是防治LPS诱导的脓毒血症的有效治疗策略。TLR4信号通路的激活受到脂多糖结合蛋白(LBP)、CD14、髓样分化蛋白-2(MD-2)和TLR4的共同调控,其中M...; 段光杰刘友生朱江许成燕徐小明; 文献传递

在制备防治脂多糖诱导的急性肝损伤的药物中的应用: 本发明涉及化合物的新应用，特别涉及<Image file="201010201166.1_AB_0.GIF" he="23" imgContent="undefined" imgFormat="GIF" wi="75"/...; 段光杰刘友生朱江许成燕徐小明; 文献传递

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