李慧婧
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 灵杆菌非特异性核酸酶的原核表达、纯化及活性分析被引量：7
- 2011年
- 以灵杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增非特异性核酸酶(Non-specific nuclease,NU)基因,并克隆到pMAL-c4X载体上构建重组表达载体pMAL-c4X-NU。经测序及BLASTN发现其与灵杆菌Serratia marcescens核酸酶基因的同源性为97%。将构建的表达载体pMAL-c4X-NU转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导实现了胞内表达78 kDa的麦芽糖结合蛋白-NU融合蛋白(Maltose-binding protein-NU,MBP-NU),其最佳诱导表达条件为37℃,0.75 mmol/L IPTG诱导1.5 h。用Amylose resin纯化得到了目的蛋白。活性检测表明MBP-NU具有同时降解DNA和RNA的活性,在37℃、pH 8.0时活性最高,比活力为1.11×106 U/mg,目标蛋白的纯化效率可达10.875 mg/L。纯化的目标蛋白中无蛋白酶活性存在。0.5 mmol/L乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、1 mmol/L苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)以及150 mmol/L KCl对MBP-NU的活性几乎无影响,因此MBP-NU可作为蛋白质纯化过程中核酸的高效降解酶。
- 陈鹏杨海艳李慧婧杨龙雨李学俊
- 关键词：融合蛋白
- 苦荞蔗糖合酶的原核表达及纯化
- 苦荞是一种具保健功能的作物,对于高血压和糖尿病有很好的改善作用,其富含的膳食纤维和荞麦蛋白能够减少肠道对于胆固醇的吸收、帮助中性脂排泄。蔗糖合酶是高等植物体内与蔗糖代谢密切相关的三类酶之一,它具有影响果实品质、参与细胞纤...
- 李慧婧
- 关键词：苦荞蔗糖合酶原核表达纯化
- 文献传递
