杨慧盈
- 作品数：17 被引量：43H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关基因的功能研究
- 2013年
- 目的研究鼠疫耶尔森菌pCD1质粒上编码的假定蛋白YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16与pCD1质粒编码的Ⅲ型分泌系统（T3SS）在功能上的相关性。方法采用λ-Red重组系统构建鼠疫耶尔森菌YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因的突变株，通过测定分别培养于26℃下有钙、37℃下无钙和有钙TMH培养基中的以上3种突变菌株及野生菌株的生长曲线，分析突变菌株的低钙响应情况；在26℃和37℃条件下分别培养鼠疫菌突变菌株，并提取总RNA，采用定量PCR分析3种基因的转录水平及其对温度的依赖性；用β-内酰胺酶报告分子的方法分析3种基因的突变对效应蛋白转运的影响。结果在26℃和37℃低钙培养条件下，突变菌株△YpCD1．08、AYpCD1．09、△YpCD1．16的生长曲线与野生型菌株一致，表明其低钙响应正常。YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因在37℃与26℃转录水平的比值分别为2．3±0．3、2．3±0．5、3．2±0．7，表明这3个基因在鼠疫菌中均有转录，且其转录水平受温度调控，与T3SS基因转录水平的温度依赖性一致。β-内酰胺酶报告分子实验结果表明，突变菌株△YpCD1．08在140min时477与520nm波长的发光强度的比值为2．5，而野生型菌株仅为1．8，表明△YpCD1．08菌株对YopE的转运能力要高于野生株，而其他两个突变株与野生株类似。结论YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因有可能是T3SS的新成员，假定蛋白YpCDI．08可能参与效应蛋白YopE的转运及其调控。
- 张婷婷彭广能杨慧盈谭亚芳崔明全韦娜韩伟杜宗敏
- 关键词：耶尔森菌鼠疫毒力蛋白相互作用
- 梭菌属神经毒素的基因鉴定与分型
- 2006年
- 目的：建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法：根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列，综合应用多种生物学软件与在线分析平台，设计特异性及通用检测引物，对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增，验证扩增反应的特异性、通用性、灵敏度及重复性。结果与结论：设计了针对A，B，E，F型肉毒毒素、破伤风毒素基因轻链毒性活性区的5对特异引物，以及重链跨膜区和结合区的一对通用引物（BonAB—P01／P02，BonB-P01／P02，BonE-P01／P02，BonF-P01／P02，TET-P01／P02，TY-P01／P02）。对各型神经毒素进行特异性扩增并在型间进行交叉实验，检测特异性良好，没有交叉反应；通用扩增结果显示均得到1100bp大小的条带。目前此检测方法灵敏度可达到（1～3）×10^3个菌。该检测方法特异性强，灵敏度高，可以用于梭菌属神经毒素基因的快速筛查与鉴定分型。
- 杨慧盈王慧包士中史晶荫俊
- 关键词：PCR检测特异性灵敏度
- 不同培养条件下鼠疫菌PhoP/PhoQ的自调控模式研究
- 2017年
- 目的研究鼠疫耶尔森菌PhoP/PhoQ在不同培养条件下的自调控关系。方法 PCR扩增YPO1635启动子区DNA序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,构建LacZ重组质粒,进而将该重组质粒转入鼠疫菌野生株(WT)和phoP突变株(ΔphoP)中,通过测定二者中β-半乳糖苷酶活性差异来判定PhoP对YPO1635的调控关系。提取WT和ΔphoP的总RNA,采用引物延伸实验研究phoP的转录起始位点,并根据产物的丰度判断PhoP对phoP的调控关系。结果 LacZ结果表明,在低Mg^(2+)TMH和BHI培养基中,PhoP能激活YPO1635的转录,而在高Mg^(2+)TMH中,PhoP对YPO1635的转录无调控作用。引物延伸结果显示,phoP有两个转录起始位点G(-90)和A(-118)(分别记为P1和P2,翻译起始位点为+1),在低Mg^(2+)TMH中,PhoP能激活P1的转录,而对P2无调控作用;在高Mg^(2+)TMH中,PhoP对二者均无调控作用;在BHI中,PhoP对二者的转录均具抑制作用。结论PhoP/PhoQ的自调控关系随周围环境的变化而表现出不同的模式,这有利于鼠疫菌快速适应外界生存环境的改变。
- 张义全方海红刘磊黄新祥杨瑞馥周冬生杨慧盈
- 关键词：鼠疫耶尔森菌PHOP
- 院内感染细菌多药耐药的质粒组学研究
- 周冬生殷喆冯娇张德福杨文慧杨慧盈王洁
- 手持式液体气溶胶肺递送装置
- 本发明提供了一种手持式液体气溶胶肺递送装置。该装置包括：注射器，其具有用于容装液体样品的注射筒和设置于注射筒内的活塞；递送管，其进口连通于注射筒的出口，且递送管的出口端配置成插入动物气管；和喷雾装置，喷雾装置安装于递送管...
- 杨慧盈 周冬生 郑劲林 刘玉杰 杨文慧 殷喆 王洁
- 文献传递
- 鼠毒素作为粘膜免疫佐剂的应用及含有该佐剂的鼠疫菌粘膜疫苗
- 本发明公开了一种鼠毒素的新用途，即作为粘膜免疫佐剂的应用。将含有鼠毒素粘膜免疫佐剂的鼠疫菌粘膜疫苗通过滴鼻的方式免疫BALB/c小鼠，能显著提高血清中针对鼠疫菌保护抗原产生的IgG和IgA抗体水平，同时也能提高肺灌洗液中...
- 王效义杨慧盈杨文慧周亚洲范艳晓冯娜周冬生杨瑞馥
- 文献传递
- 拟核结合蛋白H-NS调控副溶血弧菌vp1667的转录被引量：1
- 2017年
- 目的研究副溶血弧菌H-NS对vp1667的转录调控机制。方法提取副溶血弧菌hns突变株(Δhns)和野生株(WT)的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法验证H-NS对vp1667的转录调控关系;采用引物延伸实验研究vp1667的转录起始位点,并根据产物的丰度判断H-NS对vp1667的调控关系;将vp1667的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒转入Δhns和WT中获得Lac Z菌株。通过Lac Z报告基因融合实验研究H-NS对vp1667的调控关系。PCR扩增vp1667的启动子区序列并纯化His-H-NS蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)研究His-H-NS对vp1667启动子区是否具有直接的结合作用;采用DNaseⅠ足迹实验研究HisH-NS对vp1667启动子区的具体结合位点。结果与结论引物延伸结果显示,vp1667只有一个转录起始位点T(-28)(翻译起始位点为+1),且其转录活性受H-NS的抑制;EMSA和DNaseⅠ足迹实验结果显示,His-H-NS不能结合到vp1667的启动子区,表明H-NS只能间接抑制vp1667的转录。
- 詹明华张伟周冬生黄新祥杨慧盈殷喆张义全
- 关键词：副溶血弧菌H-NS转录调控
- 院内感染细菌多药耐药的质粒组学研究
- 周冬生殷喆冯娇张德福杨文慧杨慧盈王洁
- 产碳青霉烯酶KPC-2的肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌的分离与耐药性研究被引量：2
- 2015年
- 目的研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌(KPN)和1株铜绿假单胞菌(PAE)对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法利用种属特异基因PCR扩增、MALDI-TOF质谱技术及细菌16S r DNA测序鉴定细菌种属;采用VITEK 2 Compact系统检测细菌对各类抗生素的最低抑菌浓度(MIC);应用改良型Carba NP法、质粒抽提、电转化实验、耐药基因PCR扩增及测序,分析细菌编码的β-内酰胺酶基因。结果临床分离的1株KPN和1株PAE及其相应的转化子均产A类酶,PCR扩增测序显示PAE含有blaKPC-2型碳青霉烯酶编码基因,KPN含有blaKPC-2型碳青霉烯酶编码基因和blaSHV型超广谱β-内酰胺酶编码基因。二者的转化子只有blaKPC-2编码基因。结论临床分离的耐碳青霉烯类抗生素的KPN和PAE均携带A类2f组型碳青霉烯酶blaKPC-2编码基因且位于质粒上,而KPN所含的超广谱β-内酰胺酶blaSHV编码基因可能位于不同质粒上,或存在于该菌的染色体上。
- 胡南霞殷喆李艳君杨慧盈杨文慧王洁周冬生马聪
- 关键词：肺炎克雷伯菌铜绿假单胞菌质粒
- 院内感染细菌多药耐药的质粒组学研究
- 周冬生殷喆冯娇张德福杨文慧杨慧盈王洁
