步得志
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：河北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省教育厅科学技术研究计划河北省生物工程重点学科资助河北省科学技术研究与发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人超氧化物歧化酶包涵体的复性和纯化被引量：5
- 2008年
- 当工程菌接种量为3%～5%,菌体密度(D600)达0.4～0.6,并于42℃诱导3～5h时,目的蛋白表达量约为总蛋白的30%。采用透析法使包涵体复性,经金属螯合亲和色谱和凝胶色谱两步纯化后,获得了纯度约为90%、比活力达7300u/(mg蛋白)的重组人超氧化物歧化酶。
- 刘建荣赵晓瑜步得志李宏博静天玉
- 关键词：发酵复性纯化
- 国产和进口培养基发酵培养重组人SOD工程菌的比较研究被引量：2
- 2007年
- 目的以国产培养基替代昂贵进口培养基发酵培养重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)工程菌。方法利用国产LB培养基对自行构建的含重组质粒pTK-rhSOD的基因工程菌E.coliDH5α通过摇瓶进行发酵培养,以SDS-PAGE分析方法考察不同菌体接种量(1%～5%)、菌体生长密度波长600nm处吸光度(A600)值、诱导时间(1～8h)、氨苄青霉素(Amp)浓度(终浓度150、200、250μg/ml)及加入时机(分别于接种前和诱导前加入)、摇瓶装液量(10%～40%)和诱导温度(42、43、44、45℃)对rhSOD表达的影响,优选最适培养条件,并与进口LB培养基进行比较。结果对于国产LB培养基,采用3%～5%接种量,菌体密度生长至A600达0.38～0.63,诱导前补加Amp由初始的100μg/ml至200μg/ml,于42～44℃诱导3～5h,rhSOD表达量可达30%;对于进口LB培养基,采用2%接种量,菌体密度生长至A600达0.55～0.93,诱导前补加Amp由初始的100μg/ml至150μg/ml,于42～43℃诱导2～4h,rhSOD表达量可达30%。两种培养基摇瓶装液量对rhSOD的表达均没有明显影响。结论国产LB培养基经条件优化后可获得与进口培养基相同的目的蛋白表达量,可以替代昂贵的进口产品,为rhSOD进一步规模化生产降低发酵成本提供了实验依据。
- 刘建荣赵晓瑜步得志顾雅君静天玉
- 关键词：超氧化物歧化酶重组蛋白质类培养基
