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排序方式：

钠泵抑制物噬菌体单链抗体库的构建被引量：1: 2001年; 目的　应用噬菌体展示技术构建钠泵抑制物单链抗体库 .方法　用 OUA- OVA(ouabain- ovalbumin)免疫小鼠 ,取脾脏 ,分离淋巴细胞 ,提取 m RNA,逆转录成 c DNA第一链 ,用简并引物经 PCR分别扩增轻、重链抗体库 ,经重叠延伸PCR由 L inker将轻、重链拼接成 Sc Fv(单链抗体 ) ,用 RS引物以 Sc Fv为模板进行第 2次 PCR,同时在 5 及 3 端分别加上 Sfi I,N ot I酶切位点 .经 Sfi I,N ot I酶切后 ,在 T4连接酶的作用下将 Sc Fv与 p CANTAB 5 E噬菌粒连接 ,电转化进入TG1大肠杆菌 ,挑取 12个单菌落提取质粒用 Eco R 和 H ind 进行酶切鉴定 ,后经 M13KO7辅助噬菌体拯救 ,离心收集上清即为全套 Sc Fv基因的噬菌体表面展示文库 .结果　以OU A- OVA免疫小鼠 ,检测血清中抗体效价可达 (1∶ 2×10 6 ) ,用通用引物分别扩增出轻、重链片段的大小为 32 5 bp和 34 0 bp,将两者拼接得到约 72 0 bp大小的单链抗体库 ,以8× 10 1 1 的转化效率转染 TG1细胞 ,Eco R 和 H ind 酶切后 ,12个单菌落所提噬菌粒 DNA中有 10个切出了约为 2 .1kb的目的条带 ,所构建的噬菌体抗体库库容量约为 1.2× 10 8.经 M13KO7超感染后 ,测噬斑滴度为 9× 10 1 4 pfu· L- 1 .结论　成功地构建了钠泵抑制物噬菌体单链抗体库 .; 原卫清王颢吕卓人陈萍韩骅牛利国; 关键词：噬菌体展示抗体

抗人肝癌单链抗体的基因克隆和分泌型表达被引量：3: 1998年; 应用ＲＴＰＣＲ技术，从分泌抗人肝癌单克隆抗体（ｍＡｂ）的杂交瘤细胞ＨＡｂ１８中，扩增出抗体ＶＨ和ＶＬ基因，并测序。计算机分析表明，ＶＨ和ＶＬ均符合小鼠抗体可变区的特征，为功能性重排的抗体可变区基因。用（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接肽基因，将ＶＨ和ＶＬ连接成ＳｃＦｖ基因，并进行序列测定，结果表明，ＶＨ，ＶＬ，ｌｉｎｋｅｒ拼接正确，基因全长为７２６ｂｐ。用噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ在大肠杆菌中表达了可溶性的ＳｃＦｖ融合蛋白，经流式细胞仪分析表达产物可特异地与肝癌细胞结合。; 牛利国陈志南苏成芝药立波刘新平王国华杨敏; 关键词：单链抗体克隆肝肿瘤

suc2基因的克隆及在酵母基因组中的定位突变被引量：2: 2000年; 目的　克隆酿酒酵母的蔗糖转换酶基因 (suc2 ) ,并定位突变酵母基因组中的 suc2基因以获得无蔗糖转换酶表达的酵母品系 .方法　用 PCR法从酵母 Y190基因组中扩增出suc2的成熟肽基因片段 ,克隆后测序 .将色氨酸合成酶 (TRP)基因片段插入 suc2基因中 ,构建成用于同源重组的 suc2基因定位突变载体 .导入酵母 Y190 ,用营养缺陷筛选出 suc2基因突变的克隆 .用 PCR扩增并克隆突变后的 suc2基因 ,用序列分析确定同源重组的发生 .结果　用 PCR从酵母基因组DNA中扩增出大小约 1.5 kb的 suc2基因片段 ,序列测定表明除 5 85位有一点突变 (AAC变为 AAT)外 ,所得 suc2基因与文献报道相同 ;构建的定位突变载体导入酵母细胞后 ,得到4株营养型符合的突变体 ;PCR表明这些突变体中均有 suc2基因的同源重组 ;取其中 1株的 PCR产物进行序列测定证实了同源重组的发生 .结论　克隆了正确的编码蔗糖转换酶成熟肽的 suc2基因片段 ;用同源重组方法在酵母 Y190的基因组中定位突变了; 孙强王冀姝陈萍柳天平牛利国韩骅苏成芝; 关键词：同源重组克隆定位突变

逆转录制备cDNA探针对人胃癌MGC80—3细胞系多种癌基因转录的同步检测被引量：1: 1991年; 本文报道利用人胃癌MGC80-3细胞系总polyA ^+RNA,逆转录制备cDNA探针,并与多种克隆癌基因的质粒DNA斑点杂交,同步检测倍增生长的人胃癌MGC 80-3细胞系不同原癌基因转录本的丰度。结果发现,V-sis、c-erbB-2、V-abl、H-ras、K-ras和c-myc质粒DNA的斑点出现阳性杂交信号,其中V-sis、c-erbB-2的斑点信号最强。说明人胃癌MGC80-3细胞系中,多种原癌基因协同地进行表达。; 毛积芳李树凯牛利国万芷芳; 关键词：CDNA探针癌基因斑点杂交

肝癌特异性单克隆抗体HAb18可变区基因的克隆和序列测定: 1998年; 鉴于基因工程抗体具有分子小、免疫原性低，不被细胞受体结合，在体内成象定位检查时本底低，图像清晰，能进入实体瘤周围微循环，在治疗实体瘤时较完整抗体分子的效能高等优点。我们从肝癌特异性ｍＡｂＨＡｂ１８中克隆了其轻、重链可变区基因，并测定了其核苷酸序列，为...; 牛利国陈志南苏成芝药立波; 关键词：肝肿瘤单克隆抗体 HAB18 可变区基因克隆

LIM结构域蛋白KyoT基因剔除小鼠的建立和表型分析被引量：2: 2001年; KyoT为一LIM结构域蛋白,可与转录因子RBP-Jk相互作用而调节其转录活性.构建了KyoT基因剔除载体,转染小鼠胚胎干细胞(ES细胞)后得到同源重组的ES细胞克隆.将此ES细胞注射入小鼠的囊胚泡得到嵌合小鼠,再经小鼠培育得到KyoT基因被剔除的小鼠.纯合子KyoT基因剔除小鼠不能表达有功能的KyoT蛋白.表型分析表明纯合子KyoT基因剔除小鼠腹腔B1B细胞数增加,提示KyoT可能参与B淋巴细胞的发育.; 韩骅王冀姝李荣牛利国孙强周鹏; 关键词：基因剔除 B淋巴细胞转录因子 DNA结合蛋白

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牛利国