王黎霞
- 作品数：87 被引量：182H指数：7
- 供职机构：北京农业职业学院更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 鸡柔嫩艾美耳球虫对宿主细胞凋亡的影响被引量：5
- 2011年
- 为了研究柔嫩艾美耳球虫入侵与宿主细胞之间的相互关系,用纯化的柔嫩艾美耳球虫子孢子与MDBK细胞共培养,使球虫子孢子入侵MDBK(Madin-Darby bovine kidney)细胞,用终浓度6%乙醇进行凋亡诱导,通过Annex-in V/PI双荧光染色法和流式细胞术(FCM)对MDBK细胞凋亡水平进行检测。试验结果证明子孢子入侵细胞后,有子孢子入侵的细胞凋亡诱导显著被抑制(P<0.05),而未有子孢子入侵的细胞相继被凋亡诱导剂诱导凋亡。进一步揭示柔嫩艾美耳球虫子孢子具有独特的机制来延长宿主细胞的存活时间来确保它们能在细胞中存活并发育。
- 邓家俭王黎霞安健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫细胞凋亡ANNEXINFCM
- 间接共培养下柔嫩艾美耳球虫对MDBK细胞凋亡抑制的研究
- 2017年
- 为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)在间接共培养条件下对于宿主细胞凋亡的抑制作用,采用显微镜、分光光度法研究柔嫩艾美耳球虫与马-达氏牛肾细胞(MDBK细胞)间接共培养时对其凋亡的影响。将柔嫩艾美耳球虫纯化的裂殖子与MDBK细胞通过Transwell小室间接共培养;分别在共培养3,6,9,12 h时测量细胞培养体系中的凋亡因子Caspase2,Caspase3,Caspase6,Caspase8,Caspase9的活性。结果表明,测定的共培养组的5种凋亡因子的水平均低于对照组,说明在间接共培养开始到12 h时,MDBK细胞的凋亡受到了抑制,可以推断球虫裂殖子可能会分泌抑制凋亡的物质作用于宿主细胞,而究竟是何种物质或作用机制使得宿主细胞凋亡受到抑制仍有待进一步的研究。
- 郑新枫王黎霞赵晨璐王静张建军安健
- 关键词：球虫艾美耳属裂殖子凋亡抑制
- 柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella分离株对四种抗球虫药敏感性检测
- 本实验旨在探究北京地区三种柔嫩艾美尔球虫分离株S1、B4、DZ对磺胺对甲氧嘧啶二甲氧苄啶(预混剂)、磺胺氯吡嗪钠(可溶性粉)、地克珠利(溶液)、托曲珠利(溶液)四种药物的敏感性.实验从鸡只12日龄时开始,将鸡只分为16组...
- 王静王黎霞李畅许中衎乔尚怡郑新枫张建军安健
- 关键词：柔嫩艾美尔球虫分离株抗球虫药
- 鸡急性马杜拉霉素中毒的实验病理学研究
- 2001年
- 以 2 8日龄鸡为试验动物 ,在饲料中添加不同剂量马杜拉霉素 ( 0、5、6、7、8、9和 10mg/kg) ,对实验性马杜拉霉素中毒鸡的临床症状、剖检变化和组织病理学变化进行观察。结果马杜拉霉素急性中毒鸡表现腹泻 ,食欲下降 ,渴欲增加 ,翅膀下垂 ,腿无力或麻痹 ;剖检可见病鸡肝淤血、轻度肿胀、呈微黄色 ;病理组织学变化为肝脂肪变性及心肌和腿肌出血。
- 安健王黎霞
- 关键词：马杜拉霉素中毒实验病理学
- 柔嫩艾美耳球虫交叉抗药性试验被引量：3
- 2005年
- 以雏鸡为试验对象,以抗球虫指数(ACI)为判断指标,检测5 mg/kg马杜霉素,70 mg/kg盐霉素,1 mg/kg 地克珠利对抗盐霉素株、抗地克珠利株和实验室保存的敏感株的控制效果。结果表明,马杜霉素对3 个虫株都有很好的抑杀效果,地克珠利也可有效地控制抗盐霉素株,同时,盐霉素也可有效地控制抗地克珠利株,说明盐霉素和地克珠利2种药物之间没有交叉抗药性。
- 王黎霞安健张永红杨静夏茂华曲京红
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫抗药性盐霉素马杜霉素
- 鸡柔嫩艾美耳球虫HP基因的真核表达及其对鸡巨噬细胞凋亡的影响
- 2021年
- HP基因编码蛋白是本实验室近期发现的一种鸡柔嫩艾美耳球虫的外分泌蛋白。本试验旨在构建重组荧光真核表达质粒pEGFP-HP,将其转染至细胞内,以此来分析HP基因对宿主细胞凋亡的影响。以柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子cDNA为模板进行PCR扩增,然后克隆至荧光真核表达质粒pEGFP,构建重组荧光真核表达质粒pEGFP-HP,将其转染至鸡巨噬细胞(HD11),42 h后采用流式细胞术检测宿主细胞凋亡情况。菌液PCR鉴定和测序鉴定结果显示,重组荧光真核表达载体pEGFP-HP构建成功。流式细胞术检测发现,pEGFP-HP重组质粒组的早期凋亡率显著高于pEGFP空质粒组和空白对照组(P<0.01)。结果表明柔嫩艾美耳球虫HP基因会促进HD11的细胞凋亡,尤其是早期细胞凋亡。本试验为进一步研究HP基因的生物学功能及其作用机制提供了依据,且将HP基因从此命名为柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导基因(IA)。
- 许中衎王黎霞张榕珍张一弛芳卉潘晨帆张建军安健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫
- 间接血凝检测鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体方法的建立被引量：1
- 2016年
- 为了快速检测免疫球虫后宿主血清中特异性抗体的水平,以DE-52层析纯化子孢子、裂殖子,超声裂解获取可溶性蛋白;原核表达EtMIC4-N蛋白,致敏戊二醛醛化后的红细胞,以人工免疫柔嫩艾美耳球虫后分离的血清为阳性血清,以SPF鸡分离的血清为阴性血清,建立柔嫩艾美耳球虫间接血凝试验。结果显示,稀释度为1:2万鞣酸处理戊二醛醛化后的红细胞,使用100μg/mL可溶性裂殖子、子孢子蛋白或12.5μg/mL表达的重组蛋白EtMIC4-N均可以与阳性血清发生反应(可达1:1024),与鸡的阴性血清及大肠杆菌病的阳性血清无反应.与堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫阳性血清有微弱反应(不超过1:8)。试验证明,该方法具有简单、方便、快捷、灵敏等优点。
- 王黎霞刘新月宋丽聪赵晨璐张建军安健
- 关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫间接血凝试验
- 柔嫩艾美耳球虫裂殖子对侵入细胞凋亡抑制通路的研究被引量：6
- 2016年
- 为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)裂殖子入侵宿主细胞后对凋亡诱导的抑制通路,将纯化的裂殖子与牛肾传代细胞(MDBK细胞)共培养1.5 h。用含6%乙醇的完全培养基诱导细胞凋亡2.5 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用标准试剂盒测定Cyto C,Caspase8,Caspase9,Caspase3的活性。流式细胞术结果显示,入侵裂殖子的细胞在诱导凋亡后其凋亡率为4.57%,而未感染的细胞其凋亡率达到23.69%,二者差异显著(P<0.05),诱导凋亡的MDBK细胞早期凋亡率为19.50%,晚期凋亡率为4.19%,而感染裂殖子后诱导凋亡的MDBK细胞其早期凋亡率为3.53%,晚期凋亡率为1.04%,差异显著(P<0.05)。结果表明,裂殖子的入侵不但可以抑制细胞凋亡,还可以延缓细胞进入早期凋亡的时间。试剂盒结果表明,裂殖子使Cyto C,Caspase8,Caspase9的活性下降,而Caspase3没有变化。根据上述结果初步判断,E tenlla裂殖子抑制MDBK细胞的凋亡是通过线粒体通路。
- 宋丽聪王黎霞刘新月赵晨璐张建军安健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫裂殖子细胞凋亡通路
- 柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白序列分析与真核表达被引量：1
- 2021年
- [目的]为了获得重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白。[方法]根据Genebank设计柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因特异引物,RT-PCR扩增该基因,经Blast与Genebank公布的该基因比对,而后构建该蛋白的真核表达载体pPICZαA/EtMIC4N,用毕赤酵母表达系统小规模表达该蛋白,利用SDS-PAGE和Western Blot对表达的蛋白鉴定,再以摇瓶的方式进行大规模表达。[结果]RT-PCR扩增获得柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因序列,大小为773 bp,经比较,与目的基因开放阅读框相似度99.5%,其中有4个碱基发生突变,1个gap。PCR证实成功构建真核表达载体,电转后的毕赤酵母用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot发现在上清中有45 kD的条带,说明成功表达该蛋白,且该表达系统可持续获得较高纯度的目的蛋白,以摇瓶的方式进行大规模表达,每升能够纯化到约10 mg的目的蛋白。[结论]毕赤酵母成功表达重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白,为该蛋白免疫原性的研究奠定基础。
- 王黎霞张鹏张建军安健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫毕赤酵母真核表达
- 巨型艾美耳球虫裂殖子的分离和纯化被引量：1
- 2021年
- [目的]为了获得纯净的巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)裂殖子。[方法]对25日龄白羽肉鸡口服接种3×105巨型艾美耳球虫卵囊,在其感染后48~124 h取十二指肠末端到卵黄蒂后5 cm处肠段,收集裂殖子并计数,确定分离裂殖子的最佳时间;将所取肠段均分为5段,分别对裂殖子进行计数,筛选分离裂殖子的最佳肠段;通过DEAE-52纤维素柱层析对裂殖子进行纯化并分管收集,确定收集较高纯度裂殖子的最佳时间。[结果]在感染后84 h所收集的裂殖子最多;此外,从空肠中后段及空肠末端肠段中分离出较多数量的裂殖子,占总数的62%以上;通过DEAE-52纤维素柱层析获得44 mL纯度较高的裂殖子。[结论]分离巨型艾美耳球虫裂殖子的最佳时间为感染后84 h,最佳肠段为空肠后段,收集1~44 mL洗脱液能够获得纯度较高的裂殖子。
- 张榕珍王黎霞郭许情张健张天宇张建军安健
- 关键词：巨型艾美耳球虫裂殖子纯化
