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间接血凝检测鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体方法的建立被引量：1: 2016年; 为了快速检测免疫球虫后宿主血清中特异性抗体的水平,以DE-52层析纯化子孢子、裂殖子,超声裂解获取可溶性蛋白;原核表达EtMIC4-N蛋白,致敏戊二醛醛化后的红细胞,以人工免疫柔嫩艾美耳球虫后分离的血清为阳性血清,以SPF鸡分离的血清为阴性血清,建立柔嫩艾美耳球虫间接血凝试验。结果显示,稀释度为1:2万鞣酸处理戊二醛醛化后的红细胞,使用100μg/mL可溶性裂殖子、子孢子蛋白或12.5μg/mL表达的重组蛋白EtMIC4-N均可以与阳性血清发生反应(可达1:1024),与鸡的阴性血清及大肠杆菌病的阳性血清无反应.与堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫阳性血清有微弱反应(不超过1:8)。试验证明,该方法具有简单、方便、快捷、灵敏等优点。; 王黎霞刘新月宋丽聪赵晨璐张建军安健; 关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫间接血凝试验

柔嫩艾美耳球虫裂殖子对侵入细胞凋亡抑制通路的研究被引量：7: 2016年; 为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)裂殖子入侵宿主细胞后对凋亡诱导的抑制通路,将纯化的裂殖子与牛肾传代细胞(MDBK细胞)共培养1.5 h。用含6%乙醇的完全培养基诱导细胞凋亡2.5 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用标准试剂盒测定Cyto C,Caspase8,Caspase9,Caspase3的活性。流式细胞术结果显示,入侵裂殖子的细胞在诱导凋亡后其凋亡率为4.57%,而未感染的细胞其凋亡率达到23.69%,二者差异显著(P<0.05),诱导凋亡的MDBK细胞早期凋亡率为19.50%,晚期凋亡率为4.19%,而感染裂殖子后诱导凋亡的MDBK细胞其早期凋亡率为3.53%,晚期凋亡率为1.04%,差异显著(P<0.05)。结果表明,裂殖子的入侵不但可以抑制细胞凋亡,还可以延缓细胞进入早期凋亡的时间。试剂盒结果表明,裂殖子使Cyto C,Caspase8,Caspase9的活性下降,而Caspase3没有变化。根据上述结果初步判断,E tenlla裂殖子抑制MDBK细胞的凋亡是通过线粒体通路。; 宋丽聪王黎霞刘新月赵晨璐张建军安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫裂殖子细胞凋亡通路

鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体EtMIC4-N蛋白BAS-ELISA检测方法的建立: 鸡球虫病是由原生动物门艾美耳属的寄生虫感染鸡所引起的一种呈全球性分布的痢疾性疾病,可造成鸡只的生长发育受阻、生产性能下降甚至死亡等危害,是影响禽类养殖经济效益最大的疾病之一,每年造成的损失超过30亿美元。为了检测柔嫩艾美...; 刘新月王黎霞宋丽聪赵晨璐张建军安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫特异性抗体; 文献传递

鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体EtMIC4-N蛋白BAS-ELISA检测方法的建立: 鸡球虫病是由原生动物门艾美耳属的寄生虫感染鸡所引起的一种呈全球性分布的痢疾性疾病,可造成鸡只的生长发育受阻、生产性能下降甚至死亡等危害,是影响禽类养殖经济效益最大的疾病之一,每年造成的损失超过30 亿美元。为了检测柔嫩艾...; 刘新月王黎霞宋丽聪赵晨璐张建军安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫特异性抗体

鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体EtMIC4-N蛋白BAS-ELISA检测方法的建立被引量：4: 2015年; 为了检测柔嫩艾美耳球虫感染鸡血清中特异性抗体水平,原核表达纯化EtMIC4-N蛋白,采用免疫印迹法确定其反应原性,再以纯化后的蛋白为包被抗原,以生物素标记的羊抗鸡IgG为二抗,以HRP结合链霉亲和素为酶标抗体,建立了检测柔嫩艾美耳球虫抗体的BAS-ELISA方法。经检测,EtMIC4-N蛋白最佳包被浓度为7μg/mL,最适封闭液为1%BSA,最佳血清稀释度为1:80,二抗稀释度为1:100000,酶标抗体稀释度为1:100000,最适显色时间为15min,组内和组间变异系数均小于10%。通过动物感染试验验证,结果表明建立的BAS-ELISA可以用于检测柔嫩艾美耳球虫特异性抗体的检测,并且具有简便,快速,灵敏,成本低等特点。; 刘新月王黎霞宋丽聪赵晨璐张建军安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫特异性抗体 ET

鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体EtMIC4-N蛋白BAS-ELISA检测方法的建立: 鸡球虫病是由原生动物门艾美耳属的寄生虫感染鸡所引起的一种呈全球性分布的痢疾性疾病,可造成鸡只的生长发育受阻、生产性能下降甚至死亡等危害,是影响禽类养殖经济效益最大的疾病之一,每年造成的损失超过30亿美元。为了检测柔嫩艾美...; 刘新月王黎霞宋丽聪赵晨璐张建军安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫特异性抗体

间接血凝检测鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体方法的建立: 为了能够快速检测免疫球虫后宿主血清中特异性抗体的水平，原核表达并纯化EtMIC4-N蛋白，采用免疫印迹法确定其反应原性，并用其作为抗原致敏戊二醛醛化后的红细胞，以人工免疫柔嫩艾美耳球虫后分离的血清为阳性血清，以SPF鸡分...; 刘新月王黎霞宋丽聪赵晨璐张建军安健; 关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫间接血凝试验

鸡球虫EtMIC4-N重组蛋白AbISCO^(■)-100疫苗免疫效果被引量：2: 2013年; 为了研究鸡球虫EtMIC4-N重组蛋白AbISCO-100疫苗免疫效果,将320只鸡分为8组,用真核表达的EtMIC4-N融合蛋白以1,5,10μg三种剂量单独免疫以及该三种剂量蛋白分别与50μg AbISCO-100佐剂结合后进行免疫,设非感染非免疫组和感染非免疫组作为对照。鸡只7日龄时腿部肌肉注射进行首次免疫,14日龄时每组随机取12只,分离盲肠淋巴细胞,标记特异性抗体,用流式细胞术检测CD4+T,CD8+T细胞分别占盲肠淋巴细胞的百分比,剩余鸡按一免相同的量进行二免。21日龄时每组随机取12只,分离盲肠淋巴细胞,剩余鸡经口感染Eimeria tenella河北野毒株8×104个卵囊(非感染非免疫组除外),称重。攻虫后7d,称重,盲肠病变计分,并计算卵囊下降率。结果表明:与其余各组相比,10μg蛋白+佐剂组CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分率显著升高(P<0.05);与感染非免疫组相比,10μg蛋白+50μg佐剂组增重显著升高(P<0.05),病变计分、OPG值显著降低(P<0.05)。说明10μg蛋白+50μg AbISCO-100组抵抗球虫感染的效果最好。; 周赛王黎霞张莹刘新月张成坤张建军安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫免疫保护

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刘新月