田拥军
- 作品数：77 被引量：260H指数：7
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用
- 2007年
- 目的 制备抗乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）的单克隆抗体，检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式。用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法，并做初步评价。方法 用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备抗．HBs单克隆抗体。检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性。筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3，建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法。结果 制备了14株抗-HBs单抗。经过初筛，有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件，检测HBsAg的灵敏度较好，检测变异HBs舷的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒。结论 用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。
- 田拥军张振华张正茂李磊覃莉龚劲松杨东亮陆蒙吉
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原单克隆抗体
- 湖北地区乙型肝炎病毒的基因型分布及其临床相关性
- 目的了解湖北地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布及其与临床的相关性。方法选择湖北地区HBV DNA阳性的慢性HBV感染患者190例,其中表面抗原携带者(ASC)52例、慢性肝炎56例、重型肝炎32例、肝硬化22例和原发...
- 雷延昌郝友华田拥军孟忠吉王宝菊田德英赵西平杨东亮
- 文献传递
- HBV G145R突变对S蛋白及“a”决定簇合成肽抗原性影响被引量：2
- 2007年
- 人工合成G145R突变后HBsAg"a"决定簇多肽G145R-SP24,将G145R-SP24、重组G145R变异S蛋白及重组野生型HBsAg分组免疫BALB/c小鼠,制备相应抗血清。通过观察各免疫原与抗血清或抗G145R变异HBsAg McAb的免疫反应特征,分析并比较G145R突变后对S蛋白及"a"决定簇合成肽抗原性的影响。结果,几种免疫原均取得理想的免疫效果,ELISA证实各抗血清均有较好的特异性。G145R-SP24和G145R变异S蛋白免疫小鼠获得的抗血清效价较野生型HBsAg略低,且抗原性也发生了明显改变,G145R突变后"a"决定簇仍然具有较好的免疫原性;另外G145R-SP24与G145R变异S蛋白之间也显示出不同的抗原性,提示孤立的G145R变异HBsAg"a"决定簇与完整G145R S蛋白的"a"决定簇可能形成不同的空间构象。本研究为进一步探讨"a"决定簇突变后空间结构的变化规律与抗原性改变的特点奠定一定的基础。
- 黄永国李方和龚劲松田拥军张春燕张小艳杨东亮
- 关键词：基因变异合成肽多克隆抗体
- 乙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用
- 2006年
- 单克隆抗体是由识别一种抗原表位的B细胞产生的同源性抗体，具有特异性强、纯度高、效价高、无或少血清学交叉反应等优点，在临床和科研中得到了广泛应用。目前对乙型肝炎病毒的相关发病机制还在进一步探索，特别是在建立动物模型方面还有很多问题需要解决，如土拨鼠肝炎病毒核心抗原是否与人源型的核心抗原存在交叉反应等等都需要尽快弄清楚。我们将原核表达截短型乙型肝炎病毒核心抗原（HBc144）纯化后免疫BALB／C小鼠，制备出了抗乙型肝炎病毒核心抗原的两株单克隆抗体，并对其特异性、亲和力、抗原表位等性质进行了鉴定，
- 王蓉田拥军张振华李新宇张春燕卢银平游上游杨东亮
- 关键词：乙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体BALB/C小鼠土拨鼠肝炎病毒抗原表位发病机制
- 带有6肽组氨酸的HBV S／S145变异蛋白真核表达载体的构建及应用
- 目的本课题旨在构建稳定表达带有抗原表位标记(6肽组氨酸)的乙型肝炎病毒表面抗原(野生／145变异)的真核载体。从而为检测、纯化蛋白(变异)奠定基础。方法应用PCR技术及体外基因重组技术,将S基因和nt587突变的S基因插...
- 覃莉田拥军张正茂杨东亮
- 文献传递
- 中国旱獭IL-10分子的克隆和序列分析被引量：3
- 2006年
- 目的克隆旱獭白细胞介素-10(IL-10)全长cDNA序列进行序列分析,为IL-10分子的表达和在土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,WHV)感染中的应用奠定基础。方法根据Genbank的土拨鼠IL-10cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭IL-10cDNA。PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。对所获得的序列应用分析软件进行分析。结果RT-PCR扩增产物为685bp。重组质粒pMD18-T-cmIL-10经EcoRⅠ与PstⅠ双酶切提示含目的基因片段。序列分析提示旱獭IL-10的编码序列为537bp,与土拨鼠IL-10的同源性为100%。结论成功克隆旱獭IL-10分子,并构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。
- 李安意王宝菊田拥军江敏鲍俊杰郝友华喻植群陆蒙吉杨东亮
- 关键词：白细胞介素-10
- 乙型肝炎病毒核心抗原质粒的构建及原核表达
- 目的构建乙型肝炎病毒核心区质粒并进行原核蛋白表达。方法应用基因工程技术将编码截短型乙型肝炎病毒核心蛋白(HBcAg 1-144aa)的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内,在宿主菌B121 (DE3)plysS内进行...
- 王蓉张振华田拥军赵西平杨东亮
- 文献传递
- 土拨鼠肝炎病毒核心蛋白的高效表达和B细胞表位鉴定
- 2007年
- 目的建立高效表达土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg)的方法并对其B细胞表位进行鉴定。方法分别构建不同截短型WHcAg的质粒以了解能大量表达并形成WHV核心颗粒的区段,利用变性WHcAg制备单克隆抗体以寻找能与WHcAg线性B细胞表位结合的单克隆抗体。结果WHcAg前144或149氨基酸残基能够大量表达并能形成颗粒样结构。这2种截短型WHcAg能够在大肠杆菌中表达并组装成直径为34 nm的核心颗粒,最终纯化获得毫克级的核心蛋白。截短型WHcAg保留了全长WHcAg的抗原性,而且变性WHcAg存在另外的B细胞线性表位,利用变性WHcAg进行免疫制备单克隆抗体获得的5株抗体均针对WHcAg的N末端表位,该表位在WHcAg和HBcAg高度保守。结论建立了高效表达WHcAg的方法,制备了针对WHcAg单克隆抗体。并对WHcAg的线性B细胞表位进行了鉴定,发现WHcAg和HBcAg的N末端存在共同的线性B细胞表位。
- 张振华田拥军李磊Melanie FiedleErnst SchmidMichael Roggendorf陆蒙吉徐飏杨东亮
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体
- 乙型肝炎病毒急性感染小鼠模型的建立被引量：15
- 2005年
- 采用高压水注射方法,通过尾静脉将具有复制能力的HBV质粒导入BABL/cJ小鼠体内,应用real-time PCR、ELISA、RIA、Southern Blot、Northern Blot,以及免疫组化等方法,检测小鼠病毒血症、血清和肝组织中HBV 抗原表达动态变化、肝组织中HBV转录和复制情况,以及小鼠免疫应答状况。结果HBV基因可以在小鼠体内表 达和复制,并诱导小鼠产生特异性免疫应答,其应答模式及HBV清除过程与人类的HBV急性感染类似。实验显 示高压注射具有复制能力的HBV质粒可以在小鼠体内建立HBV急性感染模型,这种模型可以用于HBV病毒 学、免疫学以及抗病毒药物筛选等方向的研究。
- 孟忠吉李磊李新宇张正茂张振华田拥军王宝菊张珺雷延昌杨东亮
- 关键词：乙型肝炎病毒动物模型
- 湖北地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性被引量：56
- 2005年
- 目的 了解湖北地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布及其与临床的相关性。 方法 选择湖北地区HBV DNA阳性的慢性HBV感染者190例,其中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者52例、慢性乙型肝炎56例、重型肝炎32例、肝硬化22例、原发性肝癌28例,应用多对型特异性引物-聚合酶链反应检测HBV的基因型。 结果 多对HBV型特异性引物法可快速准确鉴定HBV的基因型。190份HBV DNA阳性血清标本中,B基因型140例(73.7％),C基因型42例(22.1％),BC混合型8例(4.2％),未发现A、D和E基因型;B基因型在重型肝炎和肝癌患者中占绝对优势,分别为87.5％和89.3％,显著高于HBsAg携带者的67.3％;B基因型患者血清丙氨酸氨基转移酶水平(253.1±306.7)U／L高于C基因型患者的(154.1±192.9)U／L,差异有统计学意义(P<0.05);除HBsAg携带者外的慢性HBV感染者中,B基因型患者血清抗-HBe阳性率50.5％(53／105)显著高于C基因型的18.5％(5／27),P<0.01。 结论 多对型特异性引物同时进行聚合酶链反应的基因分型方法可用于HBV基因型的流行病学调查;湖北地区存在HBV的B、C和BC混合基因型,B型为本地区的优势基因型并在严重肝病和肝癌中的比例较高,基因型的分布可能有较大的地区差异。
- 雷延昌郝友华田拥军孟忠吉王宝菊田德英赵西平杨东亮
- 关键词：慢性HBV感染C基因乙型肝炎病毒基因型HBSAG携带者HBVDNA
