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童宇茹: 作品数：13 被引量：80H指数：7; 供职机构：中国中医科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学理学更多>>

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雷公藤乙酰CoA酰基转移酶基因全长cDNA克隆及表达分析被引量：11: 2015年; 研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据库设计引物,对雷公藤悬浮细胞乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase)基因Tw AACT进行全长c DNA(Gene Bank:KP297934)克隆以及生物信息学分析和基因表达分析。克隆得到Tw AACT c DNA全长为1 704 bp,编码405个氨基酸,等电点为6.10,相对分子质量为41.20 k Da,在线预测表明Tw AACT具有2个催化活性位点。雷公藤悬浮细胞经茉莉酸甲酯(Me JA)外源诱导后,通过荧光定量PCR表明,Tw AACT相对表达量明显增加,在24 h达到最高。研究首次克隆得到雷公藤AACT基因,为进一步阐述雷公藤萜类生物合成途径奠定基础。; 赵瑜君张萌刘雨佳苏平童宇茹胡添源陈忻高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤克隆生物信息学分析基因表达分析

植物二萜合酶结构和功能研究进展: 2018年; 植物二萜合酶是二萜类化合物生物合成的关键酶,可催化香叶基香叶基焦磷酸的长碳链发生环化的级联反应,形成多样的环状骨架结构。研究表明,环化过程导致的成环、构象等差异是植物中二萜化合物多样性的重要来源之一;二萜合酶的结构在其环化功能中发挥着重要作用。本文将主要从晶体结构和功能角度阐述二萜合酶的作用机制,功能特点和结构信息。; 童宇茹童宇茹高伟; 关键词：晶体结构蛋白

雷公藤牻牛儿基焦磷酸合酶基因TwGPPS克隆与表达分析被引量：7: 2017年; 根据雷公藤悬浮细胞转录组数据设计特异引物,采用cDNA末端快速扩增技术克隆雷公藤牻牛儿基焦磷酸合酶基因TwGPPS1,TwGPPS2全长cDNA,并进行生物信息学分析和蛋白表达研究。首次克隆得到TwGPPS1核苷酸的完整开放阅读框长度为1 278 bp,编码425个氨基酸蛋白,预测蛋白等电点为6.68,相对分子质量为47.189 kDa;TwGPPS2核苷酸的完整开放阅读框长度为1 269 bp,编码422个氨基酸蛋白,预测蛋白等电点为6.71,相对分子质量为46.774 kDa;进一步构建了原核重组表达载体pET-32a-TwGPPS1,pET-32a-TwGPPS2,并成功诱导出TwGPPS1,TwGPPS2重组蛋白,为深入研究此关键酶基因功能和雷公藤萜类生物合成途径奠定基础。; 屠李婵张逸风苏平胡添源童宇茹关红雨赵瑜君张夏楠袁媛高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析蛋白表达

药用植物5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因研究进展被引量：3: 2013年; 药用植物萜类成分是一类重要的天然产物。随着一些具有重要经济价值的萜类化合物需求扩大,其生物合成中的关键酶也备受关注。5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomerase,DXR)是2-甲基-D-赤藻糖醇-4-磷酸(MEP)途径上的第2个关键酶。综述了DXR生物学意义、基因结构及其催化机制、药用植物DXR基因克隆及进化情况,并且介绍了紫杉醇、银杏、丹参等重要药用植物中DXR基因的研究进展,旨在为其他药用植物DXR基因的克隆和深入研究提供参考。; 童宇茹李桂桂程琪庆高伟; 关键词：萜类化合物药用植物

雷公藤MCT基因的全长克隆与表达分析被引量：9: 2015年; 根据雷公藤转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用全长PCR方法克隆Tw MCT全长cDNA,分析序列同源性,预测TwMCT蛋白结构,并进行序列多重比对和构建系统进化树分析;采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）,以actin为内参,分析雷公藤悬浮细胞受茉莉酸甲酯（MeJA）诱导后0~72 hTwMCT基因的相对表达量。克隆得到全长1 318 bp TwMCT全长c DNA,具有完整编码框,编码311个氨基酸,蛋白相对分子质量为34.14 kDa,理论等电点为8.65;RT-qPCR结果表明该基因受MeJA诱导后表达逐渐上升,在24 h时达到最高值。克隆雷公藤TwMCT全长cDNA和分析表达特性,为进一步研究该基因的功能和雷公藤次生代谢调控提供了基因元件。; 童宇茹苏平张萌赵瑜君王秀娟高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤

雷公藤牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶基因全长cDNA的获得及生物信息学分析被引量：11: 2015年; 该研究利用c DNA末端快速扩增(RACE)技术从雷公藤悬浮细胞中克隆得到一条GGPPS全长c DNA(Gene Bank:KM978333),并对其进行多重序列比对、蛋白结构预测及构建系统进化树等生物信息学分析。所克隆的Tw GGPPS c DNA全长1 857 bp,编码含514个氨基酸的蛋白序列,相对分子质量为57.13 k Da,等电点为7.85,具有5个保守域和2个功能域,亚细胞定位预测显示其可能位于质膜上,多重序列比对及系统进化树结果显示与其他植物GGPPS家族具有较高同源性。实验首次克隆了雷公藤GGPPS基因,为进一步研究雷公藤甲素等二萜化合物生物合成途径奠定基础。; 张萌苏平刘雨佳童宇茹赵瑜君高伟王秀娟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析

基于DNA熔解曲线分析技术的三七粉分子鉴定被引量：17: 2014年; 目的：针对市售三七粉掺入其他粉末导致鉴别困难的问题,建立熔解曲线分析方法,以实现简便、快速鉴别三七粉的目的。方法：采集不同产地的三七原植物30株,市售成药三七粉10批以及大米、土豆、小麦、小米、大豆粉末等常见掺假粉末。所有样品提取总DNA,筛选适合片段及引物,分别构建三七、伪品、三七与伪品等比例混合样品DNA的熔解曲线。对退火温度、循环次数以及模板浓度进行优化,建立三七粉DNA熔解曲线分析真伪鉴别方法,并对其精密度和重复性进行考察。结果：选择psbA-trnH作为鉴别引物,在退火温度为58~62℃、循环数为35~40条件下,DNA模板0.78~483.20 ng·μL-1范围内进行熔解曲线分析,可通过熔解曲线峰形比对,在未获得伪品信息的情况下进行三七粉真伪及掺杂品鉴别。结论：熔解曲线分析技术依据熔解曲线的峰形和Tm值大小即可区分不同三七样品的DNA,其直观的特点在该药材掺假品快速检测方面具有独特的优势。; 童宇茹蒋超黄璐琦崔占虎袁媛; 关键词：熔解曲线三七粉分子鉴定

雷公藤甾醇C-24甲基转移酶(TwSMT2)的cDNA克隆及表达分析被引量：3: 2016年; 24-烷基甾醇具有构成膜结构和调节植物生长发育的作用,本研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据,克隆得到雷公藤甾醇生物合成途径上的一个重要限速酶:甾醇C-24甲基转移酶(SMT),其c DNA全长1 631 bp,开放阅读框1 080 bp,编码359个氨基酸。在线预测所编码蛋白的理论等电点为6.43,分子质量为40.0 k Da。生物信息学分析结果将此SMT基因归为SMT2家族。进一步构建p MAL-c2X-Tw SMT2重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),茉莉酸甲酯诱导表达分析结果显示:相比于对照组,经诱导后的Tw SMT2基因在24 h处有显著提高。SDS-PAGE及Western blot检测蛋白表达结果显示,IPTG可诱导表达出Tw SMT2蛋白。本研究首次克隆得到Tw SMT2基因,并获得重组蛋白,为进一步阐述雷公藤甾醇生物合成途径奠定基础。; 关红雨苏平赵瑜君童宇茹刘雨佳胡添源张逸风张夏楠王秀娟高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析蛋白表达

雷公藤4α-甲基氧化酶基因(TwSMO1)的cDNA全长克隆及表达分析: 2017年; 目的:克隆得到雷公藤一型4α-甲基氧化酶(Tw SMO1)(Gen Bank KX987126)全长基因,并对其进行序列分析及初步的功能验证。方法:根据雷公藤转录组数据,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到雷公藤4α-甲基氧化酶基因(TwSMO1),并利用相关软件对所得核酸序列及其所编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。用茉莉酸甲酯(MeJA)诱导雷公藤悬浮细胞,用实时荧光定量(RT-PCR)的方法分析诱导不同时间点后雷公藤悬浮细胞中的TwSMO1基因的相对表达量。结果:克隆所得的TwSMO1基因cDNA全长1505 bp,开放阅读框900 bp,编码299个氨基酸,在线预测其所编码蛋白分子量为34.55 k Da,理论等电点为6.89。多重序列比对结果显示其与其他物种的SMO1氨基酸序列有较高同源性,且包含SMO1基因家族的3个保守域,系统进化树将其归为4α-甲基氧化酶第一家族基因,遂将其命名为TwSMO1。RT-PCR结果表明MeJA诱导后TwSMO1基因在1 h后表达量达到最高,约是对照组的450倍。结论:本研究首次克隆得到雷公藤TwSMO1基因,并对其进行生物信息学分析及MeJA诱导表达分析,为深入研究此基因功能及阐述雷公藤甾醇生物合成途径奠定基础。; 关红雨胡添源赵瑜君苏平童宇茹张逸风张夏楠高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤克隆生物信息学分析

UPLC-MS/MS测定人参花中5种内源植物激素含量被引量：8: 2018年; 目的:探究人参花中内源激素分布规律,为后期研究内源性植物激素调控人参皂苷合成奠定基础。方法:采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱(UPLC-MS/MS)对人参花中5种内源性植物激素(生长素,赤霉素,脱落酸,茉莉酸,水杨酸)含量进行测定分析。结果:人参花中5种内源性植物激素含量测定结果都具有专属性,与抗逆相关的激素脱落酸(ABA)和水杨酸(SA)含量较高,分别为1 126.17±232.52 ng·g^(-1)和3 929.43±898.52 ng·g^(-1);与促生长相关的激素生长素(IBA)和赤霉素(GA3)含量较低,分别为516.70±138.55 ng·g^(-1)和692.33±228.50 ng·g^(-1);茉莉酸(JA)合成途径中,茉莉酸前体12-氧植物-二烯酸(OPDA)含量极高,为47 158.84±12 910.55 ng·g^(-1);茉莉酸(JA)并未检出,茉莉酸活性形式异亮氨酸(JA-ile)为22.08±6.27 ng·g^(-1)。结论:本研究首次检测了人参花中5种内源性植物激素的分布规律,并深入挖掘人参花中茉莉酸途径相关成分的合成,为后期深入研究内源性植物激素调控人参皂苷合成奠定基础。; 陈康刘娟周修腾纪瑞锋童宇茹陈同陈同; 关键词：UPLC-MS/MS 植物激素

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