- DMSO和As_2O_3对人食管癌细胞增殖的抑制作用被引量：25
- 1999年
- 目的 抑制肿瘤细胞生长是治疗肿瘤的重要基础。本文比较二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）和维甲酸对人食管癌细胞生长抑制的影响。方法 用生长曲线、剂量－效应曲线、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、ＭＴＴ比色分析、细胞周期的流式术检测、ＰＣＮＡ及Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１免疫组化等多项指标反映细胞增殖改变。结果 二甲基亚砜和三氧化二砷对食管癌细胞株生长的抑制作用较传统的维甲酸效果更强。结论
- 谭立军陈新宇张岚湯雪明沈忠英蔡维佳
- 关键词：三氧化二砷维甲酸食管癌
- 氧化砷诱导食管癌细胞凋亡细胞骨架的改变被引量：6
- 2001年
- 沈忠英沈健蔡维佳陈彩云陈炯玉
- 关键词：食管癌细胞凋亡细胞骨架氧化砷
- 人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导胎儿食管永生化上皮的生物学特性被引量：11
- 1999年
- 目的 ＳＨＥＥ细胞系是经人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１８ 型Ｅ６Ｅ７ 基因诱导的永生化上皮细胞株，已传代超过５０ 代。研究胎儿食管上皮永生化的细胞株ＳＨＥＥ生物学特性，包括增殖，分化和调亡。方法 细胞于１９９ 培养基培养，用光镜、电镜和荧光显微镜研究其生长率、形态和染色体分析；用流式细胞仪研究其细胞增殖动力学；用免疫组织化学方法研究Ｋｉ６７ 和角蛋白和用末端转移酶标记（ＴＵＮＥＬ） 凋亡细胞。结果 细胞培养呈单层，锚定依赖和接触抑制生长。细胞生长曲线，增殖期３ ～８天，平顶期９ ～１０ 天，衰亡期１０ 天以后。增殖指数（ＰＩｘ）３４－０％ ，分裂指数（ＭＩ）２－４７％ （１－２０％ ～４－８０％ ） ，凋亡指数（ＡＩ）１－３０％ ～６－９０ ％ ，核染色体众数４６ 条为主（４４ ～５４ 条） 和细胞周期ＤＮＡ 呈２ 倍体核型分布。电镜可见胞浆有张力原纤维，角蛋白免疫组织化学阳性证实鳞状上皮有分化特征。细胞凋亡可发生在增殖期，特别在衰亡期增多。结论 从生物学行为看来，ＳＨＥＥ细胞株接近于其来源细胞，胎儿食管上皮基底层，保存其增殖能力和分化的潜力。细胞死亡（包括细胞凋亡）是细胞群体扩增调节重要的因素。
- 沈忠英沈健蔡维佳岑山曾毅
- 关键词：食管上皮生物学特性E6E7
- 人乳头状瘤病毒诱导食管上皮永生化细胞的双相分化被引量：8
- 2001年
- 研究中期永生化食管上皮细胞的表型、细胞遗传学和部份基因的改变 ,以阐明癌前病变的特征。SHEE是该院用人乳头状瘤病毒HPV18E6E7诱导的永生化上皮 ,传至 6 1代已开始有少量细胞恶性转化。对永生化中期 31代培养细胞用相差显微镜检查细胞形态改变和细胞生长状态 (细胞接触抑制和锚定生长 ) ;流式细胞仪检测细胞周期 ;做染色体众数分析 ;多重PCR检查c-myc、p5 3、bcl- 2和ras等基因。免疫组化检查细胞角蛋白和鬼臼毒素荧光标记检查肌动蛋白F(F -actin)。软琼脂培养的集落细胞接种SCID小鼠检查成瘤性。Westernblot方法检测细胞内HPVE6表达蛋白。结果 :培养细胞有两种不同分化形态 ,分化差的基底细胞和分化好的鳞状上皮 ;前者角蛋白和F -actin极少 ,后者含量丰富 ;细胞接触抑制和锚锭生长特性减弱。分析 10 0个细胞染色体众数分二干系 ,5 6条 (占 30 % )和 6 1条 (占 2 4% )染色体 ,核型分析属于超二倍体 ,亚三倍体。多重PCR检查 :c -myc、p5 3基因上调 ,bcl- 2和ras基因阳性。用优选生长在软琼脂上的克隆细胞接种SCID小鼠 ,未成瘤 ;HPV18E6表达蛋白阳性。以HPV18E6E7诱导的食管永生化上皮 31代细胞形态出现了双向分化 ,根据其形态表型 ,双染色体众数的细胞遗传学改变和某些癌基因上调等特性 。
- 沈忠英许丽艳陈铭华蔡维佳陈炯玉洪超群沈健曾毅
- 关键词：食管上皮永生化细胞遗传学人乳头状瘤病毒
- 不同剂量三氧化二砷对食管癌细胞的作用被引量：14
- 2001年
- 目的 :研究不同浓度As2 O3对食管癌细胞系的作用。方法 :食管恶性转化上皮细胞 (SHEEC1)是我室用人乳头状瘤病毒 (HPV) 18和TPA诱发的细胞系 ,培养在培养瓶和 2 4孔板 ,用浓度 1,3和 5 μmol/L的As2 O3处理 2 ,4 ,8,16,2 4h ,电镜检查细胞形态 ,光镜检查核分裂指数 (MI) ;用放射自显影检查 [3H] TdR掺入细胞 ;流式细胞仪检查增殖指数 (PI)和凋亡指数 (AI)。结果 :低剂量As2 O3( 1.0 μmol/L)组 [3H] TdR掺入细胞 ,MI,PI皆增加 ,提示SHEEC1增殖率提高 ;高剂量组 ( 3和 5 μmol/L)高AI和低PI,给药 2 4h后 ,电镜可见细胞凋亡和坏死。结论 :不同剂量氧化砷的作用不同 ,低剂量可引起食管癌细胞DNA合成增加和促进细胞增殖 ,高剂量则引起细胞凋亡和坏死。
- 沈健吴敏华蔡维佳沈忠英
- 关键词：氧化砷食管癌细胞凋亡
- 人乳头状瘤病毒诱导人胚食管上皮细胞永生化和恶性转化及其生物学特性的研究
- 沈忠英曾毅许丽艳李恩民沈健蔡维佳陈铭华岑山滕智平
- 该研究以阐明HPV在食管癌发生发展的作用为目的。研究结果：HPV18E6E7基因可以诱导食管上皮永生化和恶性转化，证实HPV是食管癌病因之一；对HPV诱导人胚食管上皮细胞的细胞生物学和分子生物学特性全面深入的研究为前人未...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤病毒食管上皮恶性转化
- 氧化砷诱导食管癌细胞系细胞凋亡的形态学研究被引量：3
- 1998年
- 目的在氧化砷（As2O3）作用于食管癌细胞株EC8712过程中，用光镜和电镜观察培养细胞凋亡的形态改变方法ECh712于199培养基常规培养，以3μmolAs2O3作用于细胞，72h收获细胞，作光镜（HE染色，TUNEL标记）、透射电镜和流式细胞仪检查.结果3μmolAs2O3作用72h，出现许多凋亡细胞，培养细胞部分变圆，脱落.在光镜下HE染色观察2种凋亡细胞.一种核小；圆形，致密呈固缩核、和核碎,另一种胞质红染，染色质凝集，二者TUNEL标记阳性．流式细胞仪检测有凋亡峰出现（亚G1／G0峰）．电镜检查有二种凋亡类型.一呈典型凋亡细胞核改变；在早期染色质凝集成块状，细胞器保存完好.第二期，随着染色质改变，细胞核变圆，饱满，核膜完整，染色质靠边，大块染色质，构成车轮状或半月状.核膜变性解体，使染色质逸出．最后细胞变性坏死.凋亡小体易见，小块状球状，膜包或裸露.另一种固缩细胞，细胞皱缩，胞质致密，核电子密度高.结论光镜和电镜检查结果证实As2O3可以诱导食管癌细胞系ECh712细胞凋亡，因此As2O3可作为食管癌辅助治疗药物．
- 沈忠英谭立军蔡维佳沈健陈彩云汤雪明
- 关键词：食管肿瘤细胞株细胞凋亡氧化砷
- 人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮细胞恶性转化的研究被引量：39
- 1999年
- 为了研究病毒和促癌物在食管癌形成中的作用，用带有人乳头状瘤病毒１８型Ｅ６Ｅ７片段的载体腺病毒（简称ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ）感染人胚食管上皮细胞，然后加ＴＰＡ协同作用，观察细胞转化。将人胚食管切碎，与ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ同孵育２小时，在加有１０％小牛血清的１９９培养液培养和传代，形成永生化细胞株，即人胚食管上皮细胞汕头株（ＳＨＥＥ）。实验分两组：一组ＳＨＥＥ细胞在传代至第５和１３代时，两次在培养基中加入ＴＰＡ（１２Ｏｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ１３ａｃｅｔａｔｅ）５ｎｇ／ｍｌ，每次诱导２周，所获得的细胞株称为人胚食管上皮癌细胞汕头株１号（ＳＨＥＥＣ１）；另一组ＳＨＥＥ细胞培养条件相同，未加ＴＰＡ，为对照组。细胞转化的形态表型由光学显微镜、电子显微镜和荧光显微镜检查；ＤＮＡ含量和细胞周期用流式细胞仪检测；用３５ｍｍ软琼脂培养皿接种１０３细胞（第２０代），每组５碟，计算集落形成率；裸鼠皮下接种１０６细胞检测致瘤性；用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）和ＰＣＲ检测ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７。结果表明：细胞ＤＮＡ合成和增殖指数（ＰＩｘ），ＳＨＥＥＣ１组（４５％）高于ＳＨＥＥ组（３４％）；高倍体细胞数，ＳＨＥ?
- 沈忠英蔡维佳蔡维佳许锦阶沈健滕智平岑山曾毅
- 关键词：食管癌病理上皮细胞TPA
- 人乳头状瘤病毒诱导人胚食管上皮永生化细胞恶性转化被引量：9
- 2000年
- 为了证实HPV18E6E7基因诱导的人胚食管上皮永生化细胞 (SHEE) 6 1代 (SHEE6 1)部份细胞 (SHEE6 1A)已经恶性转化 ,以寻找监控细胞早期恶性转化的方法。对培养的SHEE第 10代 (SHEE10 )和 6 1代 (SHEE6 1)细胞 ,用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及生长形式 ;用流式细胞仪分析细胞周期 ;用染色体G带核型分析和间期核染色体 1、7、8号着丝粒探针荧光原位杂交 (FISH)检测细胞染色体改变 ;用增殖优势克隆优选法选出生长快的细胞群体 ,接种裸小鼠和SCID小鼠。结果 :光学显微镜下见SHEE6 1细胞大小不等 ,重叠生长 ;电子显微镜下见细胞核多型性和核仁增大等增殖表型 ;流式细胞仪检测 ,SHEE6 1增殖指数和DNA >4n细胞高于SHEE10 ;SHEE6 1细胞染色体众数出现 5 7～ 6 0、6 3～ 6 5两亚群 ,1、7、9、13、17等染色体出现较多 3体、4体或 5体 ;FISH间期核 1、7号着丝粒数增多 ;SHEE6 1克隆优选的细胞SHEE6 1A接种SCID小鼠成瘤。这表明 :SHEE6 1细胞形态及生长特性有了改变 ,接触抑制减弱 ,高倍体和不整倍体细胞增多 ,染色体数目明显改变 ,SHEE6 1A接种SCID小鼠产生浸润性肿瘤 ,可以判定SHEE6 1部份细胞已恶性转化。用克隆优选法筛选和染色体检测可以监控永生化细胞早期恶性转化。
- 沈忠英陈晓红沈健蔡维佳陈炯玉黄天华曾毅
- 关键词：食管上皮永生化恶性转化
- 人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导人胚食管上皮永生化被引量：37
- 1999年
- 目的为研究病毒和肿瘤的关系，用人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１８型Ｅ６Ｅ７基因感染胎儿食管上皮，建立一株新的人食管上皮永生化细胞株（ＳＨＥＥ）。方法ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７腺病毒伴随病毒（ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ））载体的构建；胚胎食管组织培养，ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ感染，继续培养传代。用光镜、电镜检查其形态；聚合酶链反应（ＰＣＲ）、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）检查该病毒片段；用软琼脂培养和裸鼠接种检查致瘤性。结果经过长时间的传代培养，ＳＨＥＥ的表型仍保留原代上皮细胞培养的特征，表现为单层生长和锚锭依赖性生长，在软琼脂培养不形成克隆，接种裸鼠未成瘤。ＳＨＥＥ细胞系电镜检查可见张力原纤维，免疫组织化学检查细胞角质蛋白阳性，证实为鳞状上皮来源。ＦＩＳＨ和ＰＣＲ检测显示有ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因。结论用ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因建立食管上皮永生化细胞株ＳＨＥＥ，支持ＨＰＶ１８可能和食管癌病因有关的观点，可进一步用以研究食管癌的病因和发病机制。
- 沈忠英岑山蔡维佳滕智平滕智平沈健胡智
- 关键词：食管上皮聚合酶链反应
