岑山
- 作品数：9 被引量：66H指数：3
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- 人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导胎儿食管永生化上皮的生物学特性被引量：11
- 1999年
- 目的 ＳＨＥＥ细胞系是经人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１８ 型Ｅ６Ｅ７ 基因诱导的永生化上皮细胞株，已传代超过５０ 代。研究胎儿食管上皮永生化的细胞株ＳＨＥＥ生物学特性，包括增殖，分化和调亡。方法 细胞于１９９ 培养基培养，用光镜、电镜和荧光显微镜研究其生长率、形态和染色体分析；用流式细胞仪研究其细胞增殖动力学；用免疫组织化学方法研究Ｋｉ６７ 和角蛋白和用末端转移酶标记（ＴＵＮＥＬ） 凋亡细胞。结果 细胞培养呈单层，锚定依赖和接触抑制生长。细胞生长曲线，增殖期３ ～８天，平顶期９ ～１０ 天，衰亡期１０ 天以后。增殖指数（ＰＩｘ）３４－０％ ，分裂指数（ＭＩ）２－４７％ （１－２０％ ～４－８０％ ） ，凋亡指数（ＡＩ）１－３０％ ～６－９０ ％ ，核染色体众数４６ 条为主（４４ ～５４ 条） 和细胞周期ＤＮＡ 呈２ 倍体核型分布。电镜可见胞浆有张力原纤维，角蛋白免疫组织化学阳性证实鳞状上皮有分化特征。细胞凋亡可发生在增殖期，特别在衰亡期增多。结论 从生物学行为看来，ＳＨＥＥ细胞株接近于其来源细胞，胎儿食管上皮基底层，保存其增殖能力和分化的潜力。细胞死亡（包括细胞凋亡）是细胞群体扩增调节重要的因素。
- 沈忠英沈健蔡维佳岑山曾毅
- 关键词：食管上皮生物学特性E6E7
- 腺病毒伴随病毒表达载体表达人乳头瘤病毒18型E6E7基因构建及其转化作用的鉴定被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨人乳头瘤病毒 (HPV)的E6E7基因在细胞恶性转化中所起的作用。方法 将人乳头瘤病毒 (HPV)的E6E7基因克隆至腺病毒伴随病毒表达载体中 ,通过包装的重组病毒感染 ,将E6E7基因导入并整合到永生 2 93细胞的基因组中。结果 本研究成功地构建了HPV18E6E7AAV病毒并感染了永生 2 93细胞 ,PCR Southern杂交分析表明E6E7基因在转化细胞 2 93TL中确有表达 ,转化细胞 2 93TC和 2 93TL具有明显的转化表型 ,和亲本 2 93细胞相比 ,生长速度快 ,接触抑制消失 ,集落形成率提高 2 0倍 ,且集落明显增大 ,形成时间短。结论 成功地构建了HPV18E6E7AAV病毒 ,HPV18E6E7基因可引起永生化人上皮细胞 2 93的恶性转化。此病毒可用于感染正常上皮细胞 。
- 岑山滕智平张月沈忠英许锦阶杜宾曾毅
- 关键词：人乳头状瘤病毒依赖病毒
- 佛波酯和人乳头瘤病毒在细胞恶性转化作用中的协同效应被引量：2
- 2006年
- 目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）和促癌物在肿瘤诱发过程中的协同作用。方法研究选择与恶性肿瘤关系密切的癌基因和抑癌基因，利用免疫组化、Southem Blot和半定量RNA斑点杂交的方法，研究在HPV18E6E7和促癌物佛波酯（TPA）的协同作用下，这些基因在细胞内的表达。结果HPVE6E7和TPA的协同作用可以引起细胞内癌基因c-myc的扩增4-8倍，c-erbB2的表达水平提高32-64倍，并导致抑癌基因p16的表达水平下降到正常水平的1／4．1／8。结论HPVE6E7和TPA的协同作用可以引起细胞内癌基因和抑癌基因表达水平异常，可能是细胞癌变的重要原因之一。
- 岑山张月许锦阶沈忠英曾毅
- 关键词：乳头瘤病毒癌基因基因肿瘤抑制
- 人免疫缺陷病毒1(HIV-1)膜蛋白基因片段在酵母中的克隆表达
- 1999年
- 目的为获得足够量的膜糖蛋白，以便于对不同ＨＩＶ分离株膜糖蛋白的结构与功能进行进一步的研究。方法从人免疫缺陷病毒１（ＨＩＶ－１）ＨＸＢ２分离株原病毒基因组的重组质粒ｐＨＸＢ２中克隆了两段膜糖蛋白基因（ＥＮＶ）片段。以酵母穿梭诱导表达质粒ｐＹＥＳ２为载体，构建了两个相应的重组表达质粒ｐＹＥＮＶ１和ｐＹＥＮＶ２；进一步利用大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因（β－ｌａｃＺ）构建了ＨＩＶ－１膜外糖蛋白ＤＮＡ片段与β－ｌａｃＺ基因的融合表达质粒。将此３种质粒分别转化单细胞真核生物酿酒酵母ＢＪ１９９１，得到的转化子经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果克隆的基因片段在酿酒酵母中产生了分子质量为５０×１０３的特异性诱导蛋白；对含此融合表达质粒的酵母转化子半乳糖诱导后表达产物的免疫检测表明，与对照菌株相比，融合表达产物具有和ＨＩＶ－１阳性血清抗体反应的抗原性。结论可通过β－半乳糖苷酶活性的测定直接指示抗原片段的表达；
- 刘巍峰高东王祖农滕智平岑山滕智平
- 关键词：HIV-1ENV基因癌基因蛋白质类
- 揭阳地区食管癌和贲门癌与人乳头状瘤病毒的关系被引量：1
- 1998年
- 人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）是一种ＤＮＡ肿瘤病毒，与人的生殖道和消化道的多种良性和恶性肿瘤密切相关。１９８２年Ｓｙｒｊａｎｅｎ首次报道ＨＰＶｓ可能与食管癌病因有关〔１〕。迄今为止，包括我国在食管癌粘膜组织中发现多种型别的ＨＰＶＤＮＡ，其中有ＨＰＶ１６，１...
- 陈少湖刘祖宏张稳定李丽珠岑山谈浪逐沈忠英曾毅
- 关键词：食管癌贲门癌病因人乳头状瘤病毒
- 人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮细胞恶性转化的研究被引量：39
- 1999年
- 为了研究病毒和促癌物在食管癌形成中的作用，用带有人乳头状瘤病毒１８型Ｅ６Ｅ７片段的载体腺病毒（简称ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ）感染人胚食管上皮细胞，然后加ＴＰＡ协同作用，观察细胞转化。将人胚食管切碎，与ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ同孵育２小时，在加有１０％小牛血清的１９９培养液培养和传代，形成永生化细胞株，即人胚食管上皮细胞汕头株（ＳＨＥＥ）。实验分两组：一组ＳＨＥＥ细胞在传代至第５和１３代时，两次在培养基中加入ＴＰＡ（１２Ｏｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ１３ａｃｅｔａｔｅ）５ｎｇ／ｍｌ，每次诱导２周，所获得的细胞株称为人胚食管上皮癌细胞汕头株１号（ＳＨＥＥＣ１）；另一组ＳＨＥＥ细胞培养条件相同，未加ＴＰＡ，为对照组。细胞转化的形态表型由光学显微镜、电子显微镜和荧光显微镜检查；ＤＮＡ含量和细胞周期用流式细胞仪检测；用３５ｍｍ软琼脂培养皿接种１０３细胞（第２０代），每组５碟，计算集落形成率；裸鼠皮下接种１０６细胞检测致瘤性；用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）和ＰＣＲ检测ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７。结果表明：细胞ＤＮＡ合成和增殖指数（ＰＩｘ），ＳＨＥＥＣ１组（４５％）高于ＳＨＥＥ组（３４％）；高倍体细胞数，ＳＨＥ?
- 沈忠英蔡维佳蔡维佳许锦阶沈健滕智平岑山曾毅
- 关键词：食管癌病理上皮细胞TPA
- 人乳头状瘤病毒协同^(60)钴照射促进食管上皮细胞恶性转化被引量：1
- 2004年
- 为探明人乳头状瘤病毒(HPV)和促癌剂对食管上皮致癌作用,人胚食管上皮细胞转染HPV协同60钴(60Co)放射观察其恶性转化。用HPV18E6E7AAV转染的人胚食管上皮(SHEE),培养至13代,分为4组,实验组分别用60Co2、4、8Gy照射,每周1次共4周;SHEE未经照射为对照组。细胞形态用相差显微镜观察;细胞DNA合成和定量用3H TdR掺入和用流式细胞仪分析;染色体众数用常规方法分析;致瘤性用软琼脂培养和裸小鼠接种;HPVDNA用PCR检测。经60Co照射后细胞呈凋亡和坏死(危象期)。8周后SHEE4Gy组细胞增殖,增殖指数(34%)和3H TdR摄入增高,软琼脂培养和裸鼠接种出现致瘤性。对照组SHEE组细胞增殖指数24%,伴有少数3H TdR掺入,裸鼠未成瘤。染色体众数:对照组,58～62;4Gy组,63～65;两组HPV18E6E7PCR呈阳性条带。此结果表明,用HPV18E6E7协同60Coγ射线可以使人胚食管上皮恶性转化,60Coγ射线有加速食管上皮细胞恶性转化作用。
- 沈忠英岑山滕智平蔡唯佳沈健陈炯玉陈志坚李德锐曾毅
- 关键词：食管上皮人乳头状瘤病毒恶性转化致癌作用
- 人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导人胚食管上皮永生化被引量：37
- 1999年
- 目的为研究病毒和肿瘤的关系，用人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１８型Ｅ６Ｅ７基因感染胎儿食管上皮，建立一株新的人食管上皮永生化细胞株（ＳＨＥＥ）。方法ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７腺病毒伴随病毒（ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ））载体的构建；胚胎食管组织培养，ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ感染，继续培养传代。用光镜、电镜检查其形态；聚合酶链反应（ＰＣＲ）、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）检查该病毒片段；用软琼脂培养和裸鼠接种检查致瘤性。结果经过长时间的传代培养，ＳＨＥＥ的表型仍保留原代上皮细胞培养的特征，表现为单层生长和锚锭依赖性生长，在软琼脂培养不形成克隆，接种裸鼠未成瘤。ＳＨＥＥ细胞系电镜检查可见张力原纤维，免疫组织化学检查细胞角质蛋白阳性，证实为鳞状上皮来源。ＦＩＳＨ和ＰＣＲ检测显示有ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因。结论用ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因建立食管上皮永生化细胞株ＳＨＥＥ，支持ＨＰＶ１８可能和食管癌病因有关的观点，可进一步用以研究食管癌的病因和发病机制。
- 沈忠英岑山蔡维佳滕智平滕智平沈健胡智
- 关键词：食管上皮聚合酶链反应
- 亚硝基吡啶对人乳头状瘤病毒诱导的食管上皮永生化细胞的促癌作用被引量：2
- 2006年
- 目的 观察亚硝基吡啶在细胞恶性转化过程中的促癌作用.方法 用HPV18E6E7诱导食管上皮细胞永生化细胞系SHEE,第17代细胞培养在50 ml培养瓶.加入亚硝基吡啶（Nnitrosopiperidine,NPIP）0,2,4,8 mmol/L作用3周.用相差显微镜检查细胞形态,流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡;染色体常规制样,检查染色体众数;细胞软琼脂集落形成及接种裸小鼠检查成瘤性;用Western blot检测HPV18表达.结果 当细胞暴露在8 mmol/L NPIP时细胞死亡增加,只剩少量活细胞.换正常培基代替NPIP,经4周后细胞进入增殖状态,细胞出现增生和异型增生.第8周末细胞软琼脂培养有大集落形成,接种裸小鼠成瘤.2,4 mmol/L组细胞倍增时间延长,细胞未能成瘤.8 mmol/L NPIP组染色体众数61～65,对照组56～61.实验组和对照组HPV阳性.结论 NPIP促进人乳头状瘤病毒诱导人胚食管永生化上皮恶性转化,HPV18E6E7和NPIP能协同作用加速食管上皮恶性转化.
- 沈忠英滕智平沈健蔡唯佳陈铭华岑山陈炯玉曾毅
- 关键词：亚硝基化合物
