邵成
- 作品数：10 被引量：13H指数：3
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 沙门菌Omp D介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定
- 目的利用重组BCG技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Der p2和Omp D抗原的两种rBCG口服疫苗。方法经PCR法分别扩增获得Der p2和Omp D基因,测序正确后将两者克隆入原核表达载体pProEXHT...
- 郭晓雅史皆然邵成胡琳洁侯美娜吴昌归
- 文献传递
- 沙门菌OmpD介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定
- 目的：利用重组BCG技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Der p2和Omp D抗原的两种rBCG口服疫苗.方法：经PCR去分别扩增获得Der p2和Omp D基因,测序正确后将两者克隆入原核表达载体pProEX...
- 郭晓雅史皆然邵成胡琳洁侯美娜吴昌归
- 关键词：重组BCG口服疫苗
- 沙门菌外膜蛋白D的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2010年
- 目的:在大肠杆菌中表达沙门菌外膜蛋白(OMP)D,纯化后制备兔抗OMPD抗体。方法:用PCR方法从鼠伤寒沙门菌中扩增出ompD基因,并插入融合表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET28a(+)-ompD;以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导目的蛋白表达,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化;以表达的OMPD蛋白免疫家兔,制备抗OMPD的多克隆抗体并进行鉴定。结果:扩增了ompD基因,测序证实正确后亚克隆于表达载体pET-28a(+)中,经PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子质量为40×103的目的蛋白并进行纯化;纯化的OMPD免疫家兔后,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶10000以上,且具有良好的特异性。结论:构建ompD基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;制备出兔抗OMPD抗体,效价及特异性均良好,为进一步制备肠黏膜高亲和力疫苗奠定了基础。
- 郭晓雅师长宏邵成赵勇史皆然
- 关键词：沙门菌原核表达多克隆抗体
- 胞壁形式表达融合蛋白Der p2-PEB1重组BCG的构建和鉴定被引量：3
- 2010年
- 利用重组BCG技术,构建能以胞壁形式表达屋尘螨Der p2和PEB1抗原的重组BCG口服哮喘疫苗pCW-Der p2-PEB1-rBCG,以pCW-Der p2质粒和pUC-PEB1质粒DNA为模板扩增基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1。将重组质粒电穿导入BCG感受态细胞,潮霉素抗性筛选rBCG阳性克隆。阳性rBCG经PCR特异性扩增目的基因片段Der p2及PEB1,证实其中含有目的基因。用抗Der p2单克隆抗体和制备的小鼠PEB1抗血清对rBCG进行间接免疫荧光鉴定。结果成功扩增了Derp2及PEB1基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1,并将质粒电穿入BCG中,免疫荧光法鉴定其成功。说明成功地构建了胞壁表达Derp2-PEB1融合蛋白重组BCGpCW-Der p2-PEB1-rBCG。为基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 邵成史皆然郭晓雅胡琳洁侯美娜
- 关键词：P2重组BCG
- 沙门菌Omp D介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定
- 2012年
- 目的利用重组BCG（rBCG）技术，构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Derp2和OmpD抗原的两种rBCGLI服疫苗。方法经PCR法分别扩增获得Derp2和OmpD基因，测序正确后将两者克隆人原核表达载体pProEXHTb，获得pProEXHTb-De．rp2-OmpD质粒。①串联表达：将Derp2-OmpD融合基因亚克隆人穿梭胞壁表达载体pCW，经酶切鉴定阳性命名为pCW-Derp2-OmpD质粒。将此重组质粒电穿导人BCG感受态细胞，构建可胞壁串噘表达Derp2-OmpD融合蛋白的rBCG；②并联表达：构建pCW-Derp2与pCW-OmpD两种质粒，井将二者同时电穿导人BCG感受态细胞，以构建胞壁并联表达Derp2和OmpD蛋白的rBCG。经潮霉素抗性筛选的阳性克隆，均采用以下三种方式进行鉴定：PCR特异性扩增目的基因片段；用兔抗Derp2多克隆抗体与兔抗OmpD多克隆抗体对阳性克隆分别进行斑点免疫杂交法和间接免疫荧光法鉴定。结果采用基因工程手段制备出以胞壁形式串联和并联表达Derp2和OmpD蛋白的两种rBCG口服疫苗，并通过PCR、斑点免疫杂交法及间接免疫荧光法分别进行鉴定。结论两种rBCG口服疫苗构建成功，为体外实验和临床应用提供基础。
- 郭晓雅邵成胡琳洁侯美娜史皆然
- 关键词：OMPP2重组BCG口服疫苗
- 沙门菌外膜蛋白D的原核表达及多克隆抗体的制备
- 郭晓雅史皆然邵成师长宏赵勇吴昌归
- 重组结核分枝杆菌RpfE蛋白对BCG休眠菌的促生长作用被引量：4
- 2010年
- 目的观察重组结核分枝杆菌RpfE蛋白对BCG的促生长作用。方法将测序正确的Rv2450c基因克隆到表达载体pET32a(+)中,获得RpfE蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化。将纯化的蛋白分别与结核病人血清,Rpf单抗和Rpf结构域单抗进行Western blot分析。分别将10pmol/L和100pmol/L的RpfE加入到休眠BCG的培养基中,观察RpfE蛋白对BCG的促生长作用。结果得到融合组氨酸残基的重组RpfE蛋白,Western blot结果显示该蛋白分别与活动期结核病人血清,Rpf单抗和Rpf结构域单抗在40kDa处发生反应。100pmol/L的RpfE蛋白对BCG休眠菌具有明显的复苏和促生长作用。结论构建了MtbRv2450c基因的重组表达载体,纯化获得了RpfE重组蛋白,该蛋白对BCG休眠菌具有复苏和促生长作用。
- 郭晓雅师长宏史皆然张海赵勇邵成
- 关键词：结核分枝杆菌促生长作用
- 如何认识抗生素这把“双刃剑”——谈抗生素临床应用体会被引量：4
- 2010年
- 抗生素是临床最常用的药物之一,它跟其他药物一样,也具有利弊双重性。本文结合临床之所见,从反面浅谈抗生素使用的一些体会。通过介绍抗生素目前面临的问题,提出临床上医生如何规范应用抗生素,以使抗生素发挥最好疗效而弊端降至最低。
- 郭晓雅邵成史皆然
- 关键词：抗生素双刃剑
- 评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1介导的重组BCG与上皮细胞的结合能力
- 目的：评价PEB1介导的屋尘螨抗原(Der p2)重组BCG疫苗(PEB 1-Der p2-rBCG)与人上皮细胞的结合能力.方法：采用体外细胞培养的方法,分别将普通BCG、胞壁型Der p2-rBCG和胞壁型融合蛋白P...
- 胡琳洁郭晓雅侯美娜邵成史皆然
- 关键词：重组BCG细胞黏附HELA细胞
- 评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1介导的重组BCG与上皮细胞的结合能力被引量：1
- 2011年
- 目的:评价PEB1介导的屋尘螨抗原(Derp2)重组BCG疫苗(PEB1-Derp2-rBCG)与人上皮细胞的结合能力。方法:采用体外细胞培养的方法,分别将普通BCG、胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEB1-Derp2-rBCG与HeLa细胞及人类肠粘膜上皮细胞(HIEC)进行共孵育,利用HE和抗酸染色法对各组细胞与疫苗的黏附结果进行染色,光学显微镜下计数各组的黏附率,并进行比较;对以上各组分别加入PEB1蛋白,进行黏附阻断,观察对结合能力的影响。结果:孵育24小时后,无论HeLa细胞还是HIECPEB1-Derp2-rBCG组较普通BCG组和Derp2-rBCG组的黏附率明显提高,差异有显著性(P<0.05);PEB1蛋白的加入对PEB1-Derp2-rBCG的黏附功能有明显抑制作用(P<0.05);但是,Derp2-rBCG组与普通BCG组比较没有明显差异(P>0.05),PEB1蛋白的加入对二者的黏附亦无影响(P>0.05)。结论:PEB1具有介导增强PEB1-Derp2-rBCG与上皮细胞黏附的能力。
- 胡琳洁郭晓雅侯美娜邵成史皆然
- 关键词：重组BCG细胞黏附
