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沙门菌Omp D介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定: 目的利用重组BCG技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Der p2和Omp D抗原的两种rBCG口服疫苗。方法经PCR法分别扩增获得Der p2和Omp D基因,测序正确后将两者克隆入原核表达载体pProEXHT...; 郭晓雅史皆然邵成胡琳洁侯美娜吴昌归; 文献传递

胞壁形式表达融合蛋白Der p2-PEB1重组BCG的构建和鉴定被引量：3: 2010年; 利用重组BCG技术,构建能以胞壁形式表达屋尘螨Der p2和PEB1抗原的重组BCG口服哮喘疫苗pCW-Der p2-PEB1-rBCG,以pCW-Der p2质粒和pUC-PEB1质粒DNA为模板扩增基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1。将重组质粒电穿导入BCG感受态细胞,潮霉素抗性筛选rBCG阳性克隆。阳性rBCG经PCR特异性扩增目的基因片段Der p2及PEB1,证实其中含有目的基因。用抗Der p2单克隆抗体和制备的小鼠PEB1抗血清对rBCG进行间接免疫荧光鉴定。结果成功扩增了Derp2及PEB1基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1,并将质粒电穿入BCG中,免疫荧光法鉴定其成功。说明成功地构建了胞壁表达Derp2-PEB1融合蛋白重组BCGpCW-Der p2-PEB1-rBCG。为基因工程疫苗的研制奠定了基础。; 邵成史皆然郭晓雅胡琳洁侯美娜; 关键词：P2 重组BCG

沙门菌Omp D介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定: 2012年; 目的利用重组BCG（rBCG）技术，构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Derp2和OmpD抗原的两种rBCGLI服疫苗。方法经PCR法分别扩增获得Derp2和OmpD基因，测序正确后将两者克隆人原核表达载体pProEXHTb，获得pProEXHTb-De．rp2-OmpD质粒。①串联表达：将Derp2-OmpD融合基因亚克隆人穿梭胞壁表达载体pCW，经酶切鉴定阳性命名为pCW-Derp2-OmpD质粒。将此重组质粒电穿导人BCG感受态细胞，构建可胞壁串噘表达Derp2-OmpD融合蛋白的rBCG；②并联表达：构建pCW-Derp2与pCW-OmpD两种质粒，井将二者同时电穿导人BCG感受态细胞，以构建胞壁并联表达Derp2和OmpD蛋白的rBCG。经潮霉素抗性筛选的阳性克隆，均采用以下三种方式进行鉴定：PCR特异性扩增目的基因片段；用兔抗Derp2多克隆抗体与兔抗OmpD多克隆抗体对阳性克隆分别进行斑点免疫杂交法和间接免疫荧光法鉴定。结果采用基因工程手段制备出以胞壁形式串联和并联表达Derp2和OmpD蛋白的两种rBCG口服疫苗，并通过PCR、斑点免疫杂交法及间接免疫荧光法分别进行鉴定。结论两种rBCG口服疫苗构建成功，为体外实验和临床应用提供基础。; 郭晓雅邵成胡琳洁侯美娜史皆然; 关键词：OMP P2 重组BCG 口服疫苗

屋尘螨抗原Der p2重组耻垢分枝杆菌的构建及其鉴定被引量：1: 2012年; 目的构建并鉴定能够分泌表达外源蛋白——屋尘螨抗原(Der p2)的基因重组耻垢分枝杆菌(rM.s)。方法采用电穿技术,将鉴定好的PCW-Der p2质粒转化到耻垢分枝杆菌(M.s),通过PCR鉴定目标基因在rM.s中的表达。结果经PCR鉴定,成功将PCW-Der p2质粒转化到M.s。结论成功构建了以分泌方式表达外源蛋白的Der p2-rM.s。; 侯美娜郭晓雅史皆然; 关键词：耻垢分枝杆菌

沙门菌OmpD介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定: 目的：利用重组BCG技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Der p2和Omp D抗原的两种rBCG口服疫苗.方法：经PCR去分别扩增获得Der p2和Omp D基因,测序正确后将两者克隆入原核表达载体pProEX...; 郭晓雅史皆然邵成胡琳洁侯美娜吴昌归; 关键词：重组BCG 口服疫苗

兔抗PEB1多克隆抗体的制备及鉴定: 2012年; 利用纯化的空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,制备其多克隆抗体。用PEB1蛋白作为抗原免疫兔,分离血清得到兔抗PEB1多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价,并用Western-Blotting验证。PEB1蛋白免疫兔后,得到了兔抗PEB1多克隆抗体,间接ELASA法检测表明兔抗PEB 1血清效价达到1∶10 000,Western印记检测表明,该抗体能与PEB1蛋白发生特异性结合,其特异性与敏感性均较好。获得了高效价的PEB1多克隆抗体。; 侯美娜侯美娜郭晓雅解婷邱奕; 关键词：空肠弯曲菌多克隆抗体

抗生素预处理后口服Der p2重组耻垢分枝杆菌调节免疫应答的研究: 背景哮喘是一种全球范围内的发病率和死亡率逐渐上升的慢性疾病，严重威胁人类健康，降低患者生活质量，给病人及社会造成了巨大的经济负担。哮喘被认为是具有一定遗传学基础的个体，受环境中过敏原反复刺激导致体内免疫紊乱，以...; 侯美娜; 关键词：抗生素肠道菌群重组耻垢分枝杆菌; 文献传递

评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1介导的重组BCG与上皮细胞的结合能力: 目的：评价PEB1介导的屋尘螨抗原(Der p2)重组BCG疫苗(PEB 1-Der p2-rBCG)与人上皮细胞的结合能力.方法：采用体外细胞培养的方法,分别将普通BCG、胞壁型Der p2-rBCG和胞壁型融合蛋白P...; 胡琳洁郭晓雅侯美娜邵成史皆然; 关键词：重组BCG 细胞黏附 HELA细胞

评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1介导的重组BCG与上皮细胞的结合能力被引量：1: 2011年; 目的:评价PEB1介导的屋尘螨抗原(Derp2)重组BCG疫苗(PEB1-Derp2-rBCG)与人上皮细胞的结合能力。方法:采用体外细胞培养的方法,分别将普通BCG、胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEB1-Derp2-rBCG与HeLa细胞及人类肠粘膜上皮细胞(HIEC)进行共孵育,利用HE和抗酸染色法对各组细胞与疫苗的黏附结果进行染色,光学显微镜下计数各组的黏附率,并进行比较;对以上各组分别加入PEB1蛋白,进行黏附阻断,观察对结合能力的影响。结果:孵育24小时后,无论HeLa细胞还是HIECPEB1-Derp2-rBCG组较普通BCG组和Derp2-rBCG组的黏附率明显提高,差异有显著性(P<0.05);PEB1蛋白的加入对PEB1-Derp2-rBCG的黏附功能有明显抑制作用(P<0.05);但是,Derp2-rBCG组与普通BCG组比较没有明显差异(P>0.05),PEB1蛋白的加入对二者的黏附亦无影响(P>0.05)。结论:PEB1具有介导增强PEB1-Derp2-rBCG与上皮细胞黏附的能力。; 胡琳洁郭晓雅侯美娜邵成史皆然; 关键词：重组BCG 细胞黏附

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侯美娜