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半定量逆转录-聚合酶链反应检测肺癌组织S100C基因的表达及其原核表达载体的构建和鉴定: 2008年; 目的分析S100C基因在肺癌组织中的表达情况,并构建S100C蛋白的原核表达载体。方法以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测26例肺癌组织和配对癌旁组织S100C基因mRNA的表达水平;运用RT-PCR技术克隆S100C基因的cDNA全长片段,与PET30a连接构建原核表达载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,进行阳性克隆筛选鉴定。结果肺癌组织中S100C mRNA表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。成功构建了S100C原核表达载体,序列同源性达100%。结论S100C基因表达下调在肺癌的发生中可能起重要作用;成功构建了S100C原核表达载体。; 赵向锋张慧珍金蕾杨继要刘桂芝陈景涛吴逸明; 关键词：RT-PCR 原核表达载体

肺癌蛋白标志物的筛选、克隆及生物学效应研究: 张慧珍郭红祥吉顺利杨纪峰杨继要许东范清堂郝艳红金蕾赵向锋吴逸明; 肺癌是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤，已经成为癌症死亡的主要病因。近年来通过采用控制吸烟及大气污染等措施，发达国家的肺癌发病率有所下降。随着我国社会的进步和工业现代化的进程，对环境造成的污染加重以及吸烟人群的增加，我...; 关键词：; 关键词：肺癌蛋白标志物克隆生物学效应

亲环素A的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备被引量：1: 2010年; 目的构建人亲环素A(CypA)基因的原核表达载体,诱导表达、纯化蛋白,制备抗体,为进一步研究其生物学作用奠定基础。方法以人肺癌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增CypA基因片段,克隆到pMD18-T载体中。扩增产物与原核表达载体pET30a(+)连接,构建表达质粒pET30a-CypA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍树脂亲和层析柱High-Affinity Ni-IDA Resin纯化表达产物,SDS-PAGE检测纯化蛋白。用获得的蛋白免疫大白兔,制备抗CypA蛋白多抗,采用蛋白印迹法检测抗体特异性。结果成功构建了CypA的原核表达载体,经大肠杆菌诱导表达、镍亲和层析柱纯化,得到纯度达80.2%的融合蛋白,免疫大白兔后得到多抗血清。蛋白印迹结果显示此多克隆抗体能与CypA蛋白特异性结合。结论成功获得CypA纯化蛋白及CypA多克隆抗体,为进一步研究CypA在肺癌中的作用机制奠定了基础。; 张慧珍王钧金蕾吴逸明; 关键词：亲环素A 原核表达分离纯化多克隆抗体

半定量RT-PCR检测肺癌组织S100C的表达及其原核表达载体的构建和鉴定: 2008年; 目的分析S100C基因在肺癌组织中的表达情况,并构建S100C蛋白的原核表达载体。方法以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测26例肺癌组织和配对癌旁组织S100C基因mRNA的表达水平;运用RT-PCR技术克隆S100C基因的cDNA全长片段,与PET30a连接构建原核表达载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,进行阳性克隆筛选鉴定。结果肺癌组织中S100C mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。成功构建了S100C原核表达载体,序列同源性达100%。结论S100C基因表达下调在肺癌的发生中可能起重要作用;成功构建了S100C原核表达载体。; 赵向锋张慧珍金蕾杨继要刘桂芝陈景涛吴逸明; 关键词：肺癌 RT-PCR 原核表达载体

铁蛋白轻链的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备: 2007年; 目的:构建FTL的原核表达载体,获得FTL纯化蛋白,制备抗体,为研究其生物学作用奠定基础。方法:采用基因重组技术将PCR扩增的FTL基因产物与原核表达载体pET30a(+)连接,转化入大肠杆菌BL21(DE3),通过PCR、单双酶切及测序鉴定构建结果,用IPTG诱导蛋白表达,将融合蛋白纯化后,免疫日本大白兔,制备FTL多抗,采用Western印迹法检验抗体特异性。结果:成功地构建了FTL的原核表达载体,经大肠杆菌中诱导表达、镍亲和层析柱纯化,得到较纯的相对分子质量约25800的融合蛋白,免疫日本大白兔后得到多抗血清,Western印迹结果显示此多克隆抗体与FTL蛋白特异性结合。结论:本研究获得FTL纯化蛋白,制备了FTL多克隆抗体,为进一步研究FTL的作用机制及其在肺癌组织中的表达情况奠定了基础。; 金蕾张慧珍杨继要赵向锋王琳吴逸明; 关键词：铁蛋白原核表达重组融合蛋白质类

人FTL基因的克隆、表达纯化及其多克隆抗体的制备: 肺癌是目前全世界最常见的呼吸系统恶性肿瘤，近些年来其发病率和死亡率呈逐年上升趋势，已成为严重威胁人类健康的疾病之一。寻找理想的表型生物标志物，阐明肺癌发生发展过程中起关键作用的分子，以用于肺癌的...; 金蕾; 关键词：RT-PCR 原核表达多克隆抗体; 文献传递

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金蕾