陈磊
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华东师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：上海市青年科技启明星计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人颗粒酶A全长基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 目的克隆人颗粒酶A(Granzyme A,GzmA)基因,在大肠杆菌中进行表达,并初步优化表达条件。方法通过RT-PCR扩增人GzmA基因,插入原核表达载体pET24a(+)中,构建重组表达质粒pET24a-GzmA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并对诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值进行优化。结果重组表达质粒pET24a-GzmA经双酶切和测序,证实GzmA基因已正确插入载体中,且序列正确;表达的重组蛋白相对分子质量约29 000,且可与小鼠抗His单抗特异性结合;工程菌的最佳诱导温度为37℃,IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值对重组蛋白的表达量影响较小。结论成功克隆了人GzmA基因,并在大肠杆菌中进行了表达。
- 杜佳妮陈磊龙凤英江文正
- 关键词：克隆分子原核细胞
