严若峰
- 作品数：179 被引量：231H指数：8
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 一种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位DNA疫苗
- 本发明涉及生物兽药技术领域，公开一种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位DNA疫苗。一种鸡艾美耳球虫多价多表位DNA疫苗，包含真核表达载体以及其中插入的T细胞表位集中的4个基因片段：序列为SEQ ID NO.1的第1-312...
- 李祥瑞宋小凯严若峰徐立新任喆
- 文献传递
- 刚地弓形虫组蛋白H2Bb及H2Bv的免疫保护作用被引量：2
- 2021年
- 为了探究刚地弓形虫组蛋白H2Bb及H2Bv的体外表达及其对小鼠的免疫保护作用,以刚地弓形虫RH株的cDNA作为模板,利用原核表达技术表达弓形虫组蛋白H2Bb及H2Bv。表达后的上述重组蛋白纯化后免疫小鼠,采集免疫后小鼠的血清,测定血清中的总一氧化氮(NO)、抗体及免疫相关细胞因子,分离小鼠脾,测定小鼠脾淋巴细胞的吞噬功能,最后小鼠腹腔接种弓形虫并绘制小鼠的生存曲线。结果显示,成功表达了弓形虫重组蛋白H2Bb(rTgH2Bb)及重组蛋白H2Bv(rTgH2Bv)。Western-blot结果表明重组蛋白具有良好的免疫原性。重组蛋白rTgH2Bb及rTgH2Bv免疫组小鼠血清中Ig G1的水平在一免和二免后均与对照组差异显著(P<0.05),rTgH2Bb及rTgH2Bv免疫组小鼠血清细胞因子γ干扰素的水平在一免及二免后均有显著提高(P<0.05)。rTgH2Bb和rTgH2Bv免疫组小鼠血清中NO含量在2次免疫后均显著高于对照组(P<0.05)。二免后重组蛋白rTgH2Bb免疫组和rTgH2Bv免疫组小鼠脾淋巴细胞的吞噬能力均显著高于对照组(P<0.05)。攻虫感染后,rTgH2Bb和rTgH2Bv免疫组小鼠的生存时间较对照组相比有所延长。结论:重组蛋白rTgH2Bb和rTgH2Bv有一定的抗弓形虫急性感染的作用,具有作为弓形虫疫苗候选抗原的潜在价值。
- 周天缘于正青李纯静王茗悦刘军龙罗建勋徐立新宋小凯严若峰李祥瑞
- 关键词：刚地弓形虫组蛋白原核表达免疫保护疫苗
- 刚地弓形虫柠檬酸合成酶Ⅰ在体外对小鼠巨噬细胞的作用研究
- 刘欣超马群山孙晓妮陆明敏徐立新严若峰宋小凯李祥瑞
- 鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因的原核表达及动物免疫试验被引量：7
- 2016年
- 为了研究鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因原核表达重组蛋白的免疫效力,分析其在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中对鸡平均增重、抗球虫指数(ACI)、减少盲肠病变和卵囊数量中的作用,从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA作为模板,用RT-PCR扩增出SO7基因片段,再应用DNA重组技术将SO7基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中并用IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,pET32a(+)-SO7表达的目的蛋白约为40ku,主要以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白进行动物免疫试验显示,SO7重组蛋白在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中有较好的免疫保护作用,能够显著提高鸡柔嫩艾美耳球虫感染鸡的平均增重和抗球虫指数(ACI),对减少盲肠病变和卵囊数量也有部分作用。
- 仇保丰宋鸿雁严若峰宋小凯徐立新李祥瑞
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫克隆免疫效力
- 刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9对小鼠Ana-1巨噬细胞功能的影响
- <正>本试验旨在探究刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9(CDPK9)对小鼠Ana-1巨噬细胞活性及功能的影响。利用激光共聚焦技术验证(CDPK9与Ana-1巨噬细胞的结合情况;采用细胞计数试剂盒(cell counting ki...
- 马群山刘欣超孙晓妮王帅徐立新宋小凯严若峰李祥瑞
- 文献传递
- 旋毛虫果糖-1,6-二磷酸酶基因的克隆表达及生物学特性分析
- <正>根据GenBank公布的旋毛虫果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)基因序列,设计1对特异性引物,以旋毛虫总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增出1条约为1 kb的DNA片段。测序结果表明该片段包含FBP的完整ORF,长...
- 张萌萌徐立新宋小凯李祥瑞严若峰
- 文献传递
- DNA vaccine encoding Haemonchus contortus Actin induces partial protection in Goats
- Actin is a globular multi-functional protein that forms microfilaments,and participates in many important cell...
- 严若峰Jingjing WangLixin XuXiaokai Song李祥瑞
- 关键词：ACTIN
- 文献传递
- 巨型艾美耳球虫抗原Em8对鸡外周血单核细胞功能的影响
- 2015年
- 探讨了巨型艾美耳球虫抗原Em8体外对鸡外周血单核细胞(PBMCs)功能的影响。选取抗原基因Em TFP250中具有较好免疫保护性的Em8基因片段,并对其进行原核表达纯化出重组蛋白。无菌采集未被鸡球虫感染的鸡的外周血,分离出单核细胞,加入终浓度为5μg/m L的Em8重组蛋白进行体外培养,通过免疫荧光抗体技术观察重组蛋白与单核细胞的结合情况;Em8重组蛋白不同浓度体外刺激鸡外周血单核细胞,用q PCR技术测定各实验组单核细胞中IL-4、IL-17D、IFN-γ、TGF-β4的mRNA转录水平;采用CCK-8法测定细胞的增殖情况;Em8重组蛋白不同浓度(低、中、高浓度)体外与巨噬细胞共培养,测定巨噬细胞吞噬和NO分泌功能。结果表明:重组蛋白Em8是巨型艾美耳球虫的重要抗原,发挥广泛而重要的免疫作用。其中,重组蛋白Em8能够与外周血单核细胞结合并能刺激细胞因子IL-17D和IFN-γ的表达水平显著提高(P<0.01),能够引起单核细胞增值(P<0.01),巨噬细胞吞噬作用增强(P<0.01)且NO分泌增加(P<0.01)。
- 隋煜霞涂浩张振超王帅宋小凯徐立新严若峰李祥瑞
- 关键词：巨型艾美耳球虫外周血单核细胞细胞因子
- 一种鸡柔嫩艾美耳球虫复合免疫调节型DNA疫苗
- 本发明涉及一种鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)复合免疫调节型DNA疫苗，属于生物兽药技术领域。利用分子生物学技术分别将鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子阶段基因SO7和第二代裂殖子阶段基因MZ5-7T细胞表位集中的...
- 李祥瑞宋小凯严若峰徐立新
- 文献传递
- 利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库被引量：4
- 2015年
- [目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库,然后将cDNA从初级文库重组到p VAX1.0上,构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,最后用7个已知巨型艾美耳球虫基因的引物鉴定文库。[结果]构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库总容量为0.92×107CFU,插入片段平均大小为1.63 kb;表达文库总容量为2.32×107CFU,插入片段平均大小为1.64 kb。两种文库的阳性重组率均为100%。能用特异性引物从该表达文库扩增出7个已知的巨型艾美耳球虫基因。[结论]该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础。
- 李梦辉刘连瑞涂浩黄经纬张振超徐立新严若峰李祥瑞宋小凯
- 关键词：巨型艾美耳球虫孢子化卵囊GATEWAY技术CDNA表达文库
