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任精华: 作品数：37 被引量：110H指数：5; 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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蛋白酶活化受体1活化或抑制对鼻咽癌细胞迁移侵袭及缝隙连接蛋白43表达的影响被引量：1: 2013年; 背景与目的:蛋白酶活化受体1(protease-activated receptor 1,PAR1)在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用,其在鼻咽癌中的作用机制尚不清楚。本文旨在检测PAR1活化或抑制对鼻咽癌细胞(CNE1-LMP1)增殖及侵袭的影响,并初探其机制。方法:选取高表达PAR1的CNE1-LMP1细胞系作为研究对象,首先采用四甲基偶氮唑盐(MTT)、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测PAR1特异性激动肽SFLLRN和特异性抑制剂SCH79797对CNE1-LMP1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。然后应用实时定量PCR(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测PAR1活化及抑制前后缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)mRNA及蛋白表达情况,并比较组间表达差异。结果:与CNE1-LMP1细胞未处理组相比,PAR1特异性激动肽SFLLRN能够促进CNE1-LMP1细胞增殖、迁移和体外侵袭,同时发现Cx43 mRNA和蛋白量明显减少(P<0.05)。与CNE1-LMP1细胞未处理组相比,PAR1抑制剂SCH79797能明显抑制CNE1-LMP1细胞增殖、迁移和体外侵袭,并且发现Cx43 mRNA和蛋白量明显增高(P<0.05)。结论:活化PAR1能够促进鼻咽癌细胞系CNE1-LMP1的增殖、迁移和侵袭,减少Cx43 mRNA和蛋白表达,而抑制PAR1的表达能抑制鼻咽癌细胞系CNE1-LMP1的增殖、迁移和侵袭,增加Cx43 mRNA和蛋白表达。; 张晓玲王涛彭纲张利玲李跃华李品东任精华; 关键词：鼻咽癌缝隙连接蛋白43

放射联合内皮抑素对人鼻咽癌细胞系VEGF表达及放射敏感性作用的研究: 2010年; 在所有内源性血管生成抑制因子中，内皮抑素拥有最广的抗瘤谱和最小的毒性，且不产生耐药性。内皮抑素与放疗联合应用可改善放疗疗效，增强抗瘤效应，而不增加毒副反应。笔者将重组人血管内皮抑素和放射进行不同方案的联合，体外探讨其对鼻咽癌细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达及放射敏感性的作用。; 杜宇伍钢任精华李贵玲曹如波李振宇; 关键词：重组人血管内皮抑素人鼻咽癌细胞系 VEGF表达内源性血管生成抑制因子抗瘤效应

Corilagin对小鼠小胶质细胞株照射后炎性反应因子表达的抑制作用: 2010年; 目的研究抗炎药物Corilagin抑制放射引起小胶质细胞（BV-2）炎性反应的作用及其防护的分子机制.方法细胞抑制实验（MTT）检测Corilagin对BV-2细胞的抑制率;Corilagin预处理小胶质细胞,12 h后,以0和32 Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real-time PCR检测小胶质细胞照射后不同时间点炎性反应因子IL-1β、TNF-α表达水平;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量;Western blot检测各组细胞核转录因子NF-κB p65蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察各组细胞标志物Iba-1的表达、NF-κB p65核转位及Nemo的表达.结果 1～10μg/ml浓度范围内Corilagin对BV-2细胞增殖几乎无影响;照射后小胶质细胞表面标志物Iba-1表达明显,提示小胶质细胞激活,且炎性反应因子NO、TNF-α、IL-1β表达上调,而Corilagin（5μg/ml）可以显著抑制上述炎性反应因子的表达（tIL-1β=6.341,tTNF-α=3.411,tNO=3.134,P＜0.05）;Corilagin可抑制NF-κB活化蛋白Nemo,并显著抑制NF-κB p65的转位.结论 Corilagin可能通过NF-κB信号转导途径抑制照射后小胶质细胞的活化,从而下调炎性反应因子表达,保护神经元.; 罗鸣伍钢范丽张瑞光任精华董继华董晓荣; 关键词：CORILAGIN 小胶质细胞 NF-ΚB 放射性脑损伤

人RASSF2基因的真核表达载体的构建及其表达: 2004年; 目的　构建人RASSF2基因的真核表达载体 ,为研究RASSF2在肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞等方面的作用奠定基础。方法　采用RT PCR自正常人外周血单个核细胞RNA中扩增出人RASSF2基因的全长cDNA ,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体 pcDNA3.1/HisC中获得重组质粒。用脂质体将重组质粒转染人胰腺癌细胞株PANC 1,RT PCR检测其表达。结果　酶切图谱分析及基因测序证明人RASSF2表达片段已被完整、正确的插入到 pcDNA3.1/HisC中 ,RT PCR结果显示转染细胞RASSF2表达水平上调。结论　成功构建了RASSF2基因的真核表达载体 pcDNA3.; 任精华林菊生宋东坡; 关键词：真核表达载体基因治疗

CYP2B1新型自杀基因的真核表达载体的构建和瞬时表达被引量：1: 2005年; 目的　构建一种新型的CYP2B1自杀基因表达载体并检测其在肿瘤细胞中的表达。方法　根据genebank中鼠CYP2B1基因的核苷酸序列设计一对引物 ,以pc3 /2B1为模板进行PCR扩增 ,将PCRCYP2B1基因产物定向插入到pcDNA3 0中 ,构建CYP2B1基因表达载体pcDNA3 0 /CYP2B1;通过酶切、PCR及测序鉴定重组体。采用脂质体介导法将pcDNA3 0 /CYP2B1转染三种肿瘤细胞株 ,RT -PCR检测CYP2B1基因在各细胞株中的表达。结果　目的片段均成功插入相应的载体中 ,CMV启动子调控下的CYP2B1基因在不同的肿瘤细胞株中实现了表达。结论　CMV启动子调控的CYP2B1真核基因表达载体是肿瘤基因治疗中一种新型、高效的治疗载体。; 刘址忠蔡晓坤林菊生任精华梁扩寰黄文英; 关键词：真核表达载体肿瘤基因治疗

盐霉素对乳腺癌转移的抑制作用被引量：2: 2013年; 目的观察盐霉素对乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7／ADR、MDA—MB-231的体外增殖和侵袭能力的影响，探讨其对乳腺癌细胞的转移抑制作用。方法用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖，得出半数抑制浓度（IC50）值；用Transwell小室法检测侵袭能力的变化；分别用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）法和Westernblot法检测ETS1和基质金属蛋白酶（MMP）-1基因和蛋白的表达变化。结果盐霉素抑制乳腺癌细胞的增殖，3种细胞的IC50值分别为（7．47±0．64）、（5．11±0．97）、（4．08±0．85）μmoL／L；经不同浓度的盐霉素处理后，3种细胞侵袭能力逐渐下降，分别为对照组的65．9％／41．9％、55．8％／37．8％、48．5％／24．6％；MCF-7／ADR和MDA—MB-231的ETS1和MMP-1表达水平随着盐霉素浓度升高而下降。结论盐霉素可以抑制乳腺癌细胞的增殖，降低其侵袭能力。; 赵月沈娜任精华赵向旺黄韬何文山; 关键词：乳腺癌盐霉素增殖

细胞周期蛋白E siRNA真核表达载体的构建与鉴定被引量：2: 2007年; 目的构建细胞周期蛋白E(Cyclin E)小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并检测其抑制乳腺癌细胞株MCF-7中Cyclin E表达的效果。方法根据基因文库中Cyclin E的cDNA序列,设计并合成两段siRNA,分别转入到pGENESIL-1质粒中,并对重组质粒(命名为pGENESIL/Cyclin E-1和pGENESIL/Cyclin E-2)进行测序鉴定。脂质体介导下转染MCF-7细胞株,RT-PCR检测转染后Cyclin E的表达。结果Cyclin E siRNA真核表达载体构建成功,测序结果显示插入片段的方向和序列与预想一致。RT-PCR检测显示Cyclin E的表达显著降低。结论Cyclin E siRNA真核表达载体的成功构建为进一步研究以Cyclin E为靶位点对乳腺癌进行基因治疗奠定了重要的实验基础。; 何文山黄韬任精华田元; 关键词：细胞周期蛋白E 小干扰RNA 乳腺癌

肾母细胞瘤过度表达基因对大鼠肝星状细胞生物学行为的影响被引量：1: 2007年; 目的:构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)的小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞(HSC)活化、增殖、凋亡、分泌细胞外基质(ECM)的影响方法:以NOV为目的基因,以质粒psiRNA- hHlneo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA (psiRNA1,2,3)和阴性对照重组质粒pconsiRNA.限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组.半定量RT-PCR检测HSC的NOV、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达情况,Western blot检测α-SMA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了NOVsiRNA表达质粒:与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV、α-SMA的mRNA表达水平下降(73.0% vs 23.2%,51.4% vs 15.1%,均P<0.05),Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平明显下降(59.8% vs 17.0%,37.1% vs 6.6%,P<0.05),α-SMA蛋白表达水平下降.与空白对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内HSC增殖活性显著降低(24 h:0.172±0.005 vs 0.318±0.018.P<0.05:48 h:0.296±0.004 vs 0.472±0.029,P<0.05:72 h:0.432±0.024 vs 0.672±0.050,P<0.05).psiRNA1组、psiRNA3组的HSC内NOV mRNA、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达及HSC增殖活性均无明显下降(均P>0.05).结论:NOV可促进HSC增殖、活化及分泌细胞外基质,提示NOV可以作为肝纤维化基因治疗的一个新的靶位点.; 徐冬林菊生任精华陈琼姚津剑何星星; 关键词：小干扰RNA 肝星状细胞

卵泡刺激素与肿瘤血管生成被引量：3: 2011年; 研究表明卵泡刺激素（FSH）在卵巢癌的发生发展中通过影响缺氧诱导因子-1（HIF-1）、血管内皮生长因子（VEGF）等因子的水平对血管生成起重要的调节作用。新近研究提示FSH—FSH受体（FSHR）可能参与了肺癌等性腺外实体瘤的血管生成过程。FSH与肿瘤血管生成密切相关，可能成为抗肿瘤血管生成的新靶点。; 刘涛任精华伍钢; 关键词：卵泡刺激素血管生成诱导剂抗药性肿瘤

细胞周期蛋白E小干扰RNA靶向调控乳腺癌细胞的生长被引量：2: 2009年; 目的研究乳腺癌细胞中细胞周期蛋白E（cyclin E）对乳腺癌细胞肿瘤生物学特征的影响。方法用带有cyclin E小干扰RNA（siRNA）的真核表达载体pEGFP／CCNE2转染乳腺癌细胞系MCF-7。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot方法分别在RNA水平和蛋白水平检测siRNA对细胞内cyclin E表达水平的影响，CCK-8方法检测转染后细胞株生长增殖能力以及对化疗药物的敏感性，流式细胞仪检测细胞周期的变化，裸鼠移植瘤成瘤实验检测转染后细胞成瘤能力的变化。结果pEGFP／CCNE2转染后，MCF-7细胞内cyclin E的表达受到抑制，cyclin E mRNA相对表达水平为0．23±0．05，蛋白相对表达水平为0．24±0．05；细胞的生长增殖能力下降，抑制率为68．56％±0．08％，对化疗药物的敏感性增加；细胞被大量阻滞在G1期，G1期细胞占77．38％。细胞的成瘤能力降低，移植瘤体积缩小。结论抑制乳腺癌细胞中cyclin E的表达能够抑制乳腺癌细胞的生长、分化和增殖，提高肿瘤对化疗药物的敏感性。; 何文山黄韬任精华; 关键词：细胞周期蛋白E RNA干扰药物敏感性

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