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环介导等温核酸扩增技术快速检测产毒亚历山大藻被引量：8: 2007年; DNA环介导等温扩增(LAMP)方法是一种新型的核酸扩增技术,该方法是在等温的条件下进行的,具有反应时间短、灵敏度高、特异性强的特点。本文以产麻痹性贝毒(PSP)的亚历山大藻为研究对象,采用简易法提取DNA模板,设计特异性LAMP引物,利用LAMP技术进行产毒藻种的快速检测,同时,着重对LAMP技术与PCR技术在检测微小亚历山大藻细胞的灵敏度方面做了比较。向LAMP终产物中加入SYBRGreenI染料后可直接用肉眼观察结果而不需要通过凝胶电泳来观察。结果表明,LAMP技术在恒温65℃,1h内就可以检测到产毒藻种;LAMP技术检测微小亚历山大藻的最低检测限为200个/ml,而PCR技术的最低检测限为1000个/ml,LAMP扩增方法比PCR扩增方法的程序简单、反应时间短、灵敏度高;LAMP技术不需要精密的温度循环装置,有恒温加热设备就可以满足检测条件,可用于野外检测。; 刘芳王丽李琳山崎伸二石磊; 关键词：亚历山大藻

新型恒温核酸扩增法快速检测副溶血性弧菌的研究被引量：12: 2008年; 利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)设计一对外引物和一对内引物,通过引物特异性识别tlh基因上的六个独立区域来快速检测副溶血弧菌。同时将检测结果与PCR方法进行比较。结果表明,LAMP反应在65℃恒温条件60min内完成,凝胶电泳呈现梯型条带;肉眼观察阳性结果出现白色混浊现象,添加1×SYBRGreenI荧光染料后,绿色的阳性结果很明显区别于橙色阴性结果;LAMP方法的最低检出限为10CFU/ml,PCR方法为103CFU/ml,LAMP方法检测灵敏度是PCR方法的100倍。因此,LAMP方法用于快速检测副溶血弧菌具有检测过程简单、反应结果肉眼即辨别并且灵敏度高特异性强的特点。实验装置简便,能够提供稳定热源即可,所以LAMP方法特别适合于现场快速诊断。; 王丽李琳山崎伸二石磊; 关键词：副溶血性弧菌

原位荧光LAMP技术检测食源性沙门氏菌被引量：18: 2009年; 以沙门氏杆菌为研究对象,探讨了将原位荧光LAMP技术应用于检测沙门氏菌所需要的具体实验方法与数据,并成功将原位荧光LAMP技术应用于检测人工污染的食品中的沙门氏菌。实验选取invA基因作为靶序列设计了2对引物。结果证明,与传统沙门氏菌检测方法和PCR方法相比,原位荧光LAMP无需破碎细胞提DNA,反应方便易行,耗时少;反应条件恒定温和,能够减少细胞损伤;单基因检测水平证明反应的高灵敏度;良好的基因定位以及清晰的背景条件使反应结果更加直观,易于观察。; 叶宇鑫李琳山崎伸二石磊; 关键词：沙门氏菌

临床痢疾志贺菌整合子检测及耐药基因盒序列分析被引量：3: 2010年; 目的检测印度东部1988、1995和2002年部分临床分离痢疾志贺菌中细菌耐药关系密切的1、2、3类整合酶基因及整合子携带的耐药基因盒的分布，分析整合子系统对志贺菌耐药的影响。方法纸片扩散法检测实验菌株对药物的敏感性；应用PCR方法对16株临床耐药菌株进行1、2、3类整合酶基因（intI）筛选，对阳性样本可变区基因盒序列进行鉴定分析。结果所有16株菌均耐4种及4种以上药物，包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、氯霉素类和喹诺酮类。13株菌检出1类整合酶基因，全部菌株含2类整合酶基因，即发现同时存在两种整合子结构菌株，未检测到3类整合酶基因。1类整合酶插入基因盒以bla axa30-aadA1基因家族为主，分别对β-内酰胺类抗生素、链霉素、壮观霉素耐药；2类整合酶插入基因盒以dfrAl-sat1组合为主，分别对甲氧苄氨嘧啶、链丝菌素耐药，同时在4株菌中发现dfrA1-sat1-aadA1基因盒组合。结论2类整合子普遍存在于临床志贺菌中，整合子与志贺菌的多重耐药具有密切相关性。; 闫鹤宗敏华石磊山崎伸二; 关键词：整合子类

食源性普罗威登斯菌的分离鉴定和耐药性研究被引量：8: 2014年; 本文研究了食源性普罗威登斯菌在肉类食品中的的分布,以及其耐药表型与I型整合子的携带状况。本文采集了市售猪肉、鸡肉和牛肉等肉类食品,对普罗威登斯菌进行分离与鉴定;采用纸片扩散法对已分离鉴定的普罗威登斯菌进行药敏实验;利用聚合酶链式反应技术筛选携带I型整合子的菌株。结果表明,85份样品中,有38份样品检出普罗威登斯菌,检出率达44.70%。38株普罗威登斯菌中,有44.74%的分离株是多重耐药菌株,最多耐6种抗生素。有两株普罗威登斯菌携带I型整合酶,一株拉氏普罗威登斯菌携带耐药基因盒。这是在国内肉类食品分离的普罗威登斯菌中首次发现I型整合子阳性菌株,表明食品中这种携带有多重耐药的菌株有可能通过食物链向人类传播,是对人类健康造成威胁的潜在危险因素。; 石磊梁思思岛绫香山崎伸二闫鹤; 关键词：耐药性整合子

Sau-PCR法分析由洋葱伯克霍尔德菌引起的院内感染被引量：1: 2008年; 目的通过使用Sau-PCR方法分析一起由洋葱伯克霍尔德菌引起的院内感染，为追溯感染源和感染途径提供有效的信息。方法Sau-PCR首先使用限制性内切酶Sau3AI对基因组DNA进行酶切，获得以GATC序列为黏性末端的酶切产物，然后使用能够识别酶切位点（GATC）的引物对酶切产物进行PCR扩增，最后根据DNA琼脂糖凝胶电泳图谱分析样本之间同源性。结果11株来自患者的菌株中，除1株以外，其余均表现出100％同源性，采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对样本进行验证，结果与Sau-PCR完全一致。结论Sau-PCR是一种实用、简便、迅速的DNA指纹图谱分析工具，在对同源性的研究当中具有广阔应用前景。; 鲁曦阮微媚徐欣山崎伸二石磊; 关键词：聚合酶链反应序列同源性

环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌被引量：4: 2010年; 环介导等恒扩增技术(LAMP)是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术。实验以单增李斯特菌为研究对象,设计了4种LAMP引物以特异地识别单增李斯特菌中gyrB基因的6个特殊区域,并进行LAMP反应,建立单增李斯特菌的LAMP快速检测技术。结果表明,LAMP技术能在恒温条件下,1h内检测出单增李斯特菌,灵敏度达到6.4×101CFU/reaction,并且与其他常见的细菌无交叉反应。其对人工感染牛奶样品的检出量为1CFU/mL,适合于食品中污染单增李斯特菌的快速检测。; 叶宇鑫王彬师宝忠唐尚兴山崎伸二石磊; 关键词：环介导等温扩增单增李斯特菌

DNA环介导恒温扩增技术速检测结核分枝杆菌的研究被引量：21: 2008年; DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术,其检测结果可以通过加入核酸燃料SYBR GreenⅠ进行肉眼观察,也可以通过琼脂糖凝胶电泳进行观察。本文以结核分支杆菌(M.TB)作为研究对象,设计了4种LAMP引物以特异地识别结核分支杆菌中gyrB基因的六个特殊区域,着重于利用LAMP技术在几种常见的致病分支杆菌中能快速、特异地检测出结核分支杆菌。实验结果表明,LAMP技术能在恒温(63℃)条件下,1h内检测出结核分枝杆菌,分别对7株非结核分枝杆菌进行检测,只有一株偶发分支杆菌得到了阳性的结果。说明该技术有望应用于畜牧业中肉制品或乳制品中结核分支杆菌的检测。; 黄帆李琳林世平梅国华山崎伸二石磊; 关键词：结核分枝杆菌

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山崎伸二

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