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张云: 作品数：99 被引量：321H指数：12; 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定被引量：9: 2007年; 经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片段,限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-H5。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:分子量约63kDa重组血凝素蛋白(rH5)在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rH5具有血凝活性,而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制;rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体,说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。; 张晓霁刘明刘春国杨涛张云; 关键词：血凝素基因杆状病毒

鸭坦布苏病毒病E-ELISA检测试剂盒及其制备方法: 本发明涉及以一种坦布苏病毒E蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验(E-ELISA)检测试剂盒、其制备方法及其应用。本发明试剂盒包含标准阳性对照鸭血清、标准阴性对照鸭血清、坦布苏病毒E蛋白(SEQ ID No.2)所包被的EL...; 张云刘明陈志峰; 文献传递

番鸭呼肠孤病毒S14株M基因组的克隆与序列分析: 利用RT-PCR方法首次全基因克隆了番鸭呼肠孤病毒S14株M1,M2和M3基因并进行序列分析,M1,M2和M3核苷酸长度分别为2 283 nt、2 155 nt和1 996 nt,它们编码的氨基酸长度为μA(732 aa...; 张云郭东春耿宏伟刘明; 关键词：番鸭呼肠孤病毒系统进化分析; 文献传递

鹅细小病毒胶体金免疫层析检测方法的建立被引量：2: 2015年; 为建立一种快速、简便地检测鹅细小病毒(GPV)的方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,将其标记于抗GPV VP3蛋白单克隆抗体2D5上,在硝酸纤维素膜上喷涂抗GPV VP3蛋白单克隆抗体4A8和山羊抗小鼠IgG抗体作为检测线和质控线,制成检测GPV的胶体金免疫层析试纸条。结果显示,该试纸条检测GPV的最低TCID50为1×104.15/mL,用制备的试纸条仅检测GPV为阳性,而检测其他主要水禽病的病原结果均为阴性;同一批次和不同批次的试纸条对GPV阳性样品的检测结果均无差异。使用该试纸条对已知的80份粪便样品进行检测,阳性及阴性样品的检测符合率分别为96.49%和100%。结果表明,制备的试纸条具有良好的特异性、敏感性和重复性,为"小鹅瘟"的快速诊断提供了新的方法。; 邵周伍林白小飞刘明张云; 关键词：鹅细小病毒胶体金单克隆抗体

番鸭呼肠孤病毒σB编码基因克隆、表达与间接ELISA诊断方法的建立: 本文对DRV S12 σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12 σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3％-64.0％和60.9％-62.5％;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,W...; 郭东春张云耿宏伟胡奇林郝雪欧阳岁东; 关键词：番鸭呼肠孤病毒基因表达 ELISA 基因克隆; 文献传递

鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析被引量：1: 2016年; 为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增和测序。序列比对结果显示,F72代与F0代相比,5'和3'非编码区存在163个核苷酸差异,多数集中于反向终端重复序列(ITR)中,5'和3'两端均有6段碱基插入;编码区氨基酸序列比对结果显示,与F0代次病毒相比,F72代次病毒共有23个氨基酸位点突变,18个位于VP蛋白,5个位于非结构蛋白。病毒致病性试验表明,随着传代次数的增加,其毒力呈减弱趋势,并且F72代次病毒进一步致弱。本研究对GPV致弱后基因变化情况的分析及动物致病性试验结果为GPV毒力致弱机制的研究奠定了基础。; 张青山李晨曦刘明邵周伍林张云; 关键词：鹅细小病毒全基因组

重组禽流感病毒毒株、其制备方法及由其制得的疫苗: 本发明公开了一种新的重组禽流感病毒毒株，命名为rgH5N3，该毒株的保藏号为CGMCC No.1339。该重组禽流感病毒毒株含有经分子修饰的H5亚型血凝素基因、N3亚型神经氨酸酶基因和具有高产性状禽流感病毒的6个内部基因...; 刘明张云刘春国童光志; 文献传递

鹅细小病毒鹅胚成纤维细胞适应病毒株的培育及序列分析被引量：7: 2014年; 为培育高滴度的鹅细小病毒(GPV)细胞适应病毒株,本研究将原代鹅胚成纤维细胞(GEF)进行连续传代培养,并传至31代次,传代的GEF具有典型的成纤维细胞形态,培养48 h后形成单层细胞。选取不同代次的GEF接种GPV YN分离株,并在GEF中连续传代至F20代,病毒滴度由102.5TCID50/0.1 m L达到106.16TCID50/0.1 m L,表明GPV已适应GEF,并在感染GEF后的72 h产生明显细胞病变。对细胞适应毒F20和亲本病毒F0代进行基因序列比对结果显示,F20与F0存在133个核苷酸差异位点,主要集中在5'和3'非编码区。氨基酸序列共出现22个变异位点,主要集中在VP3蛋白中。这些变异与病毒对细胞培养的适应过程有关,其机理有待进一步研究。; 邱娜刘明白小飞邵周伍林赵健张云; 关键词：鹅细小病毒

禽流感病毒A/Turkey/Canada/63毒株HA和NA基因的克隆及序列分析被引量：8: 2006年; 用SPF鸡胚增殖禽流感病毒(AIV)A/Turkey/Canada/63毒株,提取病毒基因组总RNA,应用RT-PCR技术分别扩增该病毒分离株的HA和NA基因全片段,并克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,该毒株的HA基因全长为1745bp,含有完整的阅读框架,编码566个氨基酸；NA基因全长1467bp,编码469个氨基酸。BLAST序列比较结果显示,该毒株HA基因属于H6亚型,NA基因属于N2亚型。将获得的HA和NA基因与AIV数据库中H6和N2基因进行遗传演化分析,表明该毒株HA基因与其他H6基因核苷酸的同源性为80.5%～87.3%,氨基酸的同源性为88.0%～93.1%；NA基因与其他N2基因核苷酸的同源性为86.0%～93.5%,氨基酸的同源性为90.6%～96.3%。; 潘蔚绮刘明刘春国张云杨涛; 关键词：HA基因 NA基因

鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析: 为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株病毒在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行P...; 张青山李晨曦刘明邵周伍林张云; 关键词：鹅细小病毒全基因组; 文献传递