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DNA损伤反应中细胞周期检查点蛋白p27^(Kip1)表达及其调控机制被引量：3: 2004年; 为了研究DNA损伤反应中p2 7Kip1的表达及其调控机制 ,应用免疫印迹的实验结果表明 :10Gy 60 Coγ射线照射后 3h ,HeLa细胞中p2 7Kip1蛋白水平开始下降并持续到 2 4h ,进而失去它对CDKs的抑制功能 .Northern印迹结果显示 ,电离辐射 (IR)对p2 7Kip1mRNA表达水平无明显影响 ,说明电离辐射诱导p2 7Kip1表达水平的降低主要与蛋白质降解相关 ,但其具体的调控机制还不清楚 .已知在G1—S期p2 7Kip1蛋白的降低主要依赖细胞周期蛋白E Cdk2激酶将其磷酸化后的泛素化蛋白酶体途径 (ubiquitin proteasomepathway) .酶动力学研究结果揭示 :电离辐射后细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性增高 ,12h细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性达到最大 .当在照前用细胞周期蛋白E Cdk2抑制剂olomoucine (10 μmol L)抑制细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性时 ,p2 7Kip1蛋白表达水平增加 .此外 ,还观察到电离辐射可诱导p2 7Kip1泛素化水平的增高 ,而在使用蛋白酶体抑制剂MG 132 (5 μmol L)处理HeLa细胞后 ,可抑制辐射诱导p2 7Kip1蛋白水平的下调 .研究结果提示 :泛素化蛋白酶体途径参与了辐射诱导P2 7Kip1蛋白表达下调的降解机制 .; 张枫孟祥兵宋宜梅柱中董燕刘斌孙志贤; 关键词：电离辐射泛素化蛋白酶体抑制剂

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G_2/M期阻滞及机制被引量：18: 2004年; 背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂。本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和G2/M期阻滞的机制。方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制。结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P<0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白。结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控。; 孙国敬钱俊杰孟祥兵宋宜张枫梅柱中董燕孙志贤; 关键词：HL-60细胞 G2/M期阻滞细胞凋亡蛋白酶体抑制剂 P21蛋白负调控因子

电离辐射诱导细胞周期检查点蛋白p27<'Kip1>表达及其调控机制研究: 在该论文中,我们主要进行了以下三个方面的研究:一.不同剂量电离辐射(1R)对细胞周期G1/S检查点的影响:cyclin E/CDK2激酶活性在2Gy照射后1h略有下降,3h略有回升,12h活性达到最大;10Gy照射后其活...; 张枫; 关键词：电离辐射 PKA 蛋白磷酸化; 文献传递

电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响被引量：16: 2002年; 探讨了电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 .采用抗凋亡抑制蛋白 Survivin的抗体 ,对细胞裂解液进行蛋白质印迹 .与常规操作方法不同之处是 :在电转移的凝胶“三明治”中 ,重叠放置两张硝酸纤维素膜 .电转移后 ,对两张膜同时进行免疫印迹 .在特定的转移条件下 ,两张膜的免疫印迹都出现了Survivin蛋白的特异印迹带 ,证实了电转移中存在着蛋白质的透膜现象 .转移时间、电流强度和蛋白质的分子质量 ,都是影响蛋白质透膜的相关因素 .电转移中蛋白质的透膜 ,可以产生“印迹复制失真”的效应 ,从而最终影响蛋白质印迹定性和定量的结果 .所得实验结果和结论 ,揭示了蛋白质印迹技术方法学中一个需要加以充分关注的问题。; 董燕张枫梅柱中刘斌孙志贤; 关键词：蛋白质免疫印迹假阴性

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张枫