徐秀英
- 作品数：49 被引量：90H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- t-PA突变体的构建、表达及生物学特性分析被引量：3
- 1994年
- t-PA是纤溶系统的生理性激活剂,但它在血浆中半衰期甚短及活性可被天然快速抑制剂PAI-1抑制等生理特性成为其作为临床溶栓剂的主要缺陷。为了研制新型t-PA溶栓剂,本文根据t-PA结构与功能研究的最新信息,针对延长t-PA半衰期、提高特异活性及引入PAI-1抗性等,设计并构建了8种t-PA突变体。进而在COS-7及CHO细胞中进行了表达研究,并对突变体表达产物的特性进行了分析和评价。
- 刘士辉徐秀英陈琳朱恒奇黄培堂黄翠芬
- 关键词：T-PA溶栓剂纤溶系统生理特性候选株非翻译区
- 人酸性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备被引量：3
- 1993年
- 以纯化的重组人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得一株稳定分泌抗haFGF的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其DNA含量为脾细胞与SP2/0细胞DNA含量之和,所分泌抗体为小鼠IgG_1亚类。免疫印迹显示:此单抗只与大肠杆菌中的haFGF有结合,与牛aFGF则没有结合反应。
- 王芳薛沿宁王会信徐秀英刘农乐邵宁生周廷冲
- 关键词：细胞生长因子杂交瘤单克隆抗体
- 用高产菌株制备T_4—DNA连接酶
- 1982年
- DNA连接酶是遗传工程研究工作中必不可少的工具酶,常用的有两类即大肠杆菌DNA连接酶及T4-DNA连接酶。其中T4-DNA连接酶不仅具有连接带有粘末端DNA片段的能力,而且还具有连接平末端DNA片段的能力,因而T4-DNA连接酶比大肠杆菌DNA连接酶的用途更大。
- 于公义王光荣李秀珍徐秀英
- 关键词：连接酶合成酶T4高产菌株DNA
- 组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用被引量：2
- 1991年
- 本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。
- 蒋滋慧王会信谢支光王芳刘农乐徐秀英周廷冲
- 关键词：组织型
- 抗t-PA单克隆抗体的制备及初步应用
- 1996年
- 用猪心t-PA和人黑色素瘤细胞分泌的t-PA作抗原,经腹腔及脾内免疫Bal b/c小鼠。用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,细胞融合串达85％,获得4株抗t-PA杂交瘤细胞株,鼠腹水抗体效价达1∶10~5;Western Blot结果表明该单抗所结合的抗原分子量与t-PA相符,证明所获得的单抗为特异的抗t-PA单抗;对t-PA的纤溶活性中和抑制试验结果表明,4株单抗中的1株能完全抑制st-PA的纤溶活性,另外3株表现出程度不等的抑制;其中1株亚类为IgG,另外3株为IgM。杂交瘤细胞株无支原体污染;染色体数目正常。对该抗体进行初步纯化后,将其应用于rt-PA的研究中。
- 徐秀英陈琳王少飞刘农乐赵立权黄培堂
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤
- 重组人IL-1ra在大肠杆菌中的可溶性表达
- 2004年
- 利用PCR技术从含有IL-1ra的质粒上扩增IL-1ra基因,经过序列测定后插入表达载体pTIG-Trx,并转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。经SDS-PAGE分析显示,IL-1ra表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达产物出现相对分子量大约为17000的一条新生蛋白质带,其大小与预期结果一致,经Western和ELISA分析,证明该带即为目的蛋白,SDS-PAGE显示目的蛋白全部以可溶性蛋白的形式存在。超声破碎后,上清经金属螯和层析纯化获得纯度约为98%的蛋白样品。
- 杨志新周晓巍朱恒奇徐秀英黄培堂
- 关键词：IL-1RA大肠杆菌ELISA表达质粒可溶性表达IPTG
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体的纯化被引量：9
- 2003年
- 稳定高效表达重组人组织型纤溶酶原激活剂 (rht PA)的CHO细胞株和表达组合突变体的细胞株进行了 3L转瓶培养 .将培养上清分别进行了Lys Sepharose 4B亲和层析和Zn2 + Sepharose 4B层析两步纯化 ,rht PA纯度提高了 5 34倍 ,比活达 2 5× 10 5IU mg ,产率为 73% ;突变体纯度提高了1119倍 ,比活达 5 9× 10 5IU mg ,产率为 6 9% .纯化产物SDS PAGE分析显示 ,rht PA和突变体基本都呈单一条带 ,扫描分析均达到 98%以上纯度 .rht PA和突变体在纯化系统中的行为作对照分析发现 ,突变体的构建思想在Lys Sepharose 4B亲和层析过程中有充分体现 .这两步层析组合是很好的纯化t PA及其突变体的方法 ,尤其是Lys Sepharose
- 朱恒奇徐秀英黄培堂
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体纯化
- 组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)全长cDNA序列的克隆及表达被引量：1
- 1994年
- 在先前获得t—PA部分编码序列的基础上,用化学合成法合成了缺少的5′端部分序列,并经多次重组获得了含有t—PA全长cDNA的重组表达质粒pMG-601。经序列分析表明该cDNA序列是正确的,将其导入暂时表达系统COS-7细胞中,能产生有特异性的t—PA产物。将其导入CHO细胞中,经MTX加压扩增,获得产t-PA的细胞株,其表达水平约为400～500IU/(10~6cells·24hr)。
- 黄培堂徐秀英郭建辉程军李丰生方继明石成华黄翠芬
- 关键词：基因克隆
- 从SDS－PAGE中提纯t－PA及其抗原特性分析被引量：2
- 1995年
- 从ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中提纯ｔ－ＰＡ及其抗原特性分析陈琳，徐秀英，刘士辉，朱恒奇，黄培堂（北京军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１）组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）是一种蛋白类溶栓药。与尿激酶、链激酶相比，ｔ－ＰＡ以其与纤维蛋白有特异亲和力，能高...
- 陈琳徐秀英刘士辉朱恒奇黄培堂
- 关键词：链激酶尿激酶抗原SDS-PAGET-PA
- 表达K_(99)和F_(41)双价保护性抗原工程菌株的构建及免疫效果研究被引量：10
- 1993年
- 本文应用基因重组技术,将引起犊牛、羔羊大肠菌腹泻的主要致病因子的保护性抗原基因K_(99)和F_(41)从野生株先分别克隆,然后组构成同时表达两种抗原的工程菌疫苗候选株。研究了该工程菌表达的两种抗原的性质,影响表达的条件。同时经过免疫怀孕母羊然后进行人工攻毒及田间大面积免疫羊群,证明该工程疫苗候选株能有效诱发机体的免疫应答,对羔羊有显著地保护作用。
- 黄培堂李丰生王叙甫钟声徐秀英张群伟王焕金陈明黄翠芬
- 关键词：基因克隆ETEC抗原大肠杆菌
