成海恩
- 作品数：28 被引量：87H指数：5
- 供职机构：浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“春晖计划”重庆医科大学创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核疫苗诱导的细胞免疫机制的研究进展
- 2004年
- 主要从结核疫苗诱导T淋巴细胞的增殖分化、IFN γ的产生及其调控、IL 1 2、IL 6和IL 4等细胞因子在诱导CD4 + T细胞分化中的作用 ,以及TGF β诱导BCG激活的T细胞凋亡等几个方面 。
- 成海恩卢贤瑜
- 关键词：结核疫苗细胞免疫功能T淋巴细胞结核杆菌
- 结核菌H37Ra免疫小鼠后巨噬细胞TNF-α表达的初步探讨被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨小鼠接种结核菌H37Ra株后,巨噬细胞表达TNF -α的活性情况。方法:H37Ra皮内、腹腔途径免疫小鼠后第30、6 0天,采用生物学活性方法检测小鼠腹腔巨噬细胞表达的TNF -α活性。结果:小鼠接种H37Ra后,30天时TNF-α活性分别为2 2 .0 6U/ml(腹腔)和2 2 .6 3U/ml(皮内) ;6 0天时TNF -α的活性分别为36 .76U/ml(腹腔)和33.78U/ml(皮内) ,明显高于未免疫组(P <0 .0 1) ;与BCG皮内免疫组比较,30天时无显著性差异(P >0 .0 5 ) ,6 0天时有明显差异(P <0 .0 5 )。结论:H37Ra免疫小鼠后能诱导机体产生TNF -α。
- 陶昆卢贤瑜成海恩
- 关键词：H37RA肿瘤坏死因子Α巨噬细胞
- 浙江大学医学院附属第二医院危急值报告回顾性分析
- 目的:对浙江大学医学院附属第二医院检验科危急值报告的数据进行回顾性分析,为进一步改进和规范危急值报告制度提供依据。方法:从浙医二院信息处理系统中收集2013年6月1号-2014年6月1号的报告的危急值项目,经过统计学分析...
- 成海恩
- 关键词：危急值报告回顾性分析实验室管理
- 文献传递
- 促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1相互作用的筛选和鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白。方法①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO。②pDBLeu-Smac/DIABLO诱饵质粒转化酵母MaV203,Western blot检测融合蛋白在酵母中的正确表达,自激活作用的检测并确定抑制His基础表达的3AT浓度。③对成人肝cDNA文库的筛选。选择能同时激活His、Ura、LacZ3个报告基因的克隆为阳性,利用回转实验和GST-pull down对阳性克隆进行鉴定。结果成功构建pDBLeu-Smac/DIABLO载体,转化酵母细胞MaV203,无细胞毒性,无自激活作用,3AT浓度为25mmol/L。经回转实验和GST-pull down证实了线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1之间具有相互作用。结论Smac/DIABLO可能通过与核受体NR4A1的相互作用来影响核受体NR4A1对细胞生存或者凋亡的调控。
- 张翠莉杨晓明成海恩刘涛王应雄
- 关键词：SMAC/DIABLO酵母双杂交
- 沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：10
- 2007年
- 目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变。结果成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P<0.05)。病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域。结论沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用。
- 成海恩张溢张翠莉潘巍巍石华易发平郭风劲宋方洲
- 关键词：宫颈肿瘤RNA干扰HPV16E6基因
- 表达HPV-16 E6基因siRNA真核载体的构建及体外转染效率鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:采用RNA干扰技术选择性的沉默宫颈癌Ca Ski细胞株中HPV-16 E6基因的表达。为观察HPV-16 E6基因的小干扰片段能否在Ca Ski细胞特异性的抑制E6基因的表达,构建能在哺乳动物细胞中表达E6小干扰RNA的真核表达质粒,并观察其转染效率。方法:根据HPV-16 E6基因序列,设计特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至Ca Ski细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率。结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功的构建二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功的转染到Ca Ski细胞株中,转染效率达到50%以上。结论:siRNA真核表达载体的构建及体外转染的成功为下一步研究奠定了良好的基础。
- 成海恩张溢张翠莉石华潘巍巍易发平马永平宋方洲
- 关键词：HPV16E6基因RNA干扰
- 尿液视黄醛结合蛋白检测肾功能早期损伤的诊断价值
- 目的探讨尿液中视黄醛结合蛋白(RBP)与尿微量白蛋白(MA)、尿IgG、转铁蛋白(TRU)、a1微球蛋白(α1MG)、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)的相关性及其在肾功能早期损伤中的诊断价值。方法检测445例肾功...
- 成海恩金亚平
- 文献传递
- 人白介素24基因诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:研究人白介素24(hIL-24)在体外诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡及其作用机制.方法:①以脂质体包裹重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24转染Ca Ski细胞;②利用RT-PCR技术检测处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平变化;③Western Blot分析处理后Ca Ski细胞中抑癌蛋白P53水平的变化;④流式细胞仪分析处理后的Ca Ski细胞凋亡情况.结果:处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平下降,抑癌蛋白P53水平增加,细胞凋亡率升高.结论:真核表达载体介导的hIL-24基因体外转染宫颈癌Ca Ski细胞后,能抑制Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的表达,使抑癌蛋白P53恢复活性,促使宫颈癌Ca Ski细胞凋亡.
- 石华成海恩张溢郭风劲易发平马永平宋方洲
- 关键词：CAE6基因蛋白质P53细胞凋亡
- 人乳头瘤病毒E6E7基因重组腺病毒的构建及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的:利用AdEasy系统构建人乳头瘤-16(HPV-16)E6E7基因重组腺病毒,并通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.方法:将质粒pET-32a(+)-E6E7扩增、酶切获得E6E7片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-E6E7,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-E6E7,经人胚肾293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-E6E7;用包装后的病毒上清再次感染293细胞,提取细胞中的蛋白,通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd-E6E7;经人胚肾293细胞包装,3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得6.9×1010pfu/L滴度的重组病毒;用该滴度的Ad-E6E7重新感染人胚肾293细胞3d后,提取细胞蛋白,WesternBlot检测,E6E7有明显表达.结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6E7的重组腺病毒AdE6E7.
- 潘巍巍成海恩赖国旗易发平马永平宋方洲
- 关键词：人类乳头状瘤病毒腺病毒科
- 人类XBP1基因5′上游DNA序列的转录激活功能分析(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding proteinⅠ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制。方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-1039~66bp、-859~66bp、-623~66bp、-351~66bp,-227~66bp、-227^-45bp,针对每一种缺失突变体构建相应的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltansferase,CAT)报告基因载体,再分别瞬时转染K562、HepG2、NIH-3T3和L02细胞,应用报告基因CAT瞬时表达系统,检测XBP1每一种缺失突变体在K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞中的活性差异,并进一步确定XBP1基因启动子的具体调节部位。结果成功获得XBP1基因启动子6种缺失突变体的正确克隆和6种相应的报告基因载体p1-XBP1p,p2-XBP1p,p3-XBP1p,p4-XBP1p,p5-XBP1p,p6-XBP1p,每一种报告基因转染K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞系后,p4-XBP1p和p5-XBP1p在K562、HepG2细胞中的转录活性均高于其它报告载体,p5-XBP1p在HepG2细胞中转录活性最高;而6种报告基因载体在NIH-3T3小鼠成纤维细胞中不具有转录活性。结论XBP1基因的转录激活能力在不同细胞中有所差异,其表达活性具有一定的细胞类型特异性,与细胞类型和细胞状态密切相关;XBP1基因启动子的-227~66bp区域是该启动子的核心部位,而且核心启动子区包括ATG翻译起始密码子的下游部位,这一部位是转录活性的重要部位,一旦缺失,XBP1基因启动子会丧失活性。
- 郭风劲成海恩易发平彭惠民宋方洲
- 关键词：启动子转录调控
