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医学分子生物学教学模式转变的实践被引量：16: 2011年; 医学分子生物学是一门新兴的交叉学科,是基础医学与临床医学之间的主要桥梁。通过对教学内容调整、如何融入"以器官系统为中心"的教学模式、开展PBL教学、教学团队建设、以学术交流促进教学改革等几个方面的探讨,促进由"以学科为主"教学模式向"以器官系统为中心"教学模式和PBL教学模式的转变,推动医学分子生物学课程的教学改革。; 易发平卜友泉马永平宋方洲; 关键词：医学分子生物学教学改革教学模式

树突状细胞疫苗与宫颈癌细胞免疫治疗的新进展被引量：2: 2010年; 宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在女性恶性肿瘤中居第2位。树突状细胞(DC)是机体免疫应答的始动者,以DC为基础的抗肿瘤免疫治疗已成为热点。本文就树突状细胞的抗肿瘤机制及其在宫颈癌免疫治疗中的应用作一综述。; 焦庆昉宋方洲易发平; 关键词：树突状细胞疫苗宫颈癌免疫治疗

树突状细胞疫苗的制备及其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞对宫颈癌CaSki细胞的杀伤作用被引量：8: 2011年; 目的:制备树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗并观察其在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。方法:分离培养小鼠未成熟DCs,FCM检测小鼠未成熟DCs表面标志物CD40、CD86、主要组织相容性复合体-Ⅱ(major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ)和CD11c;将已成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16E6E7基因的重组腺病毒pAd-E6E7感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜下观察pAd-E6E7感染的小鼠未成熟DCs绿色荧光蛋白表达,Western印迹法检测E6蛋白的表达;DCs疫苗诱导产生CTLs后与CaSki细胞共培养,CCK8(cell countingkit8)法检测其对CaSki细胞的杀伤效应。结果:成功分离培养了小鼠未成熟DCs,并制备获得了HPV16E6E7特异性DCs疫苗。DCs疫苗诱导产生的CTLs对CaSki细胞具有杀伤作用,pAd-E6E7感染组对CaSki的杀伤效应明显高于CaSki细胞裂解物负载组及未处理DCs组(P<0.05)。结论:以携带HPV16E6E7基因的重组腺病毒感染DCs制备基因修饰的DCs疫苗,具有诱导CTLs体外杀伤子宫颈癌CaSki细胞的作用。; 焦庆昉易发平陈全兰欢艾青符少月俞垚宋方洲; 关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒树突状细胞 CASKI细胞

JNK3重组腺病毒促进表柔比星诱导的人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡被引量：1: 2008年; 目的:构建人JNK3基因重组腺病毒,检测其对人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响;以表柔比星作为凋亡诱导剂,检测其对细胞凋亡的影响。方法:以pDBLeu-JNK3质粒为模板PCR扩增人JNK3基因全长,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-JNK3,线性化后与骨架载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组,在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,经PCR方法鉴定后,用包装后的病毒上清感染人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞,Western印迹方法检测JNK3蛋白的表达;MTT实验检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测表柔比星诱导的细胞凋亡情况。结果:核酸测序和PCR鉴定表明成功构建Ad-JNK3,终点稀释试验测定扩增的腺病毒滴度为6.5×1010pfu/ml;Ad-JNK3在SH-SY5Y细胞中表达JNK3蛋白;MTT检测结果表明Ad-JNK3可抑制SH-SY5Y细胞生长,抑制率为28.08%;流式细胞术结果表明Ad-JNK3可明显促进表柔比星诱导的细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳可观察到DNA梯形条带。结论:重组腺病毒Ad-JNK3能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,促进表柔比星诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,为研究JNK3的作用机制及将其用于人成神经细胞瘤的基因治疗提供了条件。; 韩卿宋方洲易发平卜友泉王治东李长燕杨晓明; 关键词：JNK丝裂原活化蛋白激酶类重组腺病毒表柔比星细胞凋亡

家蚕丝心蛋白H链基因的荧光原位杂交(FISH)被引量：6: 2002年; 蚕丝业在国民经济中占有极为重要的地位.家蚕作为重要的模式生物和生物反应器,历来为人们所关注.有关蚕丝基因的结构、表达调控和分子进化都已有较详细的研究和报道,但关于蚕丝结构基因的分子细胞遗传学基因定位的研究,几乎尚无报道.经用荧光原位杂交技术（fluorescence　in　situ　hybridization,FISH）对家蚕丝心蛋白H链基因（Fib-H）的分子细胞遗传学定位研究结果,初步将家蚕丝心蛋白H链基因定位在了分子细胞遗传学第25连锁群染色体的端部,即25～0.0的位置,从而解决了该基因迄今尚未定位的问题,并证实了丝心蛋白H链基因在染色体位置上为单一座位.; 宋方洲易发平张平波鲁成鲁成伴野丰藤井博伴野丰藤井博; 关键词：家蚕荧光原位杂交基因定位 FISH 分子细胞遗传学染色体

转录因子X-box结合蛋白1相互作用蛋白的筛选和鉴定(英文)被引量：2: 2006年; X-box 结合蛋白 1 是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程. 为进一步研究 XBP1 的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选 XBP1 的结合蛋白. 首先运用 PCR 技术扩增获得 XBP1 的编码序列,克隆至 pGEM-T 载体,经测序鉴定后,亚克隆至诱饵载体 pGBKT7 中,转化酵母 AH109(a type). 免疫印迹检测诱饵质粒 pGBKT7-XBP1 在AH109 酵母中的表达之后,含有诱饵质粒的酵母 AH109 与含有肝细胞 cDNA 文库质粒 pACT2 的酵母 Y187(αtype)配合,配合后的二倍体酵母生长在含有 X-α-gal 的营养缺陷型培养基上 (SD/-Trp-Leu-His-Ade) 进行选择和筛选,经测序和序列比对确定阳性克隆的开放读码框 ORF,得到 7 种不同的蛋白质. 为了进一步验证这些筛选蛋白质与 XBP1 的相互作用,克隆其中一种蛋白质 MT1E,并运用 GST pulldown 和免疫共沉淀技术成功检测了 MT1E 和 XBP1 的相互作用(体外 / 体内),结果提示,MT1E 可能是 XBP1 的一个新的调节蛋白. 通过酵母双杂交技术筛选得到的 7 种蛋白质分别与肝细胞基础代谢、蛋白质的合成与运输、细胞的增殖与凋亡密切相关. 上述结果有助于揭示 XBP1 的生物学功能,为进一步探讨 XBP1 的表达和调控机制提供新线索.; 郭风劲宋方洲易发平成海恩; 关键词：酵母双杂交转录因子诱饵

MKRN1基因siRNA重组腺病毒载体构建及功能鉴定: 2009年; 目的构建MKRN1的siRNA重组腺病毒载体，并在表达MKRN1的HeLa细胞中鉴定其干扰作用和对端粒酶活性的影响，为探讨MKRN1功能及其与肿瘤关系提供有效工具。方法人工合成靶向MKRN1的siRNA干扰序列，用分子克隆的方法克隆到穿梭载体pSES-HUS上得到pSES-HUS-MKRN1 siRNA，并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组得到pAdeasy-SES-HUS-MKRN1 siRNA；在HEK293细胞中包装成重组腺病毒，感染表达MKRN1的HeLa细胞株，用RT-PCR法及Western印迹技术检测腺病毒对细胞MKRN1表达的影响，用PCR-TRAP法检测细胞中端粒酶活性的变化。结果成功构建了MKRN1的siR-NA重组腺病毒载体；MKRN1的siRNA重组腺病毒能显著抑制HeLa细胞中MKRN1的表达，并显著上调细胞中端粒酶的活性。结论构建的Adeasy-MKRN1 siRNA腺病毒能有效地抑制HeLa细胞中MKRN1的表达并上调细胞端粒酶活性，从而为进一步研究MKRN1的功能及其与肿瘤的关系提供了有效的新工具。; 石艳艳刘涛张琴袁成福卜友泉易发平刘革力宋方洲; 关键词：腺病毒载体 RNA干扰端粒酶 HELA细胞

siRNA介导的Plk1表达沉默对食管癌细胞生长的影响被引量：2: 2009年; 在包括食管癌在内的多种肿瘤中,Plk1呈现过表达且具重要预后价值,表明该分子是一个潜在的肿瘤治疗靶点.为了探讨Plk1作为分子靶点用于食管癌治疗的潜在价值,采用siRNA技术抑制Plk1的表达,并观察了其对3株代表性食管癌细胞生长的影响.结果表明:合成的特异性短链Plk1 siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制3株代表性食管癌细胞系中Plk1的表达.同时,siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制了食管癌细胞的生长,细胞活力同时显著下降.另外,Plk1表达被抑制后,大量细胞有丝分裂受到阻滞,并进而发生大规模细胞死亡.这些结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默能显著抑制食管癌细胞的生长,Plk1是一个潜在的用于食管癌治疗的新靶点.; 杨正梅卜友泉刘革力易发平宋方洲; 关键词：PLK1 SIRNA 食管癌细胞生长

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立被引量：8: 2006年; 目的:建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术。方法:对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化。结果:建立了稳定的2-DE技术。结论:已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。; 母昭德彭咏波易发平邱宗荫; 关键词：血清蛋白质组学蛋白质组双向凝胶电泳

家蚕丝胶基因1(Ser-1)和胰凝乳蛋白酶抑制因子13基因(CI-13)的FISH定位被引量：3: 2008年; 应用荧光原位杂交技术对家蚕单拷贝的丝胶基因1(Ser-1)及胰凝乳蛋白酶抑制因子13基因(CI-13)进行了分子细胞遗传学的染色体定位.结果表明:Ser-1位于第11连锁群染色体的近端部位置,在粗线期染色体上的相对位置为12.5±1.4;CI-13位于第2连锁群染色体的近端部,在粗线期染色体上的相对位置为8.2±1.2,进而绘制了上述基因在家蚕染色体上的位置模式图—FISH图,并对家蚕染色体的荧光原位技术及其应用进行了探讨.; 宋方洲常平安张平波易发平鲁成马永平Banno YutakaFujii Hiroshi; 关键词：荧光原位杂交染色体定位

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易发平

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