曾少灵
- 作品数：99 被引量：307H指数：9
- 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家质检总局科技计划项目深圳出入境检验检疫局科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生哲学宗教更多>>
- 4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：5
- 2010年
- 分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。
- 阮周曦花群义杨俊兴曾少灵曹琛福秦智锋吕建强林庆燕周晓黎
- 关键词：蓝舌病病毒水疱性口炎病毒赤羽病病毒多重RT-PCR
- 多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分被引量：45
- 2009年
- 根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T20190-2006方法分别对17种不同源性动物DNA和200份不同来源样品DNA进行牛羊源性成分检测,数据显示两者检测结果符合率达100%,特异性相当。与国标方法相比,本试验方法不需电泳、酶切和测序,即可在一个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊3种源性成分,检测效率提高近3倍;灵敏度更高,比国标方法灵敏10倍;适用性更广,除了饲料,还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。
- 曾少灵秦智锋阮周曦花群义卢体康吕建强陈书琨曹琛福张彩虹孙洁陈兵吴绍精
- 关键词：细胞色素B基因
- 禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐,耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷,为了提高检测效率和通关速度,借助胶体金半定量检测技术,以禽流感HI抗体滴度24为临界值,研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A/Chicken/Hongkong/SZ-HI/1997(H5N1)病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌,IPTG诱导表达4h后,SDS-PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料,采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡,确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强,与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致,检测HI抗体滴度为24鸡血清时结果符合率达94%。
- 陶虹秦智锋卢体康储成群曾少灵林庆燕花群义吕建强詹爱军陈书琨孙洁曹琛福阮周曦陈兵毕英佐
- 关键词：禽流感抗体检测
- 苏云金芽孢杆菌分子伴侣串联基因p19-p29的克隆和表达载体的构建被引量：6
- 2002年
- 根据已知序列设计一对PCR引物 (ORF 5S ,ORF 3N) ,可从cry2Aa或cry2Ac操纵子中扩增出包含串联分子伴侣基因p1 9 p2 9的DNA片段 ,预期大小分别为 1 6kb和 2 0kb。对 1 5 0株苏云金芽孢杆菌菌株进行PCR检测 ,从 2 6株中获得了大小为 1 6kb的扩增片段 ,但未获得2 0kb的片段。这表明cry2Aa型操纵子p1 9 p2 9基因存在较广泛 ,而cry2Ac型较罕见。将来自Y2 菌株的 1 6kb片段回收 ,通过一系列亚克隆 ,最终构建成一个含有p1 9 p2 9串联基因的Bt表达载体 ,为进一步研究p1 9 p2
- 余健秀曾少灵谢瑞瑜蒙国基庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌分子伴侣串联基因克隆
- 非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立被引量：20
- 2009年
- 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。
- 曾少灵花群义张彩虹曹琛福秦智锋阮周曦杨俊兴卢体康吕建强孙洁陈兵林庆燕杨云庆
- 关键词：非洲猪瘟病毒聚合酶链反应
- 小反刍兽疫疫苗株病毒荧光RT-PCR检测用引物和探针
- 本发明提供了一种小反刍兽疫疫苗株病毒实时荧光RT-PCR检测的引物和探针序列，所述引物序列包括由上游引物PPrV-YM1和下游引物PPrV-YM2组成的引物对，其序列分别为AGGCAGCAAGCCGCAGA和TCCGGT...
- 吕建强张彩虹杨俊兴花群义曹琛福阮周曦孙洁陶虹曾少灵廖立珊
- 文献传递
- 饲料中马、驴源性成分的分子生物学检测技术
- 本研究根据马、驴线粒体DNA中的保守区段设计了一对引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)采取马、驴、牛、羊、猪、鸡、兔、鹿、火鸡等实验材料进行扩增,可以专一地扩增出马、驴源...
- 宗卉曾少灵林庆燕温艳辉
- 关键词：线粒体DNA聚合酶链式反应饲料成分
- 文献传递
- 苏云金杆菌辅助蛋白P19对杀虫晶体蛋白Cry11Aa表达的影响被引量：2
- 2006年
- 苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因。将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异。该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平。
- 师永霞曾少灵袁美妗孙钒庞义
- 关键词：苏云金杆菌生物测定
- 非洲猪瘟预警系统与快速检测技术
- 花群义徐自忠周晓黎秦智锋吕建强董俊杨建明杨云庆詹爱军林庆燕曾少灵阮周曦陈兵陶虹
- 该课题研究已按照合同规定的研究内容和考核指标，完成了项目的主要研究任务，达到了预期目标：1、根据Genebank中非洲猪瘟VP73基因序列，人工合成的VP73全基因克隆至pMD 18-T克隆载体质粒中，再进行亚克隆插入p...
- 关键词：
- 关键词：非洲猪瘟预警系统
- 近年深圳口岸进境饲料检测情况及安全性浅析
- 2011年
- 本文收集了近几年经深圳口岸进境的饲料在牛羊源性成分和沙门氏菌方面的检测情况,分析不同来源和种类饲料的质量安全情况,归纳引起有关进境饲料潜在风险的主要因素,对进境饲料进行安全性浅析。根据分析结果,结合深圳局进境饲料的实际情况,对进境饲料的检测提出建设性意见,为进一步提高问题饲料的检出率,杜绝劣质和危险饲料经深圳局口岸进境提供技术支持。
- 曾少灵秦智锋阮周曦孙洁廖立珊吕建强林庆燕陈泽华
- 关键词：牛羊源性成分沙门氏菌
