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慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染标记兔骨髓间充质干细胞的研究被引量：2: 2011年; 目的建立一种有效的标记兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）的方法。方法2周龄新西兰大耳白兔，白胫骨取骨髓，采用直接贴壁培养法进行体外培养；倒置显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞表面抗原CIM4和CIM5的表达；以慢病毒为载体将外源基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）导入BMSCs内，观察其在细胞内持续表达的时间。结果分离培养的细胞在第5天可以观察到贴壁生长；培养10d融合可达80％，第1～5代细胞传代后增殖速度较快，平均倍增时间为48h，5代后细胞增殖速度明显减慢。流式细胞术鉴定发现BMSCs表面标志物为CD44（＋）和CIM5（-），慢病毒介导的EGFP基因转染的BMSCs2周后仍可产生绿色荧光。结论采用直接贴壁培养法进行体外培养可获得生长稳定、增殖能力强的BMSCs；慢病毒载体介导的EGFP基因转染的方法可将目的基因稳定地整合到细胞DNA中，并可在体外进行自我复制，转染成功后的BMSCs可在体外较长时间产生荧光，是一种可靠的标记方法。; 朱中飞袁玉峰覃海泉乔木曾诚孙江阳张中林何跃明刘志苏; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养增强型绿色荧光蛋白

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曾诚