李玲玲
- 作品数：14 被引量：6H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 中国仓鼠卵巢细胞和人胚肾T细胞骨架及其迁移特性的比较
- 2014年
- 【目的】比较中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾T(HEK293T)细胞的迁移能力,筛选适用于细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响研究的细胞系。【方法】通过免疫荧光组织化学比较CHO和HEK293T细胞骨架的形态差异,通过延时成像和划痕试验比较细胞迁移能力,通过免疫印迹比较2株细胞系细胞骨架基因的相对表达,并从细胞骨架差异和结构基因的选择性表达方面解释细胞迁移能力的差异。【结果】CHO和HEK293T细胞系的细胞骨架在形态上存在较大差异,HEK293T细胞系的核质比是CHO细胞的2.25倍;CHO细胞比HEK293T细胞的迁移能力强,是HEK293T细胞的2.9倍;2种细胞内α-Tubulin/β-Actin的比率存在较大差异,CHO是HEK293T的1.2倍。【结论】细胞中微管微丝的差异性分布及结构基因Tubulin和Actin的选择性表达是细胞迁移特性不同的关键因素。CHO细胞适用于涉及细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响的研究,HEK293T细胞不适用于此类研究。
- 张伟胡新德王久涛宋玲珍李玲玲陈树林赵善廷
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞细胞骨架迁移
- Cofilin及其磷酸化对鸡胚脊髓细胞迁移以及神经元轴突投射的影响研究
- ：作为中枢神经系统的重要组成部分,脊髓在发育过程中伴随着细胞的增殖、迁移、定位和分化等一系列复杂的过程,在这些复杂的细胞活动中,肌动蛋白的聚合与解聚至关重要.丝切蛋白(Cofilin)作为一种主要的肌动蛋白结合蛋白,通过...
- 李玲玲赵善廷
- 关键词：细胞迁移丝切蛋白磷酸化
- miRNA-34c实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 为建立稳定有效检测miR-34c的实时荧光定量技术体系,采用茎环结构法设计了反转录引物,并通过梯度浓度及梯度温度PCR法对miR-34c的最佳退火延伸温度和模板浓度进行了确定,最后通过实时荧光定量PCR对miR-34c进行检测。试验成功建立了精确检测miR-34c的实时荧光定量技术体系,其中miR-34c最佳退火延伸温度为62.4℃及每个实时定量反应体系中cDNA对应的RNA量最适浓度为50ng/μL,并得到重复性高、特异性强的检测结果。该技术体系的建立不仅为检测miR-34c提供了精准便捷的方法,而且可为设计检测其他miRNA提供技术支持。
- 刘笙腩颜润川李玲玲张雅妹陈树林赵善廷
- 关键词：实时荧光定量PCR退火温度
- 小鼠cofilin-1基因及其真核表达载体的构建与体内外表达
- 2014年
- 【目的】构建能够在神经系统中高效表达的小鼠cofilin-1野生型(Cfl1-wt)、活化型(Cfl1-S3A)、失活型(Cfl1-S3D)3种真核表达载体,并研究其在鸡胚脊髓神经元中的表达情况,为进一步探讨cofilin-1在大脑发育过程中对神经元迁移的影响奠定基础。【方法】从成年小鼠大脑组织中提取RNA,经反转录获得cDNA样本,RT-PCR扩增小鼠cofilin-1基因的CDS区,经引物设计引入点突变,扩增了野生型、活化型及失活型的cofilin-1基因片段,克隆入pCAG-MCS-myc真核表达载体中。经双酶切和测序鉴定后,转染CHO细胞,通过半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测其在细胞中的表达情况。利用鸡胚活体原位电转的方法,将重组质粒转染胚胎发育第3天(E3)的鸡胚脊髓,在胚胎发育第6天(E6)取材,切片后经免疫荧光染色观察并统计分析重组质粒在脊髓中的表达情况。【结果】克隆并模拟了小鼠cofilin-1野生型、活化型和失活型的cDNA片段,成功构建了pCAG-cfl1-wt、pCAG-cfl1-S3A和pCAGcfl1-S3D3种真核表达载体。体外转染CHO细胞,半定量RT-PCR检测及统计学分析表明,转染重组质粒的CHO细胞中,Cofilin-1mRNA相对表达量与对照组(未转染质粒的正常CHO细胞)存在显著性差异;免疫荧光染色后观察到了Cofilin-1融合蛋白的表达。对经活体原位电转转染重组质粒的鸡胚脊髓切片进行免疫荧光染色,检测到Cofilin-1融合蛋白的表达,且重组质粒转染效果与pCAG-EGFP转染效果无明显差异。【结论】pCAG-cfl1-wt、pCAGcfl1-S3A和pCAG-cfl1-S3D3种真核表达载体的成功构建及其在体内外的高效表达,为进一步研究cofilin-1及其Ser3位点的磷酸化在神经元迁移中的作用机制奠定了基础。
- 李玲玲张伟杜蕊宋玲珍柴学军胡新德陈树林赵善廷
- 关键词：SER磷酸化去磷酸化质粒构建
- 鸡胚发育过程四种放射状胶质细胞标记物的对比分析
- 2013年
- 目的:比较脑脂结合蛋白(Brain lipid binding protein,BLBP)、放射状胶质细胞标记物2(Radial glial cell marker-2,RC2)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)在鸡胚不同发育时期视顶盖胶质细胞(Glial cell,GC)中表达的差异。方法:从鸡胚发育的第8天(E8)开始到E18,分别进行取材、固定、包埋,振荡切片,采用免疫荧光技术对不同发育时期的鸡胚视顶盖的胶质细胞进行标记,同时采用活体原位电转的方法对E8、E10和E12的放射状胶质细胞(Radial glial cells,RGCs)进行标记。结果:从E8开始,BLBP、RC2、Nestin和GFAP均开始表达。BLBP和GFAP抗体标记GC从E8到E18均可表达,BLBP标记的细胞从E14开始出现变化,呈现迁移中神经元的特点,GFAP标记的细胞在E18开始出现变化,呈现星形胶质细胞形态。自E8-E16,RC2和Nestin标记RGCs,但E18时标记RGCs已不明显。结论:4种抗体均可标记E8-E18的GC,在E12之前4种抗体标记RGCs效果相似,而在E12后RC2,Nestin与BLBP标记RGCs开始出现差异,从E18开始GFAP开始标记星形胶质细胞(Astrocyte)。
- 杜蕊杨慈清李玲玲段明慧卢习陈树林赵善廷
- 关键词：鸡胚胎视顶盖星形胶质细胞免疫荧光技术
- 摇晃蛋白(Reelin)的剪切蛋白预测
- 2014年
- 【目的】探索生物信息学方法在Reelin剪切蛋白查找中的应用,并筛选大脑皮质中可能对Reelin有剪切作用的蛋白。【方法】以ADAMTS-4蛋白为基准,利用生物信息学方法,以功能域查找相似功能蛋白,并结合同源性比对方法从中筛选出剪切Reelin的候选蛋白,并对候选蛋白的理化性质、亚细胞定位、功能域、二级结构和组织定位进行分析。【结果】ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16与ADAMTS-4有相似的理化性质,且均属于分泌蛋白,在大脑皮质中可能有分布。ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16包含ADAMTS-4的功能域,且功能域内的二级结构相似。【结论】筛选到了可能对Reelin有剪切作用的蛋白ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10和ADAMTS-16。
- 张伟李玲玲宋玲珍胡新德张亚妹段明慧颜润川陈树林赵善廷
- 关键词：生物信息学
- 丙烯酰胺对小鼠成体神经发生及增殖相关基因的影响
- 2016年
- 【目的】探讨丙烯酰胺对成年小鼠海马成体神经发生及增殖相关基因的影响,为了解丙烯酰胺的毒性机理提供参考。【方法】将20只10周龄雄性成年昆白小鼠(体质量(30±2)g/只),随机均分为丙烯酰胺染毒组和生理盐水对照组,丙烯酰胺染毒组通过腹腔注射丙烯酰胺进行染毒,注射剂量为50mg/kg,连续注射14d,第15天注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50mg/kg,2次/d,共3d),观察2组小鼠体质量及行为活动的变化。用BrdU标记和免疫组织化学染色方法分析丙烯酰胺染毒对小鼠齿状回神经干细胞数量的影响,用RT-PCR法研究丙烯酰胺对小鼠海马增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、RhoA和Rac1mRNA表达的影响。【结果】丙烯酰胺染毒组小鼠体质量极显著低于对照组,精神萎靡、后肢无力,走路时后肢偶成劈叉姿势;与对照组相比,丙烯酰胺染毒组小鼠齿状回亚颗粒细胞层中的BrdU阳性细胞数量极显著降低(P<0.01),海马组织中JNK3和Rac1的mRNA表达量显著升高(P<0.05),Akt1、Gsk-3β和RhoA的mRNA表达量极显著升高(P<0.01)。【结论】丙烯酰胺中毒能显著抑制小鼠齿状回中成体神经干细胞增殖,可使海马组织中增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、Rac1和RhoA的表达量发生明显变化。
- 张亚妹王久涛宋玲珍张伟李玲玲颜润川胡新德赵善廷
- 关键词：丙烯酰胺中毒免疫组织化学
- 鸡胚视顶盖早期产生的神经元迁移规律和层定位研究
- 2013年
- 目的:阐明鸡胚胎发育过程中视顶盖层的形成以及神经元的迁移模式。方法:新鲜种蛋正常发育到第4.5天～第5天(E4.5-E5),将质粒pCAG-GFP通过活体原位电转技术转入视顶盖,继续培养到E8、E10和E12,取材、固定、包埋、切片后用PI复染核。结果:到E12鸡胚胎视顶盖从内向外最终形成6层结构,大部分神经元进行放射状迁移,部分神经元进行切向迁移,不同层的神经元有各自的形态特点。结论:鸡胚胎发育过程中不但存在由内向外的放射状迁移,还存在切向迁移模式。
- 杜蕊杨慈清李玲玲黄映雪张伟陈树林赵善廷
- 关键词：胚胎发育视顶盖神经元迁移
- 子宫内电击转染技术在神经元树突棘发育及神经纤维归巢研究中的应用
- 2014年
- 目的:建立鼠胚子宫内电击转染技术体系(In utero electroporation,IUE),探究该技术在研究神经元发育包括树突棘形成及神经纤维归巢(轴突投射)中应用的可行性。方法:构建带pCAG启动子表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的质粒,并将该质粒利用子宫内电击转染技术转染到孕期15.5 d(E15.5)鼠胚大脑皮质的新生神经元中。待小鼠出生后(P0)及第28 d(P28)用4%多聚甲醛活体灌注固定,振荡切片机切片,免疫荧光组织化学染色,激光共聚焦显微镜观察拍照。结果:在出生后P28小鼠被转染一侧的大脑皮质内有大量被GFP标记的细胞,呈现典型的神经元形态特征,从胞体发出大量树突,树突表面有大量大小不等、形态不一的小棘,被标记神经元的轴突通过胼胝体投射到对侧海马和大脑皮质。结论:子宫内电击转染技术能成功转染大脑皮质神经元,由CAG启动的GFP表达载体能够在被转染的神经元中长时程高效表达GFP,并标记被转染神经元的所有细胞结构包括树突、轴突及树突棘,该技术可用于研究各种不同基因在小棘发育及神经纤维归巢中的作用。
- 段明慧卢习张伟李玲玲陈树林赵善廷
- 关键词：树突棘绿色荧光蛋白
- 丙烯酰胺对小鼠成体神经发生及GSK3β表达的影响
- 和研究丙烯酰胺对成年小鼠海马成体神经发生及GSK3β表达的影响;雄性成年昆明小鼠分为丙烯酰胺处理组和生理盐水对照组,通过腹腔注射(i.p.)进行丙烯酰胺染毒,步态评估方法检测小鼠行为学变化,BrdU标记和免疫组织化学方法...
- 宋玲珍王久涛张伟李玲玲颜润川张琪陈树林赵善延
- 关键词：丙烯酰胺毒性作用
