胡新德
- 作品数：19 被引量：9H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Fyn在神经元迁移中的作用
- (目的)本研究旨在探讨Fyn在大脑发育过程神经迁移中的作用.(方法)通过克隆小鼠Fyn基因,构建Fyn真核表达载体和干扰载体,首先在细胞水平进行载体验证,观察细胞形态变化并筛选有效的干扰片段,再利用子宫内胚胎电击转染技术...
- 黄映雪安磊胡新德张伟张琪陈树林赵善廷
- 关键词：FYM神经元迁移细胞骨架
- 摇晃蛋白(Reelin)的剪切蛋白预测
- 2014年
- 【目的】探索生物信息学方法在Reelin剪切蛋白查找中的应用,并筛选大脑皮质中可能对Reelin有剪切作用的蛋白。【方法】以ADAMTS-4蛋白为基准,利用生物信息学方法,以功能域查找相似功能蛋白,并结合同源性比对方法从中筛选出剪切Reelin的候选蛋白,并对候选蛋白的理化性质、亚细胞定位、功能域、二级结构和组织定位进行分析。【结果】ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16与ADAMTS-4有相似的理化性质,且均属于分泌蛋白,在大脑皮质中可能有分布。ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16包含ADAMTS-4的功能域,且功能域内的二级结构相似。【结论】筛选到了可能对Reelin有剪切作用的蛋白ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10和ADAMTS-16。
- 张伟李玲玲宋玲珍胡新德张亚妹段明慧颜润川陈树林赵善廷
- 关键词：生物信息学
- 中国仓鼠卵巢细胞和人胚肾T细胞骨架及其迁移特性的比较
- 2014年
- 【目的】比较中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾T(HEK293T)细胞的迁移能力,筛选适用于细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响研究的细胞系。【方法】通过免疫荧光组织化学比较CHO和HEK293T细胞骨架的形态差异,通过延时成像和划痕试验比较细胞迁移能力,通过免疫印迹比较2株细胞系细胞骨架基因的相对表达,并从细胞骨架差异和结构基因的选择性表达方面解释细胞迁移能力的差异。【结果】CHO和HEK293T细胞系的细胞骨架在形态上存在较大差异,HEK293T细胞系的核质比是CHO细胞的2.25倍;CHO细胞比HEK293T细胞的迁移能力强,是HEK293T细胞的2.9倍;2种细胞内α-Tubulin/β-Actin的比率存在较大差异,CHO是HEK293T的1.2倍。【结论】细胞中微管微丝的差异性分布及结构基因Tubulin和Actin的选择性表达是细胞迁移特性不同的关键因素。CHO细胞适用于涉及细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响的研究,HEK293T细胞不适用于此类研究。
- 张伟胡新德王久涛宋玲珍李玲玲陈树林赵善廷
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞细胞骨架迁移
- microRNA-34c在不同发育时期雄性小鼠脑组织中的表达分析
- 2014年
- 【目的】研究microRNA-34c(简称miR-34c)在出生后不同发育时期小鼠嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的表达情况,并分析其与小鼠行为活动之间的相关性。【方法】以出生后0,3,7,14,21,28,60和90d的雄性昆明小白鼠为试验动物,以5SrRNA为内参基因,运用荧光实时定量PCR技术,检测miR-34c在小鼠出生后8个不同发育时期嗅球、大脑皮质、小脑皮质和海马中的相对表达量以及在成年鼠脑组织中4个不同部位的相对表达量。【结果】随着小鼠的发育,miR-34c在嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的相对表达量均呈现不同程度的递增趋势。在成年鼠中,miR-34c在嗅球、大脑皮质、小脑皮质、海马中的相对表达量差异显著,其中海马中最高,小脑皮质次之,嗅球最低。【结论】miR-34c在出生后不同发育时期小鼠嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的表达趋势,与小鼠各种行为活动的出现具有一定的相关性。
- 刘笙腩于萌颜润川张伟段明慧胡新德华进联陈树林赵善廷
- 关键词：小鼠脑组织实时定量PCR
- 小鼠cofilin-1基因及其真核表达载体的构建与体内外表达
- 2014年
- 【目的】构建能够在神经系统中高效表达的小鼠cofilin-1野生型(Cfl1-wt)、活化型(Cfl1-S3A)、失活型(Cfl1-S3D)3种真核表达载体,并研究其在鸡胚脊髓神经元中的表达情况,为进一步探讨cofilin-1在大脑发育过程中对神经元迁移的影响奠定基础。【方法】从成年小鼠大脑组织中提取RNA,经反转录获得cDNA样本,RT-PCR扩增小鼠cofilin-1基因的CDS区,经引物设计引入点突变,扩增了野生型、活化型及失活型的cofilin-1基因片段,克隆入pCAG-MCS-myc真核表达载体中。经双酶切和测序鉴定后,转染CHO细胞,通过半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测其在细胞中的表达情况。利用鸡胚活体原位电转的方法,将重组质粒转染胚胎发育第3天(E3)的鸡胚脊髓,在胚胎发育第6天(E6)取材,切片后经免疫荧光染色观察并统计分析重组质粒在脊髓中的表达情况。【结果】克隆并模拟了小鼠cofilin-1野生型、活化型和失活型的cDNA片段,成功构建了pCAG-cfl1-wt、pCAG-cfl1-S3A和pCAGcfl1-S3D3种真核表达载体。体外转染CHO细胞,半定量RT-PCR检测及统计学分析表明,转染重组质粒的CHO细胞中,Cofilin-1mRNA相对表达量与对照组(未转染质粒的正常CHO细胞)存在显著性差异;免疫荧光染色后观察到了Cofilin-1融合蛋白的表达。对经活体原位电转转染重组质粒的鸡胚脊髓切片进行免疫荧光染色,检测到Cofilin-1融合蛋白的表达,且重组质粒转染效果与pCAG-EGFP转染效果无明显差异。【结论】pCAG-cfl1-wt、pCAGcfl1-S3A和pCAG-cfl1-S3D3种真核表达载体的成功构建及其在体内外的高效表达,为进一步研究cofilin-1及其Ser3位点的磷酸化在神经元迁移中的作用机制奠定了基础。
- 李玲玲张伟杜蕊宋玲珍柴学军胡新德陈树林赵善廷
- 关键词：SER磷酸化去磷酸化质粒构建
- RSP3亚细胞定位及其在大脑皮层发育中的功能研究
- (目的)衣藻RSP3(radial spoke protein 3)是一个鞭毛结构蛋白,目前有关RSP3相关研究主要集中在衣藻上,而对其在哺乳动物中的同源基因研究甚少。衣藻RSP3在哺乳动物中的同源基因主要表达于中枢神经...
- 颜润川胡新德宋玲珍张伟王久涛张琪陈树林赵善廷
- 关键词：亚细胞定位纤毛
- 小鼠海马发育过程中Cofilin及其磷酸化状态调节基因表达差异分析
- Cofilin是一种肌动蛋白结合分子,通过调节肌动蛋白的聚合与解聚,而影响细胞骨架的稳定性。丝切蛋白的活性受其第三位氨基酸磷酸化状态的调节,非磷酸化状态的Cofilin具有切割肌动蛋白的功能,而磷酸化的Cofilin则失...
- 胡新德张伟刘笙腩李玲玲宋玲珍柴学军陈树林赵善廷
- 关键词：海马发育COFILIN磷酸化
- 文献传递
- Fyn在神经元迁移中的作用
- (目的)本研究旨在探讨Fyn在大脑发育过程神经迁移中的作用。(方法)通过克隆小鼠Fyn基因,构建Fyn真核表达载体和干扰载体,首先在细胞水平进行载体验证,观察细胞形态变化并筛选有效的干扰片段,再利用子宫内胚胎电击转染技术...
- 黄映雪安磊胡新德张伟张琪陈树林赵善廷
- 关键词：FYN神经元迁移细胞骨架
- 丙烯酰胺对小鼠成体神经发生及增殖相关基因的影响
- 2016年
- 【目的】探讨丙烯酰胺对成年小鼠海马成体神经发生及增殖相关基因的影响,为了解丙烯酰胺的毒性机理提供参考。【方法】将20只10周龄雄性成年昆白小鼠(体质量(30±2)g/只),随机均分为丙烯酰胺染毒组和生理盐水对照组,丙烯酰胺染毒组通过腹腔注射丙烯酰胺进行染毒,注射剂量为50mg/kg,连续注射14d,第15天注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50mg/kg,2次/d,共3d),观察2组小鼠体质量及行为活动的变化。用BrdU标记和免疫组织化学染色方法分析丙烯酰胺染毒对小鼠齿状回神经干细胞数量的影响,用RT-PCR法研究丙烯酰胺对小鼠海马增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、RhoA和Rac1mRNA表达的影响。【结果】丙烯酰胺染毒组小鼠体质量极显著低于对照组,精神萎靡、后肢无力,走路时后肢偶成劈叉姿势;与对照组相比,丙烯酰胺染毒组小鼠齿状回亚颗粒细胞层中的BrdU阳性细胞数量极显著降低(P<0.01),海马组织中JNK3和Rac1的mRNA表达量显著升高(P<0.05),Akt1、Gsk-3β和RhoA的mRNA表达量极显著升高(P<0.01)。【结论】丙烯酰胺中毒能显著抑制小鼠齿状回中成体神经干细胞增殖,可使海马组织中增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、Rac1和RhoA的表达量发生明显变化。
- 张亚妹王久涛宋玲珍张伟李玲玲颜润川胡新德赵善廷
- 关键词：丙烯酰胺中毒免疫组织化学
- 小鼠RSP3基因序列分析及其亚细胞定位
- 2015年
- 衣藻RSP3是一个鞭毛结构蛋白,目前有关RSP3相关研究主要集中在衣藻上,而对其在哺乳动物中的同源基因的蛋白定位及功能研究甚少。本研究对各个物种的RSP3氨基酸序列进行比对分析,在用SMART软件预测小鼠RSP3结构域的基础上构建了小鼠RSP3真核表达载体,并在CHO细胞中成功表达,应用荧光共定位技术研究小鼠RSP3与微管、内质网及高尔基体的关系。结果表明,小鼠RSP3比衣藻RSP3在N端多出127个氨基酸,两者都含有一个RSP3结构域,RSP3结构域是一个微管结合结构域,而且在进化中高度保守。在CHO细胞中表达的小鼠RSP3并不直接与微管结合,也不定位在内质网或高尔基体,进一步研究发现其聚集分布于细胞质基质中,而且主要分布在细胞核的周围。说明RSP3在进化中较为保守,但在哺乳动物中的分布和功能可能与在衣藻中有所不同。
- 成欣然颜润川胡新德宋玲珍张伟张亚妹陈树林赵善廷
- 关键词：亚细胞定位内质网高尔基体
