杨瑞仪
- 作品数：40 被引量：135H指数：7
- 供职机构：广州中医药大学热带医学研究所中药新药发现实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家中医药管理局基金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组人细胞因子基因在转基因中药细胞中的瞬时表达被引量：9
- 2003年
- 目的 利用转基因中药表达人细胞因子基因 ,探讨培育基因修饰 (GM)中药的可行性。方法 将体外扩增分别获得的人 α-干扰素基因与 RANTES基因酶切回收后插入中间载体 ,用 Eco R 和 H ind 双酶切鉴定重组子。由大肠杆菌分离重组质粒并导入根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens,通过加入卡那霉素 (Km)和利福平(Rif)筛选含重组双元载体的转化子 ,用叶盘共培养法转化苦瓜和夏枯草外植体。结果 经 RT- PCR检测到人 α-干扰素基因与 RANTES基因在中药转化愈伤组织中的瞬时表达。结论 首次报道了重组人 α-干扰素基因与RANTES基因在转基因苦瓜和夏枯草细胞中的表达 ,为探讨利用转基因中药抗病毒尤其是抗艾滋病开创了新途径。
- 曾庆平冯丽玲杨瑞仪符林春郭兴伯
- 关键词：RANTES基因
- 黄花蒿Dbr2基因的分离与诱导表达特性分析
- 2011年
- 目的：从黄花蒿中分离鉴定青蒿素生物合成途径关键酶——青蒿醛双键还原编码基因（Dbr2）并研究其表达特性，藉此探索提高该基因表达量并进一步促进青蒿素合成的途径。方法：采用PCR法从黄花蒿总RNA中分离Dbr2基因编码序列，并采用实时荧光定量PCR法定量检测Dbr2基因在多种人工模拟环境中的转录表达模式。结果：从黄花蒿中分离出1179bp的Dbr2基因编码序列。经过低温、紫外辐射、淹水、脱水、复水、真菌诱激子、葡萄糖、水杨酸处理，Dbr2 mRNA水平分别提高2.5、3.7、10.8、6.0、34.5、28.7、6.3和8.5倍。结论：黄花蒿Dbr2基因可能具有环境诱导表达特性。
- 杨瑞仪杨雪芹冯丽玲曾庆平
- 关键词：黄花蒿青蒿素
- 抑癌基因nm23-H1真核基因工程及其抑癌作用的研究
- 杨瑞仪
- 关键词：抗氧化
- 黄花蒿ADS启动子的分离及表达特性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:从黄花蒿中分离鉴定青蒿素生物合成途径关键酶——紫穗槐二烯合酶编码基因(ADS)的启动子序列并研究其表达特性,藉此探索提高该基因表达量并进一步促进青蒿素合成的途径。方法:采用PCR法从黄花蒿DNA中分离ADS 5'端非翻译区(5'UTR)序列,构建与GUS报告基因融合的植物表达载体,通过农杆菌介导转化烟草。GUS组织化学染色法和分光光度法分别定性和定量检测ADS 5'UTR序列调控GUS基因在正常条件和胁迫条件下的表达。结果:从黄花蒿中分离出2 448 bp的ADS 5'UTR序列,获得与GUS基因融合表达的转基因烟草并检测到GUS活性。GUS活性定量检测结果显示,在4℃和紫外辐射条件下,转化烟草GUS活性分别提高1.6,2.2倍。结论:从黄花蒿分离出的ADS 5'UTR序列具有启动子功能并且可能具有环境诱导表达特性。
- 杨瑞仪杨雪芹冯丽玲曾庆平
- 关键词：黄花蒿ADS启动子青蒿素
- 马兜铃酪氨酸脱羧酶基因克隆、测序及同源性分析被引量：8
- 2005年
- [目的]从中草药马兜铃中获得酪氨酸脱羧酶基因(tyrDC)互补DNA(cDNA)序列并进行同源性分析,以进一步达 到敲除tyrDC,减轻该药肾毒性的目的。[方法]参照已知的植物酪氨酸脱羧酶的保守性氨基酸序列设计简并引物,并通过 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)从马兜铃中扩增出cDNA片段。将扩增的cDNA序列克隆并测序,用以设计特异引物,并 通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)从马兜铃中扩增出全长tyrDC cDNA。[结果]该克隆的 tyrDC cDNA的总长度为1 678 bp,包括一个编码516个氨基酸的1 551bp开读框(ORF)和一段127 bp的下游非翻译区 (3'UTR)。序列比较结果表明,由马兜铃tyrDC核苷酸序列推导的氨基酸序列分别与已发布的罂粟酪氨酸脱羧酶和唐松草酪 氨酸／多巴脱羧酶享有76％和79％的同源性。[结论]从马兜铃中扩增得到tyrDC cDNA全序列,且对酪氨酸脱羧酶的同源检 索显示,不同植物的酪氨酸脱羧酶之间都存在普遍的序列相似性。为去除马兜铃肾毒性奠定了基础。
- 杨瑞仪曾庆平
- 关键词：基因扩增
- 青蒿素合成cDNA和新EST的克隆及其低温诱导表达的定量分析被引量：3
- 2008年
- 为了开展基于青蒿发育特异及环境诱导转录物组学的新基因分离与鉴定,本研究采集经低温处理的盛花期青蒿(Artemisia annua)叶片提取总RNA,并进行全长cDNA表达序列标签(expres sedsequence tags,EST)克隆,经测序和同源性检索后提交GenBank.在已注册的75个序列中,共有4个全长cDNA与青蒿已知基因高度同源,其余71个EST在青蒿基因中无测序记录,但其中有34个序列与其他植物基因同源,包括24个已知蛋白编码序列和10个未知蛋白编码序列,另外37个序列在任何植物基因中均无测序记录,为首次克隆的植物新基因.为了研究青蒿基因对极端环境胁迫的响应模式,采用半定量PCR(semi-quantitative PCR,SQ-PCR)对冷处理前后青蒿试管苗中青蒿素合成基因ADS,CYP71AV1和CPR的表达水平进行了测定.结果显示,ADS和CYP71AV1基因受冷胁迫强烈诱导,但CPR基因未受明显影响.同时还发现这种冷胁迫诱导作用可被Ca2+通道抑制剂氯化镧(LaCl3)或Ca2+螯合剂EGTA所阻遏,表明Ca2+-CaM信号转导通路可能参与冷胁迫诱导ADS和CYP71AV1基因的表达.对冷胁迫青蒿试管苗的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)测定结果表明,CaM基因的表达水平上调2.5倍,从而印证了上述CaM介导信号转导与冷胁迫诱导基因表达之间相关的推论.利用RFQ-PCR对7个新分离青蒿EST进行了功能注释,结果显示,D/LTSRP,UBE,AR/DAP和POD1基因的冷胁迫诱导表达水平分别上调约8.0,5.0,2.3和1.5倍,而CHI和RGP基因的表达无明显上调或下调.本研究首次在转录水平上对青蒿素合成基因及青蒿新EST的冷胁迫诱导表达模式进行了初步探讨,有助于深入了解青蒿素合成与累积的内在规律及其协同调节机制,为促进青蒿的遗传性状改良及代谢工程指导的育种工作打下基础.
- 曾庆平赵昌尹录录杨瑞仪曾晓梅黄瑛冯丽玲杨雪芹
- 关键词：表达序列标签非生物胁迫荧光定量
- 套式PCR检测试剂盒用于普查疟疾带虫率的评价(英文)被引量：2
- 2013年
- 【目的】评价套式PCR检测试剂盒在疟疾现场监测中的效果。【方法】对疟疾从高度流行区转入低度流行区的非洲科摩罗Moheli岛居民,采集其指血2 098人份,同时制作厚血片和抗凝血样,用自制的套式PCR检测试剂盒检测所采集血样中的疟原虫,并与镜检法进行比较。为了避免假阳性,试验中设置了阴性对照组和阳性对照组。【结果】2 098份血样中,套式PCR技术阳性数140人,阳性率为6.67%;镜检阳性数63人,阳性率为3.00%。【结论】套式PCR检测试剂盒检测疟疾感染具高度敏感性,在疟疾控制转入清除阶段,采用此法普查可发现低密度疟原虫携带者,对快速清除传染源将有重要价值。
- 李国铭周耀芳邓常生杨雪芹罗晓莉陈颖婷杨瑞仪曾庆平李国桥冯丽玲
- 青蒿鲨烯合酶基因打靶研究被引量：3
- 2006年
- 目的通过代谢途径工程调整代谢流向,试图增大转基因青蒿Artemisia annua植株中的青蒿素产量。方法利用青蒿鲨烯合酶(SS)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因和胞嘧啶脱氨酶(CodA)基因构建基因打靶载体,并通过冻融法将载体导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens。以叶盘法转化青蒿,采用"分段选择法"筛选转基因再生植株。结果对表达GFP基因后发出绿色荧光的转基因植株,采用PCR及PCR产物杂交法,在1棵转基因植株中检测到外源GFP基因,而未检测到内源SS基因。初步证据显示,在转基因青蒿植株中,突变型SS基因已取代野生型SS基因。结论青蒿鲨烯合酶基因打靶已取得初步成功。
- 冯丽玲杨瑞仪杨雪芹曾庆平
- 关键词：青蒿鲨烯合酶基因打靶基因敲除
- 广东麻鸭DHBV全基因克隆及新读码框的发现被引量：1
- 2005年
- 选取3份DHBV阳性广东麻鸭血清提取DHBVDNA,设计一对扩增DHBV全基因序列引物Q1和Q2,扩增并克隆DHBV全基因序列,测序并运用相关计算机软件及方法分析获得的全基因序列。结果表明,广东麻鸭DH-BV全长为3027bp。提交GenBank后获得的收录号分别为:AY433937、AY521226、AY521227(来自1号血清);AY392760、AY536371(分别来自2、3号血清)。AY521227的PreS/SORF出现了单碱基突变,在PreC/CORF之前发现一个新的ORF,暂命名为HORF,HORF也同时存在于GenBank中储存的另外8个DHBV全基因序列中。系统发育分析表明,广东麻鸭DHBV在分化程度上是目前储存于GenBank中的DHBV全序列中最高的。成功克隆了广东麻鸭DHBV全基因序列,序列分析为进一步研究广东麻鸭DHBV提供了有益的信息。
- 何金洋葛文华朱宇同郭兴伯杨瑞仪冯丽玲张奉学陈鸿珊
- 关键词：全基因序列克隆
- 超氧化物致癌与抗氧化剂防治癌症新进展被引量：4
- 1997年
- 人们一直把超氧化物当作一种毒素对待,但最近有研究表明超氧化物可作为一种生长信号参与细胞的分裂增殖。超氧化物的这一新发现不但打破了超氧化物是毒素的传统观念,而且对它的作用有了新认识,并使抗氧化剂在防治癌症方面有了新的进展。
- 杨瑞仪
- 关键词：肿瘤防治抗氧化剂超氧化物致癌性
