王楚
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
- 供职机构：上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PI3KγmRNA 3′非翻译区可能存在基因表达负调控区被引量：7
- 2003年
- 为探索人磷脂酰肌醇 3 激酶γ(phosphoinositide 3 kinasePI3Kγ)基因 3′端非翻译区内AU富含区是否在基因表达调控中起作用 ,首先通过生物信息学分析发现在其 3′端非翻译区 (UTR)内存在0 9kb的AU富含区 ,其中包括 4个AU富含元件 ,以及 1个与众多基因非翻译区高度同源的长 130个碱基的区域 .将AU富含区插入报告基因egfp的下游构建pcDNA3 egfp AUR表达载体 .将表达载体转导NIH 3T3,74 0 2及K5 6 2细胞 ,流式细胞检测egfp的表达情况 .PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区可显著降低egfp的表达 2～ 3倍 (P <0 0 1) .利用放线菌素D阻断RNA转录后 ,Northern印迹分析结果显示egfp AURmRNA较egfpmRNA不稳定 .实验结果提示 ,PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区内可能存在转录后水平的基因表达负调控区 。
- 戴冰冰卢健王家敏梅文瀚王楚钱关祥
- 关键词：基因表达转录后调控
- PNP/fludarabine自杀基因系统对人肝癌细胞HepG2体外杀伤效应被引量：4
- 2004年
- [目的]研究嘌呤核苷酸磷酸化酶(purinenucleosidephosphorylase,PNP)/氟拉达滨(fludarabine)系统对人肝癌细胞HepG2体外杀伤效应。[方法]通过基因克隆技术将E.coliK12菌株来源的PNP基因通过8个甘氨酸的linker克隆至pEGFP鄄N1载体,在LipofectAMINE2000介导下,转染人肝癌细胞株HepG2,同时进行G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,命名为HepG2/PNP。通过PCR、RT鄄PCR、Northernblot鉴定PNP基因的表达;采用MTT和AnnexinV鄄FITC观察不同浓度的fludarabine对已转染的HepG2、不同比例转染和非转染混合细胞的杀伤作用。[结果]RT鄄PCR和Northern印迹证明转染的PNP基因能在HepG2和HepG2/PNP细胞中表达;低浓度fludarabine对转染了PNP基因的HepG2细胞具有显著的细胞毒效应;AnniexV凋亡实验结果表明PNP/fludarabine自杀基因系统对HepG2细胞具有显著的诱导凋亡作用;旁观者效应显示当10%~20%的HepG2/PNP细胞与80%~90%HepG2细胞混合在fludarabine浓度为1.0μg/ml时,可出现明显的旁观者效应。[结论]PNP/flu鄄darabine自杀基因系统在fludarabine浓度为0.5μg/ml～1.0μg/ml时对人原发性肝癌细胞HepG2具有明显的杀伤作用和旁观者效应。
- 李锋张萍王楚钱关祥
- 关键词：肝癌细胞自杀基因
- 增强P18^(INK4C)表达对胃腺癌细胞侵袭的影响(英文)被引量：1
- 2004年
- 在应用基因芯片技术筛选胃腺癌转移相关基因的过程中 ,发现CDK抑制因子P18INK4C在人类胃腺癌转移细胞株RF 4 8中的表达较其原发灶细胞株RF 1明显下调 .这提示P18INK4C表达差异与胃腺癌细胞的侵袭转移可能有一定程度的相关性 .通过构建P18INK4C 表达质粒并将其转染入RF 4 8增强P18INK4C的表达 ,研究其对胃腺癌原发灶细胞体外运动、侵袭转移能力以及生长特性的影响 ,进一步明确P18INK4C与人类胃腺癌侵袭转移之间的关系 .结果发现 ,增强P18INK4C表达可以使胃腺癌原发灶细胞的体外侵袭能力明显下降 ,而对RF 4 8的细胞周期和生长增殖能并力未产生影响 .上述结果提示 ,P18INK4C参与人类胃腺癌转移过程 ,在此过程中其主要的作用可能并不是调节细胞周期 ,而是与胃腺癌原发灶细胞侵袭转移能力的调节密切相关 .
- 王楚李锋王建华应磊卢健
- 关键词：胃腺癌
- 转化生长因子-β细胞周期抑制机制被引量：7
- 2002年
- 转化生长因子-β(TGF-β)属于二聚多肽类生长因子,参与调节细胞的增殖、分化和凋亡,是一类具有多种生物活性的细胞因子超家族。Smads分子将TGF-β信号由胞膜转导入细胞核内并调节目的基因对TGF-β的应答。作为细胞周期的抑制因子,TGF-β可以通过不同的途径使细胞停留在G1期,从而抑制细胞的生长。TGF-β信号转导通路的异常与肿瘤的发生密切相关。本文对近年TGF-β细胞周期抑制机制的研究作一综述。
- 王楚卢健
- 关键词：转化生长因子-Β信号转导
- 嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402体外杀伤效应的研究被引量：2
- 2005年
- 背景:肿瘤细胞内表达的自杀基因可将无毒性的前药转化为高毒性代谢产物以杀伤肿瘤细胞,嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统具有目前已知最强的旁观者效应,成为基因治疗领域中的研究热点。目的:研究PNP/fludarabine自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402的体外杀伤效应。方法:应用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增PNP基因,通过8个甘氨酸的接头克隆至真核表达载体pEGFP鄄N1。将pEGFP鄄N鄄PNP以Lipofectamine2000转染BEL7402细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,命名为BEL7402/PNP。应用逆转录(RT)鄄PCR和RNA印迹法(Northernblotting)鉴定PNP基因的表达。分别应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和AnnexinV鄄FITC凋亡检测试剂盒检测PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞的细胞毒效应、旁观者效应和诱导凋亡作用。结果:RT鄄PCR和RNA印迹法证实转染的PNP基因能在BEL7402和BEL7402/PNP细胞中表达。低浓度fludarabine对经PNP基因转染的BEL7402细胞具有明显的细胞毒效应;旁观者效应检测显示,10%的BEL7402/PNP细胞与90%的BEL7402细胞混合,经低浓度fludarabine处理,90%的细胞可被杀死;细胞凋亡检测显示,PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞具有明显的诱导凋亡作用。结论:PNP/
- 李锋王楚张萍钱关祥
- 关键词：嘌呤核苷磷酸化酶氟达拉滨自杀基因系统肝癌细胞系BEL7402体外杀伤效应
