王金凤
- 作品数：37 被引量：71H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HLA-A＊0201-BSP融合基因的构建与原核表达被引量：1
- 2006年
- 克隆表达可生物素化的HLA-A*0201的重链胞外区是制备HLA-A*0201-肽四聚体的先决条件。本研究构建重组HLA-A*0201-BSP融合基因的表达载体,以制备HLA-A2四聚体。根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从已鉴定为HLA-A*0201基因型的健康人白细胞中克隆HLA-A*0201重链胞外区的基因,拼接上依赖生物素-蛋白连接酶(biotin-proteinligase,BirA)的可生物素化序列(BirAsubstratepep-tide,BSP),构建HLA-A*0201-BSP的原核表达载体,在大肠杆菌DH5α中进行表达。结果表明:成功扩增出HLA-A*0201-BSP融合基因并测序证实,构建的pBV220-HLA-A*0201-BSP可在大肠杆菌DH5α中高效表达HLA-A*0201-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的28%,以包涵体的形式表达,经洗涤、变性后,以SepharcylS-300HR(S-300)柱层析纯化,纯度可达90%以上。结论:获得了高效表达HLA-A*0201-BSP的大肠杆菌工程菌株,建立了简便有效的包涵体纯化方法,为制备HLA-A*0201-肽四聚体奠定了基础。
- 孙万军杜建芳徐东刚邹民吉王金凤蔡欣王颖王嘉玺艾辉胜
- 重组人KGF-2突变体对小鼠小肠辐射损伤的防治作用研究
- 2010年
- 目的探讨重组人KGF-2突变体给药对60Coγ全身照射小鼠小肠黏膜损伤的保护作用。方法将小鼠分为正常组、模型组、重组KGF-2突变体防治组和安多霖防治组。利用60Coγ射线放射源对模型组和防治组小鼠进行全身照射,总剂量为6.5Gy。从存活率、生存状态和小肠组织病理切片等方面分析重组人KGF-2突变体的防治效果。结果重组人KGF-2突变体防治组存活率明显高于安多霖防治组和模型组;病理切片观察结果显示,重组人KGF-2突变体给药能够促进小肠隐窝细胞的增生,加快受损肠黏膜上皮的修复。重组人KGF-2突变体防疗组在毛色、行动状态等形态学指标上也明显好于模型组。结论重组人KGF-2突变体给药可以显著提高存活率,对60Coγ照射小鼠的小肠组织损伤具有较好的防治作用。
- 付文亮王园园王金凤邢微微徐涛袁顺宗朱泽轶洪明金哲邹民吉苏航徐东刚
- 关键词：黏膜修复存活率
- 加载白血病抗原肽PR1的HLA-A＊0201四聚体制备被引量：1
- 2007年
- 目的制备加载白血病抗原肽PR1的HLA-A＊0201四聚体。方法构建HLA-A＊0201-BSP和β2-微球蛋白（β2M）原核表达载体，进行目的蛋白表达、纯化。在体外将PR1（VLQELNVIV）与纯化的HLA-A＊0201-BSP、β2M通过稀释复性折叠成HLA-A＊0201-PR1复合物。利用BirA酶进行生物素标记。再经阴离子交换纯化得到生物素化的HLA-A＊0201-PR1复合物单体。此单体与PE标记的链霉亲和素按4：1比例混合，即可形成四聚体。结果成功制备了HLA-A＊0201-PRl四聚体。结论制备的HLA-A＊0201-PR1四聚体为定量检测白血病患者体内PR1抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞提供了有力工具。
- 孙万军艾辉胜徐东刚邹民吉杜建芳王金凤蔡欣王嘉玺
- 关键词：人类白细胞抗原
- 哮喘相关基因ORMDL3研究进展被引量：2
- 2010年
- 金哲王金凤吴奎武徐东刚
- 关键词：相关基因哮喘过敏性疾病慢性支气管炎复杂疾病发病过程
- 一种角质细胞生长因子突变体，其制备方法及用途
- 本发明公开了一种角质细胞生长因子突变体，还公开了该突变体的制备方法及用途。本发明的突变体是将角质细胞生长因子的第102位氨基酸残基由赖氨酸残基突变为谷氨酸残基。本发明的突变体是通过基因工程中的点突变技术制备的。突变后的角...
- 王金凤徐东刚王嘉玺彭善云邹民吉蔡欣
- 文献传递
- 重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆和表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :克隆人KGF_2基因 ,并在大肠杆菌中进行表达。方法 :通过PCR扩增 ,从人胎肝cDNA文库中获得编码人KGF_2的cDNA ,并将其分别克隆入pBV2 2 0 ,pLEX和pGEX4T_1质粒中 ,研究其在不同表达质粒和大肠杆菌中的表达情况。结果 :克隆得到的KGF_2cDNA经测序证明与文献报道的序列一致。将其克隆于pBV2 2 0质粒中 ,在E .coliJM10 9中表达量相对最高 ,约占菌体总蛋白的 4 % ;克隆于pLEX质粒中 ,在E .coliGI72 4中的表达量约占全菌总蛋白的 5 % ;克隆于pGEX4T_1中 ,在E .coliJM10 9中的表达量可占到全菌总蛋白的 2 0 %。结论 :采用GST融合蛋白表达质粒pGEX4T_1对KGF_2进行表达 ,较pBV2 2 0和pLEX具有明显优势 ,能实现对KGF_2的高效表达 ,为进一步的功能研究奠定了基础。
- 王金凤徐东刚彭善云蔡欣邹民吉王嘉玺
- 关键词：角质细胞生长因子-2基因克隆基因表达大肠杆菌
- PTD-NGF融合蛋白的制备、活性分析及其跨膜功能研究
- 2008年
- 目的:构建PTD-NGF融合基因,检测表达的重组蛋白生物学活性和跨膜转运功能。方法:提取小鼠大脑组织RNA逆转录后,钓取β-NGF基因。PCR技术构建PTD-NGF融合基因,插入表达质粒pBV220后,转化大肠杆菌DH5α进行表达与纯化。稀释法复性后,SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达重组蛋白。PC12细胞分化培养检测融合蛋白的生物学活性。重组蛋白与HepG2细胞共孵育,免疫组化检测其跨膜功能。结果:PTD-NGF融合基因测序正确,表达产物与目的蛋白大小相符,能与NGF抗体发生结合反应。纯化后蛋白纯度可约达90%以上,重组蛋白经复性可诱导PC12细胞出现明显分化,并能跨膜进入HepG2细胞内部。结论:成功构建了融合基因,表达的重组蛋白具有显著的生物学活性及跨膜转运功能。
- 李仁德王园园王金凤蔡欣邹民吉刘中成周磊磊邢微微龙民慧王嘉玺徐东刚
- 关键词：蛋白转导结构域跨膜转运基因融合
- 北京地区儿童生活方式、免疫状态及ORMDL3基因SNPs与哮喘发生的相关性研究被引量：18
- 2010年
- 目的分析ORMDL3基因的SNP rs7216389,rs7216558在中国北京地区儿童中的基因型频率,并调查其与儿童哮喘间的相关性。综合ORMDL3基因相关SNPs、儿童生活方式、IL-4、总IgE和特异性IgE所反映的免疫状态进行与儿童哮喘的相关性分析。方法采用病例-对照研究的方法,通过《国际儿童哮喘及过敏研究(ISSAC)问卷》收集生活方式信息;对聚合酶链式反应(PCR)产物进行序列分析得到SNPs的基因型;酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-4水平;免疫测定法测得儿童总IgE水平;放射性过敏原吸附试验法(RAST)检测特异性IgE水平。使用多元Logistics回归分析ORMDL3基因相关SNPs、生活方式、免疫状态与儿童哮喘的相关性。结果共收集到北京地区220名哮喘患儿及208名对照儿童的血液样本及相关信息。ORMDL3基因SNPs(rs7216389,rs7216558)在病例与对照组中无差异(P>0.05)。哮喘家族史与过敏性哮喘相关(P<0.05),而哮喘家族史、患儿年龄、采暖方式、家庭吸烟习惯、总IgE水平与非过敏性儿童哮喘显著相关(P<0.05)。结论在北京地区,ORMDL3基因SNPs(rs7216389,rs7216558)与儿童哮喘非显著相关。遗传因素与过敏性哮喘显著相关;而在非过敏性哮喘患儿中生活方式及免疫应激状态与哮喘相关,反映了除遗传因素以外,生活方式、免疫状态也对儿童哮喘具有重要影响。
- 金哲王金凤李红王园园王强吴奎武徐东群徐东刚
- 关键词：儿童哮喘病例对照研究SNPS
- 重组SAK及其突变体多克隆抗体制备及应用研究被引量：3
- 2007年
- 目的通过制备SAK及其突变体(SAK2)的多克隆抗体,检测并比较两者的免疫原性。方法将4只新西兰大耳白兔随机分为SAK组2只,SAK2组2只,皮下多点注射抗原SAK及SAK2。第3次免疫1周后,收集血清。使用饱和硫酸氨沉淀及DEAE离子交换法纯化多克隆抗体,ELISA检测抗血清效价。ELISA检测抗原抗体反应性,比较SAK和SAK2的免疫原性。结果兔抗SAK多克隆抗体与SAK2的反应性显著低于与SAK的反应性,兔抗SAK2多克隆抗体与SAK和SAK2的反应性无明显差异。结论使用多克隆抗体检测抗原抗体反应性的结果显示,SAK突变体SAK2缺失了部分抗原表位,同时未产生新的抗原表位。与SAK相比SAK2可能具有较低的免疫原性。利用多克隆抗体检测抗原抗体反应性对判断抗原性变化具有重要价值。
- 王园园王旻邹民吉刘深徐涛蔡欣王金凤徐东刚
- 关键词：葡激酶多克隆抗体免疫原性
- 一种重组葡激酶衍生体及其制备方法
- 本发明公开了属于基因工程及生物溶栓药物制备技术范围的涉及一种重组葡激酶衍生体及其制备方法。其制备方法为利用基因体外重组技术将RGD序列、水蛭素的C末端序列与构建的低抗原性高活性SAK突变体基因相融合，同时引入Xa因子切割...
- 徐东刚邹民吉王旻蔡欣王金凤陈光宇刘深徐涛
- 文献传递
