章莹
- 作品数：10 被引量：38H指数：3
- 供职机构：武汉大学基础医学院医学遗传学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金湖北省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫酚氧化酶的组化定位研究被引量：3
- 2004年
- 目的 观察酚氧化酶 (phenol oxidase,PO)在日本血吸虫成虫的组织学分布。方法 酚氧化酶组化方法 :将 4 2 d虫龄的日本血吸虫活成虫置含 2 5 mm ol/ L 邻苯二酚的磷酸盐缓冲液 (p H6 .8)中 ,37℃孵育 30 m in后 ,转移虫体至载玻片上 ,吸去虫体表面液体 ,将其中一部分虫体置Olym pus显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布。荧光组织化学方法 :经上述过程处理后 ,在另一部分虫体上滴加 2滴含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 PBS溶液 ,然后置 L eica荧光显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布。结果 酶组织化学方法显示 ,日本血吸虫酚氧化酶仅分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面 ,呈现棕褐色显色反应 ;雌虫卵巢和雄虫均未发现酚氧化酶活性。然而 ,荧光组织化学方法显示 ,酚氧化酶除主要分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面 ,呈现强荧光外 ,还少量分布于雄虫体壁表层 ,呈现弱荧光反应。结论 不仅日本血吸虫雌虫含有酚氧化酶活性 ,而且雄虫也含酚氧化酶活性 ,只不过其含量少、活性低。荧光组织化学方法能更灵敏地显示日本血吸虫酚氧化酶活性 ,更适用于日本血吸虫酚氧化酶的组织学定位。
- 蔡国斌何立蒋明森赵琴平章莹杨孟祥
- 关键词：日本血吸虫酚氧化酶酶组织化学
- 日本血吸虫酚氧化酶抗原诱导免疫对病鼠肝脏病理变化的影响
- 2004年
- 目的 观察日本血吸虫酚氧化酶天然蛋白抗原诱导免疫对病鼠肝脏的病理变化。方法 将 4 2 d活成虫置于含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 RPMI 16 4 0培养基中孵育 8h后洗净 ,匀浆 ,超声粉碎、低温高速离心 ,将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,嗣后分别在两侧切取胶宽约 1cm进行酶染色 ,解剖刀准确切下相应的未染色的凝胶。冻干后碾成粉末 ,高速电动匀浆成浆糊状 ,冷浸过夜。高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原。设立 3组进行免疫实验 :实验组、佐剂对照组和空白对照组。初次免疫后第 2、4周 ,各重复 1次加强免疫 ,最后 1次免疫 10 d后用新鲜逸出尾蚴 (4 0± 1)条 /鼠进行攻击感染。 4 2 d剖杀动物 ,观察日本血吸虫感染小鼠肝脏的病理变化。结果 与对照组相比 ,酚氧化酶免疫实验组小鼠肝脏表面较光滑 ,隐约可见少量灰白色小点 ,肝色泽略带灰色 ,质地较软 ;压片观察小鼠肝脏内虫卵集聚数量明显减少 ,且以未成熟虫卵为主。肝脏内伴少量肝细胞坏死 ,细胞浸润不明显 ,可见较多未成熟卵周围无肉芽肿反应。小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积比对照组小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积明显减小 ,两组间差异有非常显著性 (P<0 .0 1)。结论 日本血吸虫酚氧化酶蛋白具抗原性 。
- 章莹蔡国斌蒋明森何立杨孟祥
- 关键词：日本血吸虫酚氧化酶肝脏病理变化
- 日本血吸虫酚氧化酶诱导免疫对小鼠保护性的初步研究
- 2004年
- 目的观察日本血吸虫酚氧化酶的抗原性和诱导宿主抗血吸虫病的免疫保护性作用。方法将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后,分别在两侧切取胶宽约1cm进行酶染色,然后准确切下相应的未染色的凝胶。经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜。高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原。设立3组进行保护性免疫实验A组(实验组)、B组(佐剂对照组)和C组(空白对照组)。初次免疫后第2、4周,各重复1次加强免疫,最后1次免疫后10d按常规收集各组免疫血清。常规ELISA法测定免疫血清效价。然后用新鲜逸出尾蚴(40±1)条/鼠进行攻击感染。6周后,收集成虫计数,常规计算减虫率并检测肝脏虫卵负荷。结果ELISA法测定的酚氧化酶免疫小鼠血清效价在1∶1200以上。日本血吸虫酚氧化酶粗抗原免疫小鼠,其雌虫、雄虫和总虫数的减虫率分别为53.27%、26.76%和39.53%,与C组相比,差异均有极显著意义(P<0.01)。A组减卵率为50.75%,与C组相比,差异有极显著意义(P<0.01)。结论日本血吸虫酚氧化酶具有抗原性,能诱导宿主抗血吸虫感染免疫保护作用。其诱导保护性免疫的机制尚待进一步研究。
- 蔡国斌何立蒋明森章莹赵琴平杨孟祥
- 关键词：日本血吸虫酚氧化酶小鼠免疫保护性抗原性
- 丙烯硫脲对日本血吸虫酚酶抑制作用的组织化学研究被引量：1
- 2003年
- 目的 通过组织化学方法研究丙烯硫脲对小鼠体内、体外日本血吸虫成虫酚酶 (phenol oxidase,PO)活性的抑制作用。方法 将 4 2 d日本血吸虫活成虫置于含 2 5 mmol/L 邻苯二酚的磷酸盐缓冲液 (p H6 .8)中 ,2 8℃下孵育 30 min,取出虫体置载玻片上 ,加 2滴含 0 .1%戊巴比妥钠的 PBS溶液 ,置 L eica荧光显微镜下 ,分别在普通光照和紫外光激发下观察酚酶在虫体内的组织学定位。体外抑制实验时 ,加底物前先将成虫置于含 5mm ol/L 丙烯硫脲的 PBS溶液中 ,2 8℃下孵育 10 min;体内抑制实验时 ,在小鼠感染日本血吸虫尾蚴 2 0 d后 ,按30 0 m g/kg隔日 1次腹腔注射丙烯硫脲。结果 体外抑制实验组雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳和雄虫体壁表层的桔黄色荧光或赭褐色颜色反应均基本消失 ;体内抑制实验组雌虫子宫内未见虫卵或虫卵样物质 ,仅见大量泥沙样卵黄颗粒 ,其荧光或颜色反应也基本消失。结论 通过一种更灵敏的显示酚酶活性的组织学定位方法 ,观察到不仅雌虫含有酚酶 ,雄虫也有酚酶活性。证明丙烯硫脲对血吸虫成虫的酚酶活性有明显的抑制作用 。
- 何立章莹蒋明森蔡国斌赵琴平杨孟祥
- 关键词：日本血吸虫组织化学
- 酚酶抑制剂对日本血吸虫感染小鼠抗再感染的影响被引量：9
- 2002年
- 目的 观察雌虫酚酶活性被抑制后 ,日本血吸虫成虫诱导感染小鼠的伴随免疫作用。方法 每只小鼠初次感染日本血吸虫尾蚴 (40± 1)条 ,4 2 d后攻击感染 (40± 1)条尾蚴 ,其间初次感染 2 1d开始 ,按 30 0 m g/ kg的剂量隔日 1次腹腔注射丙烯基硫脲 ,至攻击感染后 2 0 d剖杀小鼠。同时设立实验对照组 (未注射丙烯基硫脲组 ) ,初次感染对照组及攻击感染对照组。计算各组减虫率并进行统计学处理。结果 实验组和对照组减虫率分别为 86 .4 %和 36 .8%。经χ2 检验差异有非常显著意义 (χ2 =10 .7,P <0 .0 1)。两组检获虫体总数分别为 2 8.9± 10 .2和 34.8± 14 .2。经 t检验差异也有显著意义 (t=1.785 ,P <0 .0 5 )。结论 日本血吸虫酚酶活性被抑制后 ,虫卵卵壳形成被抑制 ,雌虫不能产出正常虫卵或虫卵不能发育成熟。依此建立的新模型提示 ,无可溶性虫卵抗原(SEA)存在 。
- 蔡国斌蒋明森何立赵琴平章莹易新元曾宪芳
- 关键词：日本血吸虫日本血吸虫病
- 日本血吸虫酚氧化酶天然蛋白分子特征的初步分析被引量：1
- 2004年
- 目的 初步分析日本血吸虫酚氧化酶 (phenol oxidase,PO)天然蛋白分子的分子量及其亚基组成。方法 将 4 2 d龄活成虫置于含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 RPMI16 4 0培养基中 2 3℃孵育 8h后 ,PBS(p H6 .8)洗净 ,分离雌、雄成虫 ,研磨呈匀浆 ,超声粉碎、低温高速离心 ,取上清 (含 PO)进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,分别在两侧切取胶宽约 1cm进行酶染色 ,然后用解剖刀准确切下相应的未染色的凝胶。经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末 ,高速电动匀浆成浆糊状 ,冷浸过夜 ,高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗蛋白 ,进行 SDS- PAGE。利用 SDS- PAGE与 PAGE(点加 1孔预染 Mark蛋白 )的结果 ,对照分析酚氧化酶蛋白的可能分子量及其亚基组成。结果 PAGE:日本血吸虫雌虫、雄虫酚氧化酶蛋白均表现为迁移率相同的 1条主带 ,其对应分子量大约为 81k D。SDS-PAGE:酚氧化酶粗蛋白共出现 5条带 ,分别为 81、6 4、5 4、4 1k D和 2 7k D。结论 初步分析日本血吸虫雌、雄成虫酚氧化酶天然蛋白分子的分子量及其亚基组成基本相同 ,可能为单体酶 (分子量 81k D)或由 3个 2 7k D相同亚基构成的同聚体。
- 蔡国斌何立蒋明森章莹赵琴平杨孟祥
- 关键词：日本血吸虫酚氧化酶分子量
- 寄生性吸虫谷胱甘肽过氧化物酶生物信息学分析被引量：4
- 2010年
- 目的分析几种重要医学吸虫谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)基因及其编码蛋白的生物学信息,探讨吸虫GPx在生物系统发育中的进化地位。方法从网络数据库获取各类目标序列,用NCBI Blast、Clustal X、GeneDoc、PH YLIP和SECISearch等工具,以及比较基因组学方法进行信息学分析。结果获得来自6种不同吸虫共12个GPx基因,分析发现它们均属磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)家族,各成员之间具有较高的序列同源性(35%～87%)。除卫氏并殖吸虫一PHGPx基因外,其他基因开放阅读框内均含有"TGA"密码子,编码硒半胱氨酸,且其3’-端非翻译区均含有硒半胱氨酸插入序列(SECIS)。除华支睾吸虫一GPx基因组结构由5个外显子和4个内含子组成外,其他均由6个外显子和5个内含子组成。而且,吸虫的GPx基因"内含子?外显子"结构和脊椎动物的PHGPx基因相似,高度保守。结论医学吸虫和脊椎动物宿主的PHGPx基因可能来源于共同的祖先,提示寄生虫与宿主之间的相容性和协同进化的特征。
- 章莹蔡国斌何立蒋明森
- 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶生物信息学协同进化
- 刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析被引量：3
- 2016年
- 目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。
- 章莹宗红英何立蔡国斌
- 关键词：刚地弓形虫克隆表达
- 日本血吸虫酚氧化酶同工酶分析
- 2003年
- 目的观察日本血吸虫成虫单酚氧化酶(monophenoloxidase,MPO)和二酚氧化酶(diphenoloxidase,DPO)的同工酶酶谱形式。方法将收集到的42d活成虫置含0.05%戊巴比妥钠的RPMI1640培养基中,23℃孵育8h,分别研磨雌、雄成虫呈匀浆,显色单酚氧化酶的样品匀浆时另加5%的TX-100。超声粉碎、低温高速离心取上清(含PO),进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及酶染色后分析两种酚氧化酶同工酶酶谱形式。结果单酚氧化酶的同工酶酶谱与二酚氧化酶的同工酶酶谱基本一致,电泳位置相同,表现为迁移率相同的一条带,但是单酚氧化酶的酶谱谱带较二酚氧化酶的酶谱显色弱。同时,雌虫及雄虫的单酚氧化酶和二酚氧化酶亦表现为迁移率相同的一条主带;但雄虫的酶带显色反应较雌虫弱。结论日本血吸虫成虫体内酚氧化酶存在两种形式:单酚氧化酶和二酚氧化酶。而且不仅雌性虫含有酚氧化酶,雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有少量酚氧化酶的生理意义有待进一步研究。
- 章莹蒋明森蔡国斌何立赵琴平杨孟祥
- 关键词：日本血吸虫酶谱
- 日本血吸虫酚氧化酶的电泳及酶活性的研究被引量：18
- 2003年
- 目的 观察日本血吸虫成虫酚氧化酶 ( phenol oxidase,PO)的酶谱及其活性。方法 将 42 d活成虫置含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 RPMI16 40培养基中 2 3℃孵育 8h后 ,分别收集雌、雄成虫 ,匀浆、超声粉碎、高速离心取上清 (含 PO) ,再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)及酶染色后分析其酶谱 ;同时在紫外分光光度计下检测前后 2个时点的 A488值 ( A1,A2 ) ,PO活性相对值 =( A2 - A1) / ( min· m g样品蛋白 ) ,其活性值用每分钟每毫克蛋白 A488变化值表示。设立酚酶抑制剂 (丙烯基硫脲 )组 ,在该组成虫匀浆上清中预先加入丙烯基硫脲以观察其对酚氧化酶活性的抑制效果。结果 雌虫及雄虫均表现为迁移率相同的一条主带 ;但雄虫的酶带显色反应比雌虫弱。日本血吸虫雌虫及雄虫的酚氧化酶相对活性分别为 0 .16 5 m in- 1· mg- 1和 0 .0 80 5 min- 1· m g- 1 ;加入酚酶抑制剂后 ,酶活性被明显抑制。终浓度为 5 mm ol的丙烯基硫脲对成虫酚酶活性的抑制率为 85 .0 3%。当丙烯基硫脲终浓度达 2 5 m mol时 ,酚酶活性被完全抑制。结论 不仅雌性成虫含有日本血吸虫酚氧化酶 ,而且雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有的少量酚氧化酶的生理意义有待于进一步研究。
- 蔡国斌何立蒋明森赵琴平杨孟祥章莹
- 关键词：日本血吸虫酶谱聚丙烯酰胺凝胶电泳紫外分光光度法
