章辉
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
- 供职机构：江苏省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省预防医学科研基金徐州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫复合B细胞表位抗原的制备和鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的制备日本血吸虫复合B细胞表位抗原,并对其抗原性进行鉴定。方法用生物信息学软件(BioSun)预测已报告的日本血吸虫Sj22.6、Sj14-3-3、Sj26等3个B细胞表位片段的基因序列(P2、P6、P7),用随机顺序法连接3个片段,克隆入高效融合表达载体pET-32c(+)中,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,经酶切及基因测序鉴定重组子。阳性克隆经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱纯化,用蛋白质印迹(Westernblotting)分析该表达产物的抗原性。结果3个目的表位基因片段按P2-P6-P7和P6-P2-P7的顺序连接为2条复合表位片段(表位间由6个氨基酸组成的柔性接头连接),成功克隆入pET-32c(+)。其重组子均可表达相对分子质量(Mr)约20400的融合蛋白。亲和层析纯化的融合蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一条带(Mr20400),Western blotting分析显示,这2条重组复合表位蛋白均可被日本血吸虫病患者血清识别,而不与健康者血清反应。结论获得2个具有日本血吸虫病诊断潜在价值的复合B细胞表位抗原。
- 章辉朱荫昌司进赵松王晓婷殷旭仁曹利民曹国群华万全徐明梁幼生
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达
- 日本血吸虫可溶性虫卵抗原干预ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化机制研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的保护作用及其免疫调节机制。方法设置实验组1和2,实验组1小鼠从第1周开始高脂饮食喂养,分为预防组和对照组,第1周时分别腹腔注射SEA及PBS,每周1次,共4次;实验组2小鼠高脂饮食喂养至第14周,分为治疗组和对照组,第14周时分别注射SEA及PBS,每周1次,共4次。第22周处死小鼠,观察SEA对动脉粥样硬化的干预作用以及小鼠体内的细胞因子和调节性T细胞亚群CD4+CD25+FoxP3+T细胞水平的变化。结果给予SEA后,与相应对照组比较,预防组和治疗组小鼠血清总胆固醇含量均显著降低,外周血TNF-α、IL-10水平均显著下降;预防组小鼠动脉粥样硬化斑块面积被显著抑制,但治疗组无明显变化。第22周时,预防组外周血CD4+CD25+FoxP3+T细胞占CD4+T细胞比例为(4.4±0.9)%,与对照组[(2.6±0.3)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗组细胞比例给予SEA前后差异无统计学意义(P<0.05)。结论SEA能降低ApoE-/-小鼠血清总胆固醇水平;预防性给予SEA具有抑制动脉粥样硬化作用,其主要机制是在疾病初始阶段抑制炎症因子产生Treg细胞增殖。
- 章辉邢芸孔辉戴洋何伟葛颂朱荫昌
- 关键词：日本血吸虫可溶性虫卵抗原动脉粥样硬化调节性T细胞
- 结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6-CFP10的融合表达及纯化
- 2005年
- 目的在原核表达系统融合表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6和培养滤液蛋白CFP10的融合蛋白(rE6C)并纯化,测定抗原性和特异性。方法用将一个柔性的氨基酸“接头”插入原核表达载体pET32c(﹢)中,构建pET32c(﹢)-linker。PCR法扩增ESAT-6、CFP10基因。将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c(﹢)的linker前,CFP10克隆入linker后,构建E6C融合基因,转化大肠杆菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠杆菌BL21中表达,纯化rE6C蛋白,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其抗原性和特异性。结果重组质粒pET32c(﹢)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致。携带重组质粒的菌株经诱导产生高水平的表达产物,纯化的表达产物具备较高的纯度、抗原性和特异性。结论pET32c(﹢)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达,rE6C融合蛋白具有良好的抗原性和特异性,有望用于结核分枝杆菌感染的临床诊断。
- 娄培安王晓婷周艳秋章辉刘加彬李玲赵广法朱荫昌
- 关键词：结核分枝杆菌抗原酶联免疫吸附测定
- 重组结核杆菌分泌融合蛋白活性鉴定及应用被引量：4
- 2006年
- 目的研究融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白CFP10-ESAT-6或ESAT-6-CFP10免疫学特性。方法将一个柔性的氨基酸接头插入原核表达载体pET32c(+)中,构建pET32c(+)-linker。PCR法扩增CFP10、ESAT-6基因。将CFP10克隆入改建的载体pET32c(+)的linker前,ESAT-6克隆入linker后,构建CFP10-ESAT-6融合基因;或将ESAT-6克隆入改建载体pET32c(+)的linker前,CFP10克隆入linker后,构建ESAT-6-CFP10融合基因,分别转化大肠埃希菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠埃希菌BL21中表达,通过Westernblot分析其抗原性。结果2个目的基因分别被按顺序成功克隆入载体pET32c(+)的linker前或后。重组质粒pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致。融合蛋白在BL21菌中高效表达。Western blot分析表明,融合蛋白与活性肺结核患者血清能发生特异性免疫反应。结论成功地构建了多抗原基因DNA质粒;pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白,该蛋白兼具CFP10和ESAT-6两种蛋白的抗原性。
- 娄培安章辉李玲刘加彬王晓婷周艳秋赵广法朱荫昌
- 关键词：结核杆菌融合蛋白血清学
- 日本血吸虫复合B细胞表位抗原的研究
- 血吸虫病是一种严重危害人类健康的人畜共患寄生虫病。我国是全球血吸虫病危害最严重的国家/(埃及、苏丹、中国、巴西/)之一,我国流行日本血吸虫病,主要流行于长江流域及以南的12个省/(市、自治区/)的434个县/(市、区/)...
- 章辉
- 关键词：B细胞表位克隆日本血吸虫B细胞表位克隆血吸虫病酶联免疫吸附试验免疫诊断
- 文献传递
- 体内电穿孔增强日本血吸虫核酸疫苗免疫保护作用的研究
- 2008年
- 目的探讨体内电穿孔技术增强日本血吸虫核酸疫苗的免疫保护效果。方法分别大量制备质粒pcDNA3.1-SjC23、pcDNA3.1-SjCTPI、pcDNA3.1-(CDR3)6和重组蛋白SjC23-HD、SjCT-PI与NP30。上述3种质粒DNA以等量混合后即为鸡尾酒式DNA疫苗,3种蛋白以等量混合后即为鸡尾酒式蛋白疫苗。70只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E5组,每组14只。A组为自然感染组;B组(电脉冲空质粒对照组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3.1,每次注射时辅以体内电穿孔;C组(电脉冲空质粒+混合蛋白对照组)空质粒免疫及体内电穿孔同B组,但于第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗+100μl福氏完全佐剂(FCA);D组(电脉冲混合DNA组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗,每次免疫时辅以体内电穿孔;E组(电脉冲混合DNA+混合蛋白组)混合DNA免疫及体内电穿孔同D组,但于第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗+100μlFCA。DNA免疫组末次免疫后4周,蛋白加强组末次免疫后2周,所有小鼠同时经腹部皮肤感染(40±1)条尾蚴。攻击感染后42d剖杀小鼠,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2d及感染前2d分别经尾静脉采血,分离血清检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1及IgG2a,并取小鼠脾脏制备单个脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果C、D组和E组的减虫率分别为18.09%、45.00%和57.09%,D组和E组的减虫率均显著高于C组(P均<0.01),且E组的减虫率高于D组(P<0.05);C、D组和E组的减卵率分别为12.49%、50.88%和59.26%,D组和E组的减卵率均显著高于C组(P均<0.01),且E组的减卵率高于D组(P<0.05)。C、D、E3组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2a/IgG1比值分别为0.394、3.518、0.914。D、E2组小鼠IL-2、IFN-γ含量较对照组均有明显升高,IL-4则无明显差异。结论体内电穿孔技术可显著提高日本血吸虫核酸疫
- 戴洋朱荫昌唐建霞王晓婷鲁飞章辉徐明许永良管晓虹
- 关键词：日本血吸虫联合免疫
- 日本血吸虫病诊断分子B细胞表位的预测与鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的 应用生物信息学技术对日本血吸虫病常用诊断分子进行B细胞表位的预测，筛选出具有潜在诊断价值的表位分子，采用基因工程方法制备目的表位的融合蛋白并进行抗原性鉴定。方法 将日本血吸虫膜蛋白22kDa（Sj22）、膜蛋白23kDa（Sj23）、信号蛋白14—3—3（Sj14—3—3）、谷胱甘肽S转移酶（Sj26）分子的全基因序列输入BioSun软件的工作区，经多参数比较筛选可能的B细胞表位，克隆、表达预测表位，用表达的融合蛋白作为抗原与血吸虫病人血清反应，以筛选和鉴定具有抗原性的表位。结果 经预测分析，Sj22的B细胞表位可能在56～62位和127～133位氨基酸区域，Sj23的B细胞表位可能在149～156位和160～167位氨基酸区域，Sj14—3—3的B细胞表位可能在118～225位和130～137位氨基酸区域，Sj26的B细胞表位可能在143～149位和191～197位氨基酸区域。克隆、表达并纯化这8个表位的融合蛋白，经SDS—PAGE和Western blot检测抗原性，筛选出分别来自于Sj22、Sj14-3-3、Sj26的3条具有较强抗原性的表位片段。结论 生物信息学技术结合分子生物学方法可用于筛选具有潜在诊断价值的表位。
- 章辉司进朱荫昌赵松王晓婷殷旭仁曹利民华万全徐明梁幼生
- 关键词：B细胞表位克隆
- B细胞表位预测的研究进展被引量：13
- 2006年
- 章辉朱荫昌
- 关键词：B细胞表位表位预测抗原决定簇效应分子新型疫苗
- 重组结核分枝杆菌特异性分泌抗原融合蛋白的活性鉴定及初步应用被引量：1
- 2006年
- 目的:融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白CFP10-ESAT-6或ESAT-6-CFP10,研究其免疫学特性,为结核病的血清学诊断提供物质基础。方法:将一个柔性的氨基酸“接头”插入原核表达载体pET32 c(+)中,构建pET32 c(+)-linker。PCR法扩增CFP10、ESAT-6基因。将CFP10克隆入改建的载体pET32 c(+)的linker前,ESAT-6克隆入linker后,构建CFP10-ESAT-6融合基因;或将ESAT-6克隆入改建的载体pET32 c(+)的linker前,CFP10克隆入linker后,构建ESAT-6-CFP10融合基因,分别转化大肠杆菌XL1-b lue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠杆菌BL21中表达,通过W estern b lot分析其抗原性。结果:两个目的基因分别被按顺序成功克隆入载体pET32 c(+)的linker前或后。重组质粒pET32 c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32 c(+)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致。融合蛋白在BL21菌中高效表达。W estern b lot分析表明,融合蛋白与活动性肺结核患者血清能发生特异性免疫反应。结论:成功地构建了多抗原基因DNA质粒;pET32 c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32 c(+)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白,该蛋白兼具CFP10和ESAT-6两种蛋白的抗原性。本研究为rCFP10-ESAT-6或r ESAT-6-CFP10融合蛋白在结核病血清学诊断中应用奠定了基础。
- 娄培安章辉李玲刘加彬王晓婷周艳秋赵广法朱荫昌
- 关键词：分枝杆菌融合蛋白血清学
- 结核分枝杆菌特异性分泌抗原克隆和融合表达及抗原性鉴定
- 2006年
- 目的融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白CFP10-ESAT-6或ESAT-6-CFP10,研究其免疫学特性,为结核病的血清学诊断提供物质基础。方法将一个柔性的氨基酸“接头”插入原核表达载体pET32c(+)中,构建pET32c(+)-linker。PCR法扩增CFP10、ESAT-6基因。将CFP10克隆入改建的载体pET32c(+)的linker前,ESAT-6克隆入linker后,构建CFP10-ESAT-6融合基因;或将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c(+)linker前,CFP10克隆入linker后,构建ESAT-6-CFP10融合基因,分别转化大肠杆菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠肝菌BL21中表达,通过Westernblot分析其抗原性。结果二个目的基因分别被按顺序成功克隆入载体pET32c(+)的linker前或后。重组质粒pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致。融合蛋白在BL21菌中高效表达。Westernblot分析表明,融合蛋白与活动性肺结核患者血清能发生特异性免疫反应。结论成功地构建了多抗原基因DNA质粒;pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白,该蛋白兼具CFP10和ESAT-6二种蛋白的抗原性。本研究为rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白在结核病血清学诊断的中应用奠定了基础。
- 娄培安章辉刘加彬王晓婷周艳秋赵广法朱荫昌
- 关键词：结核杆菌重组蛋白血清学检验
