舒宁波
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺苷对人结直肠癌细胞hMLH1基因甲基化的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨腺苷对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响.方法 分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后,采用亚硫酸氢盐测序（BSP）法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况、反转录PCR法检测hMLH1 mRNA的表达、Western印迹法检测hMLH1蛋白的表达、采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞24、48、72、96 h后通过四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测各组细胞活力.结果 腺苷干预后1.5、3.0、4.5 mmol/L各组甲基化程度分别为65％±4％、45％±11％和16％±4％,均明显低于对照组（80％±4％,均P＜0.01）;hMLH1 mRNA转录水平、蛋白表达水平、细胞凋亡水平均明显高于对照组（0.230±0.032、0.359±0.029和0.570±0.019比0.079±0.010,0.353±0.016、0.654±0.018和0.854 ±0.014比0.126±0.016,11.9％±0.6％、20.0％±1.8％和35.8％±1.8％比3.9％±1.4％,均P＜0.01）.MTT法显示不同浓度腺苷干预细胞后,各组细胞活力均明显低于对照组（均P＜0.05）,有一定的时间-剂量依赖性.结论 腺苷可逆转hMLH1启动子区异常甲基化状态,使hMLH1表达增加,抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡.
- 谢凯王亚旭申海鹰张灵敏曾令海舒宁波李权
- 关键词：结直肠肿瘤腺苷甲基化
- 5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及机制被引量：3
- 2013年
- 目的观察5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人结肠癌细胞（SW480）株增殖凋亡的影响并探讨其机制。方法以2．5、5．0、10．0μmol／L的5-Aza—CdR作用于SW480细胞72h后，采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率；甲基化测序聚合酶链反应（BSP）检测Disable一2（DAB2）胞嘧啶一磷酸一鸟嘌呤基序（CpG）岛的甲基化状态；逆转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）检测DAB2mRNA的表达；激光共聚焦显微镜检测DAB2蛋白的表达。结果（1）5-Aza．CdR对SW480细胞生长有抑制作用，用药处理后细胞凋亡率分别为（12．89±0．59）％、（16．74±1．80）％、（33．02±3．30）％，（P〈0．01）；（2）5-Aza—CdR处理前甲基化程度为89．09％，处理后依次为70．00％、55．45％、10．91％，肩动子甲基化水平明显降低（P〈0．01）；（3）5-Aza—CdR处理前RT—PCR可以少量扩增出DAB2mRNA特异性条带（平均灰度比值为0．266±0．013），5-Aza—CdR处理后可见DAB2mRNA转录水平增加，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关，平均灰度比值2．5p．mol／L组为0．363±0．009，5．μmol／L组为0．490±0．021；10．0Ixmol／L组为0．753±0．028（P〈0．01）；（4）5-Aza—CdR处理前有少量DAB2蛋白表达于细胞质及细胞核中（荧光强度为：94．50±13．39），予以5-Aza—CdR处理之后DAB2的表达量增加（荧光强度为：123．75±15．19，P〈0．01）。结论5-Aza—CdR能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的作用，其机制可能是5-Aza．CdR能逆转SW480细胞DAB2启动子CpG岛的异常甲基化．诱导mRNA转录和蛋白的表诀．
- 舒宁波王亚旭曾令海谢凯张灵敏毕德利
- 关键词：甲基化脱噬作用
- 磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶信号通路对结肠癌SW480细胞株的影响及其机制被引量：7
- 2013年
- 目的探讨磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）信号通路对结肠癌细胞SW480的增殖、凋亡及侵袭能力的影响及其可能机制。方法以不同浓度（0、5、10、20、40μmol／L）PI3K-AKT通路特异性抑制剂LY294002作用于SW480细胞，通过四甲基偶氮唑盐法（Mrrr法）检测24、48、72h后细胞活力；以不同浓度（0、10、20、40μmoL／L）LY294002作用于SW480细胞24h，分别用流式细胞法（FCM）检测各组细胞凋亡率，Transwell小室侵袭实验检测各组细胞侵袭能力改变，Western印迹法检测各组细胞血管内皮生长因子（VEGF）、金属基质蛋白酶9（MMP-9）的表达；运用单因素方差分析进行统计学分析。结果MTT法显示除较低浓度组（5μmol／L）外，其余浓度组SW480细胞增殖率均明显低于0μmol／L（对照）组，且有一定的时间一剂量依赖性（均P〈0．05）。流式细胞结果显示，10、20、40μmol／L组凋亡率分别为13．3％±0．9％、30．9％±2．5％、41．2％±4．1％，均明显高于对照组（5．2％±1．8％，均P〈0．05）；细胞侵袭力检测结果显示，10、20、40μmoL／L组穿透膜的细胞数量依次为（87±6）、（65±7）、（46±11）个，除10μmol／L组（P=0．096）外，其余各组均明显低于对照组[（100±10）个，均P〈0．05]。Western印迹法检测各浓度组VEGF、MMP-9表达均少于对照组（均P〈0．05）。结论PI3K-AKT信号通路是结肠癌细胞株SW480增殖、抗凋亡、侵袭转移的重要因素，其机制可能与抑制VEGF、MMP-9表达有关，PI3K-AKT信号通路可能是结肠癌治疗的潜在靶点。
- 马冬华龙腾王亚旭舒宁波毕德利
- 关键词：结肠肿瘤肿瘤侵润信号传导
- BMP-2联合温热化疗对SW480中GDF15和TFF3表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)联合温热化疗对SW480中GDF15和TFF3表达的影响。方法:BMP-2作用于大肠癌SW480细胞系,置于43℃温热化疗30 min,培养6 h。(1)流式细胞法检测SW480细胞的凋亡;(2)Western blot法检测GDF15和TFF3蛋白表达情况;(3)RT-PCR半定量检测GDF15和TFF3的mRNA表达。结果:BMP-2联合43℃温热化疗后SW480细胞凋亡增加,GDF15和TFF3蛋白表达水平下降,GDF15和TFF3的mRNA表达亦下调。结论:BMP-2联合温热化疗通过抑制大肠癌SW480的GDF15和TFF3蛋白及其相关基因表达,增强抑制SW480的增殖及转移复发的作用;温热疗法联合化疗对GDF15和TFF3表达抑制有协同作用。
- 毕德利王亚旭舒宁波谢凯
- 关键词：骨形态发生蛋白-2温热化疗GDF15TFF3
