公共文化服务平台

C群脑膜炎球菌家兔免疫血清的制备及其群特异性和相关方法专属性分析被引量：4: 2014年; 目的制备C群脑膜炎球菌家兔免疫血清,并进行群特异性和相关方法专属性分析。方法用制备的C群脑膜炎球菌菌液免疫青紫兰家兔,经耳缘静脉注射8×109个/ml菌液,0.5~1.0 ml/只,每周1、3、5免疫,共免疫4周,于第6周开始加强免疫,每周2次,连续3周,于末次免疫1周后,经颈动脉采血,分离血清,采用免疫双扩散法检测血清效价。采用ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法分析其群特异性和相应方法专属性。结果建立了家兔免疫血清制备方法,制备的3份（1、2、3）免疫血清相应多糖抗体效价分别为1︰8、1︰8和1︰16。自制免疫血清1、3在使用工作浓度下,符合免疫学质量控制ELISA方法的特异性和专属性要求。自制免疫血清3可作为C群脑膜炎球菌结合物Western blot检测的Anti-PS血清,在该检测灵敏度下可完全达到与破伤风类毒素（TT）无交叉反应;血清1、2的轻微交叉反应可通过相应抗原预吸收血清消除,从而达到结合物Western blot检测的Anti-PS使用要求。自制3份免疫血清均可用于火箭免疫电泳分析。结论自制的家兔免疫血清可替代商品诊断血清,并达到了ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法群特异性和相应方法专属性要求,可用于对C群脑膜炎球菌结合物制备过程的多糖抗原性分析及结合疫苗质量控制。; 刘方蕾吴兵侯亚莉杨英英王晶于旭博范锋锋孔素娟袁菲赵志强谢贵林; 关键词：脑膜炎球菌免疫血清特异性专属性

离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量: 2016年; 目的：利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法（ HPAEC-PAD）,测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸（ TFA）水解为特异性单糖（葡萄糖、半乳糖）,并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chrome-leon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L（终浓度）、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10-60.00μg/mL 范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系, r 均大于0.99,回收率为87.94%-109.80%,相对标准偏差（RSD）为1.00%-2.00%,检出限为0.05μg/mL（信噪比3∶1）,定量限为0.10μg /mL（信噪比10∶1）。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。; 王晶于旭博赵阳孔素娟刘爱萍袁菲吴兵谭小梅谢贵林; 关键词：多糖含量

间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素被引量：2: 2016年; 目的探讨间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素,保证试验结果的一致性和准确性。方法按照《中国药典》2015版(三部)规定的唾液酸含量测定方法,分析单糖和二糖、载体蛋白质、不同溶液及化学试剂对该方法测定结果的影响;比较加热时间、加入有机相后的放置时间对检测结果的影响。结果选用的不同单糖和二糖中,蔗糖对试验的影响最大,低中高浓度时吸光值分别为0.065、0.196、0.420;其次是核糖,3种浓度的吸光值分别为0.037、0.113、0.187;高浓度的半乳糖、葡萄糖和乳糖的吸光值在0.02左右,对试验结果有一定影响,低浓度时对试验的影响可以忽略不计。N-乙酰甘露糖胺在低中高浓度时对结果均无影响。破伤风类毒素、重组绿脓杆菌外毒素A、小牛血清白蛋白、白喉类毒素对检测结果无影响,在500μg/m L质量浓度时吸光值均在0.008以下。选用的不同溶液对试验均无影响。选用的化学试剂中乙醇、低浓度的碳二亚胺以及己二酰肼对试验结果均无干扰,丙酮和脱氧胆酸钠均会对试验造成较大影响。反应液的吸光值随着加热时间的延长而增加,吸光值随着放置时间的延长而降低;第一小时内吸光值下降9%左右。结论在质控过程中,这些外源物质及操作过程对唾液酸含量测定结果有一定影响,应严格按照质量控制标准执行操作。; 孔素娟于旭博袁菲王晶刘爱萍李阿妮吴兵谢贵林; 关键词：唾液酸分光光度法影响因素

CDAP活化制备C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性试验被引量：6: 2015年; 目的：评价以1－氰基－4－二甲氨基－吡啶四氟硼酸（ CDAP ）活化制备的C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性。方法以变通的现有工艺为基础，选取C群脑膜炎球菌结合疫苗原液连续3批样品，分别放置于（37＆#177;2）℃、（25＆#177;2）℃，和2～8℃三种温度下，根据稳定性试验原则定期取样并进行主要指标的检测，评估原液的稳定性。结果 C群脑膜炎球菌结合疫苗原液于2～8℃保存18个月，（25＆#177;2）℃保存20周，37℃保存7天，各项检测指标均符合质量标准的要求。结论在2～8℃之下，施行变通的工艺， C群脑膜炎球菌结合疫苗原液可稳定存放18个月。; 萧在澜徐永浩刘佳孔素娟刘爱萍王媛冯琪瑢刘方蕾吴兵于旭博袁菲谢贵林; 关键词：C群脑膜炎球菌结合疫苗

C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物制备方法的比较被引量：4: 2015年; 目的对C群脑膜炎球菌多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)蛋白结合物的5种制备方法进行比较。方法以GCMP作为多糖抗原,破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和重组绿脓杆菌外毒素A(recombinant exoprotein A from Pseudomonas aeruginosa,r EPA)作为载体蛋白,采用5种结合路线制备7种结合物,并对其生化指标、免疫原性及磷酸铝佐剂的免疫增强效果进行检测。结果不同的结合方法均可将不同载体蛋白与多糖有效结合,在小鼠体内均具有良好的免疫原性。7种结合物的分子大小分布、游离多糖含量、多糖/蛋白值、回收率及免疫原性等指标有较大差异;采用相同结合方法,以TT和r EPA作为载体蛋白制备的结合物的生化指标及免疫原性无差异;磷酸铝佐剂可显著提高结合物的免疫原性。结论在选择GCMP蛋白结合物制备方法时应综合考虑原料多糖的化学结构、载体蛋白类型、结合路线、结合物纯化方法、质量控制方法和剂型等因素。本实验为GCMP蛋白结合物制备路线的选择提供了实验依据。; 于旭博孔素娟袁菲王晶罗树权王欣茹李阿妮方红春赵志强谢贵林; 关键词：破伤风类毒素免疫原性

人血清中Hib荚膜多糖抗体定量的ELISA方法建立及初步验证: 2012年; 目的比较两种不同活化方法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-Ty)的特性,分别作为包被抗原建立测定人血清中Hib荚膜多糖特异抗体含量的ELISA方法。比较并确定包被抗原,对建立的ELISA方法进行初步验证。方法分别用CNBr和CDAP作为活化剂制备PRP-Ty,经Sepharose CL-4B层析分析相对分子质量分布范围,并确定适宜PRP-Ty抗原包被浓度的间接ELISA方法,以人Hib荚膜多糖IgG抗体定量标准品作为阳性标准,通过四参数非线性拟合计算人血清Hib荚膜多糖IgG抗体含量。结果 CNBr活化法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-TyCNBr)较天然Hib荚膜多糖相对分子质量向小相对分子质量方向偏移,而CDAP活化法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-TyC DAP)较天然Hib荚膜多糖相对分子质量分布无显著变化;两种PRP-Ty在0.65～2.00μg/mL的包被浓度范围内均有良好的包被活性,方法的灵敏度均达到0.02μg/mL IgG抗体检测水平。结论 PRP-TyC DAP作为包被物的ELISA测定方法可以更加真实可靠地反映人血清IgG抗体水平。; 侯亚莉袁菲周晖国任静胡浩刘方蕾吴兵谢贵林赵志强; 关键词：酪胺 ELISA

W135群脑膜炎球菌结合物的制备及其在小鼠体内的免疫原性被引量：2: 2016年; 目的比较不同活化试剂、不同载体蛋白质及不同免疫程序对W135群脑膜炎球菌结合物在小鼠体内的免疫原性的影响。方法分别采用溴化氰(CNBr)和1-氰基-4-二甲基氨基吡啶-四氟硼酸盐(CDAP)为活化试剂,以己二酸二酰肼(ADH)为连接臂制备W135群脑膜炎球菌多糖(group W135 meningococcal polysaccharide,PSW135)衍生物;以碳二亚胺(EDAC)作为缩合剂,将多糖衍生物分别与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)3种蛋白质共价结合,制备6种PSW135蛋白质结合物;比较4针免疫程序(0、2、4、8周)和3针免疫程序(0、4、8周)对结合物在小鼠体内免疫原性的影响。结果两种活化试剂均能对多糖进行有效活化,且不会破坏多糖的抗原性;制备的6种结合物在小鼠体内均能产生良好的免疫原性,且具有显著的剂次加强效应;采用间隔2周的3针免疫程序和2.5μg/只的免疫剂量,不同类型的活化试剂和载体蛋白质对结合物的免疫原性无显著影响,但以DT为载体蛋白质的结合物的免疫加强效应要弱于以TT和r EPA为载体的结合物;延长免疫间隔时间可显著提高结合物在小鼠体内的免疫原性。结论初步建立了适用于W135群脑膜炎球菌结合疫苗的结合工艺,并为结合物在小鼠体内的免疫原性研究提供了一种新的候选免疫程序。; 王晶张海红孔素娟袁菲李阿妮刘爱萍刘芳蕾吴兵谢贵林; 关键词：免疫程序

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物的制备及其工艺稳定性研究: 目的:按初步确定的工艺,制备多批A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)与破伤风类毒素(TT)的结合物并检测其免疫原性,通过监测关键工艺参数,对该工艺的稳定性进行研究。方法:采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二...; 刘方蕾吴兵王晶袁菲赵志强杨明谢贵林; 关键词：A群脑膜炎球菌结合疫苗荚膜多糖; 文献传递

脑膜炎球菌结合疫苗制备过程中各阶段产物的细菌内毒素含量分析被引量：2: 2014年; 目的:以细菌内毒素检查法(动态浊度法)对脑膜炎球菌结合疫苗生产过程中各阶段产物进行细菌内毒素含量分析,观察疫苗生产过程细菌内毒素来源及其变化,为今后疫苗生产过程中细菌内毒素质量控制提供依据。方法:在对供试品处理和方法的标准化的基础上,以《中华人民共和国药典》2010年版三部所录动态浊度法对疫苗不同生产阶段的过程产物和疫苗成品进行全面监控。结果:影响脑膜炎球菌结合疫苗细菌内毒素含量的主要来源为原料多糖和载体蛋白质,疫苗制备过程可以很好控制细菌内毒素含量。结论:疫苗生产过程可以有效控制疫苗的细菌内毒素含量,降低疫苗中的细菌内毒素含量可从原料着手,对多糖和载体蛋白质纯化工艺改进,进而控制疫苗的细菌内毒素含量至更低水平以提高疫苗的安全性。; 吴兵于旭博刘方蕾孔素娟袁菲范锋锋李燕婷宣俊文赵庆萱吕存女谢贵林赵志强; 关键词：脑膜炎球菌结合疫苗

C、Y、W 135群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构核磁共振检测方法的建立被引量：5: 2015年; 目的建立基于核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术检测C群脑膜炎球菌荚膜多糖(group C meningococcal capsular polysaccharide,GCMP)、Y群脑膜炎球菌荚膜多糖(GYMP)和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(GWMP)化学结构的方法。方法建立1H-NMR检测方法:使用布鲁克600 MHz超导傅里叶核磁共振谱仪,配置5 mm BBO正向宽带高分辨液体探头。脉冲程序为水峰压制(zgpr),温度为298 K(25℃)。具体参数设置如下:中心频率约为4.7 ppm;图谱宽度为7 211 Hz;采样时间为2.272 s;弛豫延迟时间为2 s;扫描次数为512次;信号经傅里叶转换后加入1.0 Hz的窗口函数,检测结果使用Topspin 3.0软件进行处理。验证该方法的专属性、重复性及中间精密性。结果 5批GCMP、GYMP和GWMP检测结果的CV值均小于0.35%;3个浓度GCMP、GYMP和GWMP在相同的操作条件下以及不同工作日间、不同实验员间的检测结果的CV值均小于0.35%。结论建立的1H-NMR检测方法简便、快速、准确,检测GCMP、GYMP和GWMP具有极高的专属性、重复性和中间精密性,适用于疫苗生产研究中GCMP、GYMP和GWMP样品的定性结构鉴定。; 李阿妮于旭博罗树权胡浩孔素娟袁菲杨英英刘方蕾吴兵陈作江赵志强谢贵林; 关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖核磁共振

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

袁菲

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

袁菲

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈