赵巧莲
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅重大专项基金浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金浙江省科技厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素P30基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2009年
- 目的克隆隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素P30基因并测序,对其进行生物信息学分析。方法采用聚合酶链(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增P30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并对获得的P30基因进行生物信息学分析。结果PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫P30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%～100%和99%～100%。结论成功克隆出序列正确的微小隐孢子虫P30基因,预测的P30蛋白具有9个潜在的抗原表位,为其相关研究奠定了基础。
- 赵巧莲黄慧聪潘长旺梁韶晖南存标
- 关键词：隐孢子虫P30基因生物信息学分析
- 一种新的广州管圆线虫候选诊断抗原基因的克隆、表达及初步鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的克隆广州管圆线虫Ⅴ期幼虫候选免疫诊断抗原基因,进行体外表达及免疫学鉴定。方法根据本室构建的广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库的免疫筛选结果 ,选择文库中表达具有免疫反应性Ac11蛋白基因,进行生物信息学(在线Blast)分析,PCR扩增后克隆入pET28a(+)载体中,进行诱导表达及免疫学鉴定。结果推断Ac11基因为亚硫酸盐氧化酶基因。构建的重组质粒pET28a(+)-Ac11经IPTG透导,表达以包涵体形式存在的重组融合蛋白,分子质量单位约为30 kd。Western blot显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性。结论制备了具有良好免疫反应性的广州管圆线虫Ⅴ期幼虫亚硫酸盐氧化酶重组融合蛋白,为广州管圆线虫病的免疫诊断研究奠定了基础。
- 王寒刘文权赵巧莲谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：广州管圆线虫克隆纯化免疫印迹
- 隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30原核表达系统的构建及鉴定
- 2010年
- 目的获取隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30基因,并构建原核表达系统,获得相应的重组蛋白。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增出p30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并进行生物信息学分析及预测。再将亚克隆与表达载体PET-28a(+)分别酶切并连接,经IPTG诱导表达,表达产物用Ni-NTA亲和层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting检测表达效果。结果PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%～100%和99%～100%,理论等电点和分子量分别为6.4854和31842Da,并存在9个潜在的抗原表位。经酶切、测序结果表明质粒已导入Rosetta。SDS-PAGE和Western blotting证实重组菌成功表达融合蛋白。结论成功构建微小隐孢子虫Gal/Gal NAc特异性凝集素p30原核表达系统。
- 黄慧聪赵巧莲谭峰潘长旺
- 关键词：隐孢子虫P30基因原核表达
- 广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库的构建及免疫学筛选被引量：3
- 2010年
- 目的构建广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选抗原基因。方法提取广州管圆线虫Ⅴ期幼虫总RNA,用Clontech公司的SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建未扩增文库,检测未扩增文库滴度和重组率后,进行文库扩增。用大鼠感染血清作免疫探针筛选文库,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列,预测其理化性质。结果成功构建了广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选获得11个阳性克隆,对测序的9个阳性克隆进行初步分析,1个与广州管圆线虫Ⅴ期幼虫的1个EST同源性为99%,6个(有2个为同一克隆)与秀丽隐杆线虫和新杆状线虫均有不同程度的同源性,最高达91%。共有7个阳性克隆存在完整的开放阅读框。结论从广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库中初步筛选出7个有诊断意义的抗原基因,为其相关研究奠定了基础。
- 赵巧莲马雪莲王寒谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：广州管圆线虫CDNA文库免疫学筛选
