陈智飞
- 作品数：10 被引量：14H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：吉林省重大科技攻关项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 双特异性溶瘤腺病毒ATV对肺癌的抑制作用研究
- 引言近年来,肺癌的发病率和死亡率在全球范围内呈明显上升的趋势,已经成为全球死亡率居首的恶性肿瘤。目前,传统的肺癌治疗方法,以手术、放疗和化疗等为主,但放化疗不仅杀伤癌细胞,同时也对正常细胞产生毒性作用。随着分子生物学、细...
- 范园园陈爽李一权陈智飞李文杰胡宁宁李霄金宁一
- 天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定被引量：7
- 2014年
- 本研究旨在通过敲除部分与天坛株痘苗病毒(vaccinia virus Tiantan strain,VTT)毒力和宿主范围等相关的复制非必需基因,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术,构建多基因缺失VTT弱毒株。人工合成7对重组臂,结合痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP),构建穿梭载体质粒pTC-EGFP、pTA35-EGFP、pTA66-EGFP、pTE-EGFP、pTB-EGFP、pTI-EGFP和pTJ-EGFP。将上述质粒依次与VTT或基因缺失VTT共转/感染BHK细胞,并通过同源重组和荧光蚀斑筛选方法,逐一敲除拟缺失基因片段(TC:TC7L^TK2L;TA35:TA35L;TA66:TA66R;TE:TE3L;TB:TB13R^TB14R;TI:TI4L;TJ:TJ2R)。利用Cre/Loxp系统实现对外源筛选标记的敲除,最终获得天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株TTVAC7,并运用PCR方法对TTVAC7进行鉴定和遗传稳定性检测。结果表明,本研究成功构建了缺失7个目的片段的天坛株痘苗病毒弱毒株TTVAC7,且该弱毒株具有良好的遗传稳定性。
- 盛媛王浩然胡宁宁陈智飞王宏宇姜爽周晔李一权李霄金宁一
- 关键词：基因缺失同源重组增强型绿色荧光蛋白
- 溶瘤腺病毒ATV联合顺铂协同抑制A 549细胞的研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨双特异性溶瘤腺病毒ATV与化疗药物顺铂联用对人肺癌细胞A 549治疗的增效减毒作用。方法将构建的溶瘤腺病毒ATV感染A 549细胞后进行Annexin V检测,分析ATV对肿瘤细胞的抑制方式;单用ATV、顺铂以及两者联合作用于人肺癌A 549细胞,采用MTS法检测细胞体外增殖情况,采用划痕试验、Transwell迁移试验和Transwell侵袭试验检测细胞的迁移侵袭情况;构建A 549皮下移植瘤裸鼠模型,单独注射重组腺病毒、顺铂以及重组腺病毒和顺铂联合使用,观察监测肿瘤生长情况,评价溶瘤腺病毒联合顺铂对肿瘤的体内抑制作用。结果双特异性重组腺病毒ATV主要通过诱导A 549细胞凋亡达到对细胞的杀伤;ATV联合顺铂体外杀伤A 549细胞具有一定的剂效和时效关系,且其抑制作用显著强于ATV及顺铂单独使用;ATV联合顺铂作用下,可使A 549细胞迁移侵袭能力降低,且能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长,延长模型小鼠生存期。结论 ATV可诱导肿瘤细胞凋亡,ATV与化疗药物顺铂联用可增强对A549细胞生长及迁移侵袭能力的抑制作用,即具有抑制肺癌细胞A 549的增效减毒作用。
- 李文杰陈智飞郭丽娇李霄姜爽李一权陈爽李敏崔传信范园园艾迪郭焱金宁一
- 关键词：溶瘤腺病毒顺铂增效减毒
- 重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究
- 研究背景:痘苗病毒(Vaccina virus,VACV)属痘病毒科(Poxviridae)正痘病毒属(Orthopoxvirus),为双链DNA病毒,其核心结构外包裹有脂质囊膜,膜上分布有管状和球状的包膜蛋白,其核心结...
- 肖朋朋刘昊阎富龙陈智飞朱羿龙辛舒王茂鹏靖杰鲁会军金宁一
- 文献传递
- 重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究被引量：3
- 2014年
- 目的痘苗病毒作为疫苗载体具有接种途径简单、高滴度、低成本等优点,重组痘苗病毒投入使用之前进行理化特性试验,对重组痘苗病毒的生产、运输和保存有一定重要意义。方法将重组痘苗病毒rVTT-JEVE作热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声波以及紫外线处理,然后接种到BHK-21细胞上,观察rVTT-JEVE毒价的变化,分析理化因素对rVTT-JEVE的影响。结果在pH3～9范围内,酸碱度变化不会引起rVTT-JEVE毒价的显著变化。rVTT-JEVE经50℃处理60min、30min和60℃处理15min可被灭活；对5%的氯仿敏感；经终浓度0.5%的胰蛋白酶37℃作用1h,病毒毒价降低2个滴度；对25%的乙醚不敏感；经40KHz超声波处理60min和80KHz处理30min即可灭活；30W紫外灯垂直距离10cm照射15min、30cm照射30min即可灭活。结论 rVTT-JEVE耐热、酸、碱、乙醚、氯仿及胰蛋白酶,对超声波、紫外线较敏感。
- 肖朋朋刘昊阎富龙陈智飞朱羿龙辛舒王茂鹏靖杰鲁会军金宁一
- 携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。
- 陈智飞李一权胡宁宁兰添周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：溶瘤腺病毒凋亡素基因结直肠癌
- 溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A对肺癌细胞抑制作用研究
- 近些年来，肺癌的发病率在全球范围内呈持续上升的趋势，甚至已经成为第一高发恶性肿瘤。面对传统肺癌的治疗方法，手术、放疗和化疗，已经不能有效的控制全球肺癌蔓延的趋势。随着分子生物学、细胞生物学和病毒学的发展，基因治疗已成为癌...
- 陈智飞
- 关键词：溶瘤腺病毒凋亡素基因
- 文献传递
- 重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究
- 研究背景:痘苗病毒(Vaccina virus,VACV)属痘病毒科(Poxviridae)正痘病毒属(Orthopoxvirus),为双链DNA病毒,其核心结构外包裹有脂质囊膜,膜上分布有管状和球状的包膜蛋白,其核心结...
- 肖朋朋刘昊阎富龙陈智飞朱羿龙辛舒王茂鹏靖杰鲁会军金宁一
- 缺失TC7L-TK2L基因减毒天坛株痘苗病毒构建及筛选被引量：1
- 2014年
- 目的通过敲除天坛株痘苗病毒(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)的复制非必需基因TC7L-TK2L,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术构建TC7L-TK2L基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TC7L--TK2L-。方法人工合成含有痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的重组臂,构建穿梭质粒pTC7L-TK2L-EGFP,再与VTT共转染BHK-21细胞,通过连续筛选10次,获得含有筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L--EGFP+;利用Cre/loxp系统敲除EGFP,连续筛选10次,获得无筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,用PCR方法对rVTT-TC7L--TK2L-进行鉴定和遗传稳定性检测,用电镜观察病毒形态变化,并通过绘制生长曲线观察病毒在细胞内的复制情况。结果 PCR结果表明,成功构建了重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,且具有良好的遗传稳定性;电镜观察痘苗病毒缺失TC7L-TK2L基因未影响病毒形态;生长曲线显示敲除TC7L-TK2L基因后病毒毒力显著下降,但不影响病毒的正常复制。结论成功构建了痘苗病毒减毒株rVTT-TC7L--TK2L-,该重组痘苗具有良好的遗传稳定性且毒力减弱。
- 李一权阚式绂胡宁宁姜爽陈智飞周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：病毒载体同源重组
- 缺失TA35R基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选
- 2014年
- 通过敲除痘苗病毒天坛株(vaccinia virus tiantan strain,VTT)复制非必需基因TA35R,结合双筛选标记及同源重组技术,构建TA35R基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TA35R-。人工合成含有TA35R重组臂、同向loxp序列、早晚期启动子PE/L、EGFP及酶切位点的穿梭质粒pTA35R-EGFP。pTA35R-EGFP和野生型VTT共转染BHK-21细胞,通过绿色荧光蚀斑筛选,构建缺失TA35R基因且含FGFP基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R--EGFP+。采用Cre/Loxp系统敲除外源筛选标记EGFP,获得缺失TA35R基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R-,利用PCR方法和电子显微镜对其进行鉴定,通过MTT法检测细胞噬性以评价其减毒效果。结果表明,所构建的痘苗病毒弱毒株rVTT-TA35R-完全缺失了TA35R基因和外源筛选标记EGFP,且细胞毒性减弱。
- 姜爽阚式绂胡宁宁陈智飞李一权周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：同源重组病毒载体
