周晔
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划吉林省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的体内外抑制研究
- 研究背景:结直肠癌严重威胁人类健康,其发病率和死亡率分别位居全球第三位和第四位。以手术、化疗和放疗为主的传统治疗方法不仅杀伤癌细胞,同时也损伤正常细胞。靶向性和有效性成为肿瘤治疗过程中亟待解决的问题。目前,基因治疗逐渐受...
- 陈智飞李一权孙丽丽胡宁宁周晔李霄金宁一
- 关键词：溶瘤腺病毒APOPTINSW1116
- 文献传递
- 缺失TC7L-TK2L基因减毒天坛株痘苗病毒构建及筛选被引量：1
- 2014年
- 目的通过敲除天坛株痘苗病毒(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)的复制非必需基因TC7L-TK2L,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术构建TC7L-TK2L基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TC7L--TK2L-。方法人工合成含有痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的重组臂,构建穿梭质粒pTC7L-TK2L-EGFP,再与VTT共转染BHK-21细胞,通过连续筛选10次,获得含有筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L--EGFP+;利用Cre/loxp系统敲除EGFP,连续筛选10次,获得无筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,用PCR方法对rVTT-TC7L--TK2L-进行鉴定和遗传稳定性检测,用电镜观察病毒形态变化,并通过绘制生长曲线观察病毒在细胞内的复制情况。结果 PCR结果表明,成功构建了重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,且具有良好的遗传稳定性;电镜观察痘苗病毒缺失TC7L-TK2L基因未影响病毒形态;生长曲线显示敲除TC7L-TK2L基因后病毒毒力显著下降,但不影响病毒的正常复制。结论成功构建了痘苗病毒减毒株rVTT-TC7L--TK2L-,该重组痘苗具有良好的遗传稳定性且毒力减弱。
- 李一权阚式绂胡宁宁姜爽陈智飞周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：病毒载体同源重组
- 天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定被引量：7
- 2014年
- 本研究旨在通过敲除部分与天坛株痘苗病毒(vaccinia virus Tiantan strain,VTT)毒力和宿主范围等相关的复制非必需基因,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术,构建多基因缺失VTT弱毒株。人工合成7对重组臂,结合痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP),构建穿梭载体质粒pTC-EGFP、pTA35-EGFP、pTA66-EGFP、pTE-EGFP、pTB-EGFP、pTI-EGFP和pTJ-EGFP。将上述质粒依次与VTT或基因缺失VTT共转/感染BHK细胞,并通过同源重组和荧光蚀斑筛选方法,逐一敲除拟缺失基因片段(TC:TC7L^TK2L;TA35:TA35L;TA66:TA66R;TE:TE3L;TB:TB13R^TB14R;TI:TI4L;TJ:TJ2R)。利用Cre/Loxp系统实现对外源筛选标记的敲除,最终获得天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株TTVAC7,并运用PCR方法对TTVAC7进行鉴定和遗传稳定性检测。结果表明,本研究成功构建了缺失7个目的片段的天坛株痘苗病毒弱毒株TTVAC7,且该弱毒株具有良好的遗传稳定性。
- 盛媛王浩然胡宁宁陈智飞王宏宇姜爽周晔李一权李霄金宁一
- 关键词：基因缺失同源重组增强型绿色荧光蛋白
- 携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。
- 陈智飞李一权胡宁宁兰添周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：溶瘤腺病毒凋亡素基因结直肠癌
- 重组腺病毒Ad-HP对胃癌的抑制作用
- 2016年
- 目的:探讨表达HN蛋白的重组腺病毒Ad-HP在体内外对人胃癌细胞的抑制作用。方法:通过MTS法检测Ad-HP(Ad-HN-PEG3p-E1a)对SGC7901细胞的增殖抑制效果,采用Annexin V染色、Caspase酶活性检测、Western blot免疫印迹检测揭示Ad-HP对SGC7901细胞的抑制方式和途径。对BALB/c裸鼠进行瘤内注射Ad-HP探究其在体内的抗肿瘤作用。结果:体外实验中Ad-HP明显抑制SGC7901细胞增殖,并表现出时间效应和剂量效应关系。Ad-HP能提高Caspase酶活性,并释放细胞色素C。体内实验中Ad-HP能显著延缓瘤体生长并延长模型动物的平均生存期,而且能上调IL-2和IFN-γ等细胞因子,使免疫反应朝向Th1优势。结论:Ad-HP可特异性有效抑制胃癌细胞增殖和肿瘤生长。
- 赵津李奚李一权周晔陈爽兰添范园园李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：人胃癌细胞溶瘤腺病毒新城疫
- 缺失TA35R基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选
- 2014年
- 通过敲除痘苗病毒天坛株(vaccinia virus tiantan strain,VTT)复制非必需基因TA35R,结合双筛选标记及同源重组技术,构建TA35R基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TA35R-。人工合成含有TA35R重组臂、同向loxp序列、早晚期启动子PE/L、EGFP及酶切位点的穿梭质粒pTA35R-EGFP。pTA35R-EGFP和野生型VTT共转染BHK-21细胞,通过绿色荧光蚀斑筛选,构建缺失TA35R基因且含FGFP基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R--EGFP+。采用Cre/Loxp系统敲除外源筛选标记EGFP,获得缺失TA35R基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R-,利用PCR方法和电子显微镜对其进行鉴定,通过MTT法检测细胞噬性以评价其减毒效果。结果表明,所构建的痘苗病毒弱毒株rVTT-TA35R-完全缺失了TA35R基因和外源筛选标记EGFP,且细胞毒性减弱。
- 姜爽阚式绂胡宁宁陈智飞李一权周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：同源重组病毒载体
