骆敏儿
- 作品数：7 被引量：20H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广州市天河区科技计划项目国家级大学生创新创业训练计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种玉米赤霉烯酮抗独特型抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种玉米赤霉烯酮抗独特型抗体及其制备方法和应用。该玉米赤霉烯酮抗独特型抗体是β型抗独特型抗体，与玉米赤霉烯酮存在“内影像”关系，是由杂交瘤细胞株1D5分泌得到的。其制备方法是用ZEN单克隆抗体为免疫原，免疫小...
- 王宏于涛邓宁唐勇向军俭宋其芳贾彦琼骆敏儿
- 玉米赤霉烯酮抗独特型单抗的制备及特异性分析被引量：2
- 2013年
- 目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)抗独特型单抗Ab2β-1D5。方法将ZEN单抗1G4与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合后,以ZEN单抗Fab片段作为包被抗原,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,制备腹水型单抗,并经Protein G亲和层析柱进行纯化。间接ELISA法检测ZEN抗独特型单抗的抗体效价及特异性;间接竞争ELISA法检测ZEN抗独特型单抗类型、灵敏度及其与ZEN毒素间的相关性。结果共获得6株稳定分泌ZEN抗独特型单抗的杂交瘤细胞株,腹水型抗体效价为1∶1.2×105～1∶2.0×105;6株单抗均为β型抗独特型抗体(Ab2β),其中Ab2β-1D5抗体灵敏度最高,对ZEN的IC50值达10.09 ng/ml,其与ZEN毒素呈线性相关(r=0.990);ZEN抗独特型单抗与莱克多巴胺、重金属铅、铬及虾过敏原单抗均无交叉反应,特异性良好。结论已成功制备玉米赤霉烯酮抗独特型单抗,该抗体与ZEN间存在"内影像"关系,可以替代ZEN毒素标准品,用于建立ZEN的无毒免疫学检测技术。
- 贾彦琼黄建芳向军俭邓宁唐勇骆敏儿王宏
- 关键词：单克隆抗体抗独特型抗体
- 玉米赤霉烯酮一步无毒竞争检测方法的初步建立及其噬菌体结合肽的筛选
- 目的:利用玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)单抗及其抗独特型单抗,建立一步无毒免疫学检测技术;利用噬菌体随机环七肽库淘选出与ZEN单抗1G4不同识别位点的ZEN结合肽,初步验证其用于建立夹心ELISA法的可行...
- 骆敏儿
- 关键词：玉米赤霉烯酮可行性
- 文献传递
- 一种玉米赤霉烯酮抗独特型抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种玉米赤霉烯酮抗独特型抗体及其制备方法和应用。该玉米赤霉烯酮抗独特型抗体是β型抗独特型抗体，与玉米赤霉烯酮存在“内影像”关系，是由杂交瘤细胞株1D5分泌得到的。其制备方法是用ZEN单克隆抗体为免疫原，免疫小...
- 王宏于涛邓宁唐勇向军俭宋其芳贾彦琼骆敏儿
- 文献传递
- 玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析法的建立被引量：15
- 2013年
- 目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法。方法采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb。ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等。ZEN mAb-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,检测原ZEN-BSA和山羊抗小鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),建立ZEN的胶体金免疫层析检测法。结果经紫外分光光度法和SDS-PAGE鉴定,ZEN人工抗原合成成功。经3次克隆化后,筛选出1株能稳定分泌ZEN mAb的杂交瘤细胞株1G4,腹水效价为1∶1.6×105;抗体亚类为IgG2b;对ZEN的IC50为10.2 ng/mL,检测限为0.58 ng/mL。mAb对ZEN具有高度的特异性,除与β-玉米赤霉烯醇的交叉反应率为12.8%外,与其他ZEN代谢物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A等几乎无交叉反应。制备的胶体金免疫层析试纸条在5 min内即可肉眼观察到结果,对ZEN的最低检测限为100 ng/mL。结论成功制备出1株ZEN mAb,并初步建立了其胶体金免疫层析检测方法,最低检测限为100 ng/mL。
- 骆敏儿唐勇向军俭张晓丽付强强王宏
- 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金免疫层析法
- 基于独特型-抗独特型初步建立玉米赤霉烯酮无毒ELISA定量检测技术被引量：3
- 2013年
- 目的:初步建立以玉米赤霉烯酮(ZEN)抗独特型单抗替代玉米赤霉烯酮标准品,检测ZEN残留的无毒ELISA定量检测技术。方法:以ZEN-BSA为包被原,ZEN单抗(1G4)为反应抗体,分别以不同浓度的ZEN毒素或ZEN抗独特型单抗1D5(Ab2β-1D5)为竞争物,建立竞争抑制曲线。根据抑制率在20%~80%间,在相同抑制率条件下,ZEN与1D5间浓度对应关系,绘制替代标准曲线及对应的浓度转换方程。以ZEN类似毒素代替ZEN作为竞争抗原,检验方法的特异性;板内、板间试验检验方法的精密度。结果:初步建立了ZEN无毒ELISA定量检测技术,1D5与ZEN毒素之间的替代标准曲线方程为:y=1.2846x1.9310(y为ZEN毒素浓度ng/ml,x为抗独特型抗体浓度(μg/ml)。检出限(IC2 0)为1.041 ng/ml,检测范围为1.041~25.99 ng/ml。方法的批内平均变异系数为3.88%,批间平均变异系数为4.96%。方法特异性好,与ZEN类似毒素几乎无交叉反应。结论:利用ZEN单抗和ZEN抗独特型单抗初步建立了ZEN的无毒ELISA定量检测方法。
- 宋其芳向军俭骆敏儿钟娜黄婉君贾彦琼王宏
- 关键词：玉米赤霉烯酮
- 基于独特型-抗独特型玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2014年
- 目的建立基于独特型．抗独特型玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）间接竞争ELISA检测方法，并进行验证。方法采用ProteinG亲和层析法纯化ZEN的p型抗独特型单抗1D5（Ab213-1D5）腹水；以ZEN单抗Fab片段包被酶标板，Ab2β-1D5为一抗，建立ZEN的竞争ELISA检测方法，绘制标准抑制曲线，根据回归方程计算半数抑制浓度（IC50），并确定检出限（IC10）及线性范围。以ZEN类似物呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A代替ZEN作为竞争抗原，用建立的方法进行检测，验证方法的特异性；配制6个浓度的ZEN溶液（20、30、40、50、60和75ng／m1），用建立的方法进行检测，计算试验内及试验间回收率和变异系数（CV），验证方法的准确性和精密性。结果Ab2β-1D5单抗的纯化效果较好，浓度为4mg／ml，效价为1：6×104；ZEN单抗Fab片段的最佳包被浓度为1μg／ml。建立的ZEN竞争EHSA检测方法的线性回归方程为：y=-34．099x＋81．857，R2=0．9944，IC50为8．60ng／ml，IC10为0．58ng／ml，线性范围为0．58-128．03ng／ml；该方法检测ZEN类似物伏马毒素、赭曲霉素A和呕吐毒素的交叉反应率均小于0．01％；检测不同浓度ZEN的试验内平均回收率在98．65％-113．45％之间，试验间平均回收率在82．96％-98．00％之间；试验内cy值在0．48％。6．40％之间，试验间cy值在0．94％-8．27％之间。结论应用ZEN单抗的Fab片段和ZEN的B型抗独特型单抗建立了ZEN的间接竞争ELISA检测方法，该方法特异性较强，准确性和精密性良好，且成本较低，快速简便，易于标准化，适用于样品的大量筛选。
- 黄婉君骆敏儿钟娜贾彦琼向军俭王宏
- 关键词：玉米赤霉烯酮FAB片段
