余志华
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院重点实验室基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 氨基酸消旋酶菌株的选育
- 余志华张英姿
- 文献传递
- 基因工程菌酶促转化生产L-色氨酸(中试)
- 余志华丁久元王宇张英姿门大鹏陈琦姚绍斌汪大顺蔡诗贵王昭君高才元李耀清刘相辽杜祖国
- L-色氨酸是人和动物的必需氨基酸之一，广泛应用于医药、食品和饲料的添加，需求量极大。我国至今尚未工业化大生产，全部依赖进口。为了满足国内外市场需求，加速氨基酸国产化进程，该项目进行研究，利用重组DNA技术构建了带有稳定因...
- 关键词：
- 关键词：基因工程菌L-色氨酸中试
- 带有sop基因稳定表达载体的构建
- 1996年
- F质粒的第五个EcoRⅠ片段mini-F具有质粒的分配功能。其EcoRⅠ-BamHⅠ片段含有oriS、ccd、repD和sop基因(sopA,B和C)。该片段与pBR322重组,得到质粒pDMC32。pDMC32经SmaⅠ酶切,T4连接酶连接,得到衍生质粒pDMC311,消除了oriS、ccd和repD片段。MI32(pDMC32)和MI311(pDMC311),在液体限磷基础培养基中培养100代,质粒保持率分别为93％和100％。而对照MIR322(pBR322)培养55代时,质粒保持率仅为10％。带有色氨酸启动子质粒pDR720与pBR322重组,得到质粒pDMC40。pDMC40再与mini-F的sop基因重组,得到带有sop基因的稳定表达质粒pDMC48。MI48(pDMC48)在液体限磷基础培养基中培养100代,质粒保持率为100％。
- 杜笑寒丁久元吴夏英余志华门大鹏
- 关键词：基因载体
- L-色氨酸工程菌的构建与发酵
- 余志华丁久元等
- 该工作采用重组DNA技术，成功地构建了带有sop基因的稳定表达载体，进而构建了能够高效表达色氨酸合成酶的色氨酸基因工程菌E.Coli.MIA50E.coli.MIA51和EcoliMIA60，结合酶促转化条件的优化，实现...
- 关键词：
- 关键词：L-色氨酸基因工程菌氨基酸发酵左旋化合物色氨酸
- 钝齿棒杆菌天冬氨酸激酶基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2002年
- 运用PCR方法 ,从野生型钝齿棒杆菌株 (Corynebacteriumcrenatum)AS1 5 4 2及具有AEC抗性的突变株CD945染色体上分别扩增出天冬氨酸激酶 (AK)基因 (ask) ,构建了重组质粒。核苷酸序列分析表明 ,C .crenatumAS1 5 4 2AK基因与C .crenatumCD945相比 ,第 1 1 99位的碱基由T变为C ,引起酶蛋白β亚基第 80位氨基酸从亮氨酸变成脯氨酸。该氨基酸的突变在蛋白结构上位于ACT结构域内 ,该区受赖氨酸调控。C .crenatumAS1 5 4 2的AK基因的编码区核苷酸序列与C .glutamicum、C .flavum及B .lactofermentum相比 ,同源性分别为 97 2 3 %、97 5 5 %和 97 6 2 % ,酶蛋白氨基酸序列的同源性分别为 99 76 %、99 5 2 %和 99 76 %。但在AK基因的启动子上游序列部分与其它棒杆菌相比有较大差异。
- 刘阳剑张英姿王绛王宇余志华丁久元
- 关键词：钝齿棒杆菌克隆赖氨酸
- 利用乳酸的动性球菌和非依赖ＮＡＤ的乳酸脱氢酶
- 余志华何文君
- 癸二酸发酵的研究
- 1989年
- 从保藏菌种中筛选到一株由正癸烷产生癸二酸较高的酵母菌L4(candida sp.)。经诱变、摇瓶培养条件试验,该菌的诱变株L9能直接利用正癸烷大量产生癸二酸,摇瓶发酵5天产癸二酸约60g/L。当加入青霉素、链霉素改变细胞透性;加入脂酰CoA合成酶抑制剂抑制β-氧化;加入NADH和Fe^(?)辅酶促进烃氧化和W-氧化作用均能大幅度地提高产量,产率增加30%左右。16立升自动发群罐生产癸二酸,5天产量稳定在71g/L以上。产品提取率按发酵最终产量和体积计在85%以上。成品分析结果,其主要指标符合企业标准。
- 余志华
- 关键词：假丝酵母癸二酸发酵
- 真养产碱杆菌112R_4酰亚胺酶基因的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达被引量：10
- 2002年
- 筛选到一株具海因水解活力的微生物 ,经鉴定后命名为真养产碱杆菌 1 1 2R4 。该菌能水解海因、二氢尿嘧啶和琥珀酰亚胺 ,且对琥珀酰亚胺活力最高 ,但不水解 5 单取代海因和5 ,5’ 双取代海因 ,因而被确定为含有酰亚胺酶。真养产碱杆菌 1 1 2R4 能在以琥珀酰亚胺为唯一碳、氮源的培养基上生长 ,表明该菌中存在琥珀酰亚胺完整的转化途径。从 1 1 2R4 基因组DNA出发 ,用鸟枪法克隆了一个 6kb的与环酰亚胺水解相关的DNA片段 ;进一步亚克隆得到了带酰亚胺酶基因的 2kb的DNA片段 ,并进行了序列测定。缺失分析确定了一个 876bp的ORF为真养产碱杆菌 1 1 2R4 的酰亚胺酶基因 ,推测编码一个 2 91个氨基酸的多肽 ,这是第一次报道微生物酰亚胺酶的核酸和蛋白序列。推测的氨基酸序列在蛋白数据库中进行了比较 ,结果表明 ,酰亚胺酶与已知的环酰胺酶没有明显的同源性 ,也不属于氨酰水解酶蛋白超家族 ,因而被分类为一种新的环酰胺酶。真养产碱杆菌 1 1 2R4 的酰亚胺酶与芽生杆菌A1 7p 4的酰亚胺酶N端的 2 0个氨基酸有较高的同源性 ,一致性为 6 0 % ,与多糖脱乙酰酶保守序列也部分同源 ,一致性为 1 4%。带有酰亚胺酶基因的重组质粒在大肠杆菌中得到表达 ,在lac启动子控制下 ,使用 1mmol LIPTG诱导 5h 。
- 王宇张英姿丁久元刘阳剑王绛余志华
- 关键词：基因克隆基因表达真养产碱杆菌
- 钝齿棒杆菌CD945丙酮酸羧化酶基因的克隆、序列分析及表达被引量：5
- 2003年
- 以钝齿棒杆菌 (Corynebacteriumcrenatum)突变株CD945的基因组为模板 ,运用PCR方法 ,扩增出丙酮酸羧化酶的基因片段。核苷酸序列分析结果表明 ,该片段全长 365 7bp ,以GTG为起始密码子 ,编码一个ORF。该ORF的核酸序列与Corynebacteriumglutamicum ,Mycobacteri umsmegmatis以及Saccharomycescerevisiae的丙酮酸羧化酶结构基因相比 ,相似性分别为98 2 2 %、62 41 %和 49 61 %。由ORF推导出的氨基酸序列与上述属种的丙酮酸羧化酶相比 ,同源性分别是 99 30 %、64 65 %和 44 0 4 %。经证实对于酶的催化活性至关重要的一些保守区域 ,如ATP和生物素的结合位点等 ,在该氨基酸序列中都存在。将该基因片段转化钝齿棒杆菌 (C .crenatum)CD945 ,利用CTAB处理细胞和苹果酸脱氢酶偶联测定相结合的方法 ,进行酶活力的分析 ,结果表明 ,重组子与供体菌相比 ,丙酮酸羧化酶的活力提高
- 王绛刘阳剑王宇张英姿余志华丁久元
- 关键词：棒杆菌丙酮酸羧化酶氨基酸基因
- 真养产碱杆菌112R_4的二羧酸单酰胺酰胺水解酶被引量：2
- 2003年
- 在一株具有环酰亚胺转化活性的真养产碱杆菌 1 1 2R4 中发现了一种特异性的二羧酸单酰胺酰胺水解酶 (半酰胺酶 ) ,它催化环酰亚胺代谢的第二步反应 ,将二羧酸单酰胺水解为二羧酸和氨。该酶的底物仅限于此代谢途径的第一个酶———酰亚胺酶的产物二羧酸单酰胺 ,而对其它的酰胺类化合物没有明显水解活性。真养产碱杆菌 1 1 2R4 中的半酰胺酶和酰亚胺酶在表达上具有相关性 ,环酰亚胺 (如琥珀酰亚胺 )和二羧酸单酰胺 (如琥珀酰胺酸 )对它们有正调控作用 ,游离氨离子显示出负调控作用 ,琥珀酸则在酶合成和活性两方面均表现出影响作用。对重组大肠杆菌中表达的半酰胺酶粗酶的部分性质进行了研究。钴离子对半酰胺酶的活性表现出促进作用 ,比活力提高到 3.37倍 ,表明半酰胺酶可能是一种金属结合酶。
- 张英姿王宇余志华刘阳剑王绛丁久元
