刘骥
- 作品数：43 被引量：161H指数：7
- 供职机构：西南民族大学更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生农业科学生物学更多>>
- 热诱导潜在食物中毒威胁源重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素去折叠及聚合过程被引量：1
- 2021年
- 热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光谱、荧光光谱、变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳监测重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素(recombinant staphylococcal enterotoxin M,rSEM)热诱导变性过程。结果表明,在低于40℃时,rSEM具有富含α-螺旋(17%)、β-折叠(32%)、转角(21%)的天然折叠态结构,分子表面唯一的121号色氨酸残基位于β-掌型结构域中相对疏水的环境中。随着温度从42℃升高到55℃,rSEM二级结构中减少的α-螺旋含量被增加的β-折叠/转角含量所弥补,蛋白质分子之间聚集状态未发生明显改变,最大荧光发射波长明显蓝移,同时350 nm和340 nm波长处的荧光强度比表现出反S型曲线,说明42~55℃温和加热可导致另一种形式的rSEM折叠中间态(intermediate state,IS)形成。在55~90℃温度范围内,rSEM二级结构基本维持稳定。与此同时,当加热温度从65℃升高至80℃时,350 nm与340 nm波长处的荧光发射强度比并未显示出蛋白处于完全变性状态,说明在加热过程中rSEM二级结构基本维持稳定,而三级结构具有较大动态变化的可能性,这可能与β-掌型结构域可以通过诱导契合结合具有不同构象的主要组织性相容复合体等位基因产物有关系。此外,在70℃乃至更高的温度,rSEM的聚集程度明显增加并且在90℃时达到最大。综上,rSEM中间态形成、聚合体产生以及稳定的β-折叠/转角结构是该蛋白在高温下依然保持热稳定性的基础。通过对rSEM热诱导去折叠过程的研究有助于阐明rSEM耐热机理,未来利用该方法对其他各类金葡菌肠毒素热失活机制进行类似研究将利于食品安全性生产工艺过程的改善。
- 刘骥田万帆唐俊妮陈娟赵燕英于基成
- 关键词：圆二色光谱荧光光谱
- 金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK原核表达、纯化及溶液构象分析被引量：3
- 2019年
- 金黄色葡萄球菌K型肠毒素(Staphylococcus aureus enterotoxin K,SEK)由金黄色葡萄球菌肠毒素基因簇编码,流行病学显示,编码SEK蛋白的sek基因在食品源金黄色葡萄球菌菌株中具有较高的检出率,说明SEK也可能是一种重要的食品中毒潜在致病因子。本研究将截去N端信号肽的SEK蛋白编码基因与原核表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-ΔNspsek;通过对sek基因在不同原核表达宿主菌中的表达及表达条件优化分析,确立SEK蛋白的最优表达条件;利用镍亲合层析纯化含组氨酸(His)标签的SEK融合蛋白,将凝血酶切除His标签后的SEK蛋白进行聚合状态及热稳定分析、荧光发射谱和圆二色谱分析。结果表明,重组蛋白SEK表达成功,热处理导致蛋白部分降解;荧光光谱揭示SEK蛋白在278 nm和295 nm波长处具有相同的最大色氨酸发射峰;344 nm波长处表明SEK蛋白处于紧密折叠的天然状态;圆二色谱分析表明,ΔNspSEK重组蛋白富含β-折叠(23.6%)、β-转角(28%)以及α-螺旋(29.1%)等二级结构。为深入研究SEK蛋白的结构与功能提供基础,也对改进食品加工工艺和提高食品安全具有指导意义。
- 田万帆刘骥赵燕英唐俊妮
- 关键词：原核表达纯化圆二色谱
- 一种采用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法被引量：31
- 2015年
- 利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法.在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证.并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析.6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增.针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107cfu/ml.进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮.该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段.
- 王琼唐俊妮汤承陈娟刘骥陈炼红
- 关键词：微波炉加热DNA提取PCR扩增
- 金黄色葡萄球菌新型肠毒素sek基因在3株食品分离菌株中的表达被引量：7
- 2016年
- 目的：肠毒素sek基因在临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中较为流行,研究新型肠毒素sek基因的时序性表达可为食物中毒预防和疾病控制补充新的基础数据。方法：本研究针对实验室保存的食源性金黄色葡萄球菌菌株进行21种肠毒素基因检测,筛选出3株含sek基因的菌株SA005、SA008和SAB0,针对3株菌株进行生长曲线测定,随后在培养不同时间段收集菌体提取RNA,利用实时荧光定量聚合酶链式反应（real time-polymerase chain reaction,real time-PCR）检测肠毒素sek基因在12~120 h的相对表达水平。结果：基因检测结果显示,菌株SA005含有16S、nuc、mec A、seb、sec、sek、sex基因,SA008含有16S、nuc、mec A、sea、sek、sex基因,SAB0含有16S、nuc、sek、sex基因。3株菌株在胰酪胨大豆肉汤培养基中的生长曲线趋势较相似,18 h左右出现折点,之后细菌进入生长稳定期。3株菌株的sek基因在12~120 h全程表达,SA005的sek基因在48 h时相对表达量最高,在84 h相对表达量最低;SA008在24 h时的相对表达量最高,在48 h相对表达量最低,在60~120 h表达量相对比较稳定;SAB0在12~120 h之间相对表达量呈现抛物线趋势,在60 h和72 h的表达量相对较高且差异不显著（P〉0.05）。结论：3株菌株sek表达水平存在明显差异,相同菌株sek基因不同时间点表达也存在差异性,菌株基因背景的影响可能是造成sek基因表达差异性的关键。
- 王琼唐俊妮汤承陈娟刘骥蔡自建
- 关键词：金黄色葡萄球菌时序性表达
- 大米蛋白产品开发研究进展被引量：13
- 2005年
- 综述了国内外大米蛋白产品的开发研究进展,从大米蛋白性质及产业化开发角度提出了一种高纯度(90%以上)大米蛋白制备工艺的流程.
- 刘骥姚惠源陈正行
- 关键词：大米蛋白纯度米渣
- 米渣浓缩蛋白酶法增溶机理初探被引量：5
- 2007年
- 从酶反应动力学的角度讨论了不溶性的米渣浓缩蛋白(RDPC)增溶机理,包括:一部分溶解的蛋白酶与不溶性米渣浓缩蛋白(RDPC)吸附,使不溶性蛋白增溶,另一部分溶解的蛋白酶用来断裂由不溶性蛋白增溶后,溶解于溶液中的片段;反应产物对酶活力的抑制;补加底物的增溶说明了反应体系中有大量溶解的游离态酶没有得到充分利用,同时提示可以用固定化酶的方法来减少产物(低分子量肽段)对酶活力的抑制;动力学反应的初速率方程式为:V0=k2X1mK1[E]0[S]0/1+K1[E]0+K1[S]0X1m=0.8859×[E]0[S]0V0/1+6.3027[E]0+0.03590[S]0水解产物的凝胶过滤显示,碱性蛋白酶(Alcalase)降解不溶性组分(Pr)有可能符合“ZipperReaction”模型。
- 刘骥姚惠源陈正行
- 关键词：增溶碱性蛋白酶
- 蛋氨酸羟基类似物对小鼠组织自由基和抗氧化作用研究被引量：4
- 2011年
- 目的:研究蛋氨酸(MET)和蛋氨酸羟基类似物(HMTBA)对饲喂高脂日粮小鼠自由基水平、抗氧化作用及其血脂代谢的影响。方法:50只昆明种雄性小鼠分成5组,分别是正常+0.2%MET组、正常+0.1%MET+0.1%HMTBA组、高脂+0.2%MET组、高脂+0.2%HMTBA组、高脂+0.1%MET+0.1%HMTBA组。结果:与正常+0.2%MET组相比,高脂+0.2%MET可导致小鼠氧化应激,升高血液和组织的自由基水平,降低机体抗氧化能力,使血脂水平和动脉粥样硬化指数升高;而高脂+0.2%HMTBA能显著降低机体自由基水平,增强血清及组织中GSH-Px及CAT活性,显著升高T-AOC水平,显著降低MDA水平,与高脂+0.2%MET组相比,HDL升高,LDL、TG、TC、AI显著降低。结论:两种蛋氨酸源中,HMTBA有较好地抗氧化作用,能够更好地清除体内的自由基,提高机体的抗氧化能力,降低血脂。
- 杨永兰夏淑芳刘骥乐国伟施用晖
- 关键词：蛋氨酸蛋氨酸羟基类似物抗氧化作用降血脂
- 竞争抑制酶联免疫吸附法快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P被引量：2
- 2021年
- 目的建立竞争抑制酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P(staphylococcal enterotoxin P,SEP)的分析方法。方法根据ELISA的检测程序,利用交叉方阵滴定法确定SEP抗原的最佳包被浓度及单克隆抗体的最佳倍比稀释浓度,再对辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(HRP-IgG)最佳稀释浓度及最佳反应时间进行筛选,然后通过测定450 nm处不同SEP抗原包被条件(包被液类型、包被环境)、封闭液类型及浓度、封闭时间、竞争反应温度、反应方式(预混反应、直接反应)下的OD值对检测条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标样品回收率对方法进行评价。结果SEP抗原最佳包被浓度为2.500μg/mL,鼠单抗血清稀释度1:6000(V:V),酶标抗稀释度1:3000(V:V);反应1 h,最佳包被条件为磷酸盐缓冲液4℃过夜,10%脱脂乳封闭2h,37℃直接竞争反应。此方法的线性回归方程为:Y=0.4166X-0.7415(r^(2)=0.9908),灵敏度为0.954μg/mL,批内及批间变异系数均低于3%,对人工污染的脱脂牛奶、LB(Luria-Bertani)液体培养基中肠毒素蛋白SEP的回收率高于98%。结论该方法具有较好的回收率和稳定性,可应用于肠毒素蛋白SEP的快速检测。
- 崔梦含李响响赵燕英刘骥朱成林陈娟唐俊妮
- 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附法金黄色葡萄球菌
- 一种三七保健酸乳的制备工艺
- 本发明公开了一种三七保健酸乳的制备工艺，涉及保健食品领域。其以中药材三七根茎研磨粉及超高温瞬时灭菌全脂牛乳作为发酵基质，加入蔗糖调配，用发酵剂进行混合发酵，通过正交试验确定最佳配方和最适发酵工艺参数，而制备工艺流程为：隔...
- 唐俊妮朱安妮田芷睿陈娟刘骥蔡自建
- 文献传递
- 全效利用乳酪蛋白制备CPPs与CNPPs研究进展
- 2006年
- 综述了国内外酪蛋白源生物活性肽产品的开发研究进展,综合国内外市场酪蛋白磷酸肽(CPPs)开发现状,提出了开发CPPs的同时充分利用酪蛋白非磷酸肽(CNPPs),在工业化规模上全面利用酪蛋白资源生产生物活性肽的建议.
- 刘骥刘鲁蜀蔡自建
- 关键词：酪蛋白生物活性肽酪蛋白磷酸肽
