史俊文
- 作品数：14 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 携带人c-Myc和EGFP基因慢病毒表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建携带人c-Myc和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUMGW。方法 XhoI线性化pLenti-EF1a-c-Myc-IRES-EGFP,回收片段并补平XhoI,接着BamHI酶切该片段,回收2722bp片段而获连接用c-Myc-IRES-EGFP;EcoRI线性化pFUGW,回收并补平EcoRI,然后BamHI酶切该片段,回收9174bp片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的SolutionI将其与连接用c-Myc-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定。所构建载体命名为pFUMGW。获pFUMGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带c-Myc和EGFP基因的慢病毒感染人胚肾细胞株293、肿瘤细胞株CNE1和C666以建立相应的病毒感染体系。结果酶切证实成功构建了pFUMGW,按标准程序生产的携带c-Myc和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染293、CNE1和C666。结论成功构建携带人c-Myc和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUMGW,为相关后续研究打下了良好基础。
- 李艳青史俊文肖高芳肖东姚开泰
- 关键词：C-MYCEGFP慢病毒载体
- 西藏小型猪肋软骨细胞的分离培养及鉴定
- 目的 分离培养西藏小型猪肋软骨细胞，并对其进行甲苯胺蓝染色鉴定。方法 取3日龄西藏小型猪，二步消化法分离培养西藏小型猪肋软骨细胞；对所分离培养的软骨细胞进行甲苯胺蓝染色。结果 成功分离培养西藏小型猪肋软骨细胞，甲苯胺蓝染...
- 刘薇史俊文陈佩雯张婷婷唐华袁进顾为望肖东
- 关键词：西藏小型猪软骨细胞甲苯胺蓝
- 西藏小型猪骨髓间充质干细胞分离培养及慢病毒载体介导EGFP标记间充质干细胞
- 2012年
- 目的建立一种简便、有效的西藏小型猪骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外分离培养及纯化方法，并基于BMSCs建立慢病毒介导的外源基因EGFP体外投递系统。方法密度梯度离心法分离西藏小型猪BMSCs，差速贴壁法不断纯化，流式细胞仪检测第3代BMSCsCD45、CD90和CD105表达；此外，用携带EGFP基因的慢病毒转染BMSCs以获得EGFP标记的BMSCs，倒置荧光显微镜下观察感染情况及流式细胞术检测感染效率。结果①密度梯度分离法结合差速贴壁法所获得的细胞经鉴定符合MSCs的特性。②借助慢病毒高效率将EGFP导入BMSCs，感染效率为84．1％。结论利用密度梯度分离法结合差速贴壁法可获得高纯度的BMSCs，基于BMSCs建立了慢病毒介导的外源基因体外投递系统。
- 唐华毕文浩艾威李德胜潘光辉史俊文刘薇黄威肖东顾为望
- 关键词：西藏小型猪慢病毒
- 西藏小型猪肋软骨细胞的分离培养及鉴定
- 目的:分离培养西藏小型猪肋软骨细胞,并对其进行鉴定.方法:实验采用3日龄西藏小型猪,二步消化法分离培养西藏小型猪肋软骨细胞(PCCs),同样的方法分离培养小鼠的肋软骨细胞(MCCs),观察两个物种软骨细胞的形态,并分别以...
- 刘薇史俊文岳敏张婷婷唐华袁进肖东顾为望
- 关键词：形态分析
- 文献传递
- 携带Fluc和ZsGreen双报告基因小鼠iPS细胞系的建立被引量：2
- 2013年
- 背景与目的:诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)在修复受损组织器官和治疗人类疾病方面已展示了良好的应用前景,但iPS细胞具有形成畸胎瘤的作用,这是其安全应用于临床的巨大障碍之一。为此本研究拟利用慢病毒体外感染的方法,建立携带萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,ZsGreen)双报告基因的小鼠iPS细胞系,为活体动态监测畸胎瘤形成、定植和形成畸胎瘤所需最小细胞剂量等提供实验基础。方法:构建含Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。以pLH2BmRFP质粒为模板,PCR扩增获得Fluc基因片段,将其克隆至利用BamHⅠ酶切的pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen质粒中,挑选一个阳性克隆质粒进行测序,最终获得携带双报告基因的慢病毒载体pEF1a-Fluc-IRES-ZsGreen(pELZG)。采用脂质体介导的瞬时转染生产携带Fluc和ZsGreen基因的病毒,收集病毒上清,并感染iPS细胞,数天后荧光显微镜下观察是否有绿色荧光的iPS细胞克隆,不断挑取ZsGreen阳性的iPS细胞克隆以进一步纯化。将标记好的iPS细胞移植入裸鼠皮下,观察成瘤情况。结果:pELZG载体分别经XbaⅠ、PvuⅡ、SacⅠ单酶切,得到的片段大小分别为10.005、3.282和6.723 kb,2.441、3.401和6.604 kb,预示成功构建了Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。利用其生产的病毒上清成功感染iPS细胞,经过不断的纯化,最终获得含稳定表达Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系。将标记好的iPS细胞植入裸鼠皮下后,观察到畸胎瘤的形成。结论:成功建立了携带Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系,为相关后续研究打下了良好的基础。标记后的iPS细胞对畸胎瘤的形成和发展具有很好的示踪作用。
- 樊全荣史俊文贾俊双高飞张余琴赵尊兰姚开泰肖东
- 关键词：萤火虫荧光素酶293T细胞诱导性多潜能干细胞畸胎瘤
- 稳定过表达miR-26a肝癌细胞株的建立被引量：3
- 2013年
- 目的建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞株。方法以CTE049质粒为模板,PCR扩增miR-26a序列418bp,片段两侧添加XbaⅠ和BamHⅠ酶切位点,In-Fusion克隆至pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen中,次日挑选单菌落,提取质粒并进行测序和酶切鉴定;所构建的载体命名为pLVT-miR26a。获得pLVT-miR26a后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带miR-26a和ZsGreen基因的慢病毒感染小鼠肝癌细胞(Hep1-6)、人肝癌细胞(BEL-7402、HepG2、Sk-Hep-1、HepG2-luc),以建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞系;qRT-PCR检测所建立肝癌细胞系中miR26a的表达水平。结果测序和酶切证实成功构建了pLVT-miR26a,按标准程序生产的携带miR-26a和ZsGreen基因的慢病毒上清成功感染小鼠及人肝癌细胞。结论成功建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞株,为相关后续研究打下了良好基础。
- 赵文淘赵尊兰史俊文王胜纯林晓琳李静姚开泰肖东
- 关键词：慢病毒载体肝癌
- DKK1转基因体细胞克隆西藏小型猪的制备
- 目的 DKK1基因是wnt通路的阻断因子,有研究显示,在小鼠皮肤特异性过表达DKK1基因,会导致小鼠出现无毛表型.本研究利用转基因体细胞核移植的方法制备皮肤特异性过表达DKK1基因的转基因体细胞克隆西藏小型猪,以创制无毛...
- 刘薇吴丽红岳敏那顺巴雅尔唐华史俊文袁进肖东顾为望
- 关键词：西藏小型猪DKK1慢病毒体细胞核移植
- 西藏小型猪肋软骨细胞的分离培养及鉴定
- 目的 分离培养西藏小型猪肋软骨细胞，并对其进行鉴定。方法 实验采用3日龄西藏小型猪，二步消化法分离培养西藏小型猪肋软骨细胞(PCCs)，同样的方法分离培养小鼠的肋软骨细胞(MCCs)，观察两个物种软骨细胞的形态，并分别以...
- 刘薇史俊文岳敏张婷婷唐华袁进肖东顾为望
- 关键词：西藏小型猪软骨细胞甲苯胺蓝蛋白聚糖
- 西藏小型猪皮肤成纤维细胞的分离培养及借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪皮肤成纤维细胞
- 目的 分离培养西藏小型猪皮肤成纤维细胞,并借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪皮肤成纤维细胞。方法 取3日龄西藏小型猪,冷胰酶消化法分离培养西藏小型猪皮肤成纤维细胞；按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(...
- 刘薇史俊文唐华陈佩雯李静张婷婷袁进顾为望肖东
- 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白
- 人诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)系的建立被引量：2
- 2011年
- 掌握建立人iPS细胞系(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的技术,以便为人肿瘤细胞重编程为iPS细胞建立技术平台.在人胚胎干细胞的培养条件下,通过携带Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4 4个混合因子的慢病毒感染人皮肤成纤维细胞(CCD-1079SK细胞),从而诱导成干细胞样的克隆.根据人胚胎干细胞的特性进行如下鉴定:克隆形态、碱性磷酸酶活性、核型和CCD-1079SK细胞来源的克隆拟胚体(embryoid bodies,EBs)形成及分化等.结果显示,在人胚胎干细胞的培养环境中,导入Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4 4个因子的CCD-1079SK细胞产生了一株iPSC克隆,这株iPSC克隆在细胞形态、增殖能力、胚胎细胞特异性表面抗原以及基因表达与人胚胎干细胞相似,此外,iPSC克隆在体外悬浮培养中形成拟胚体并分化成3个胚层.人iPS细胞系的成功建立为利用iPS细胞技术开展肿瘤细胞重编程研究奠定了坚实基础.
- 姚志芳史俊文贾俊双申红芬林晓琳肖高芳张晟肖东姚开泰
- 关键词：肿瘤治疗
