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副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：9: 2011年; 本试验采用121℃高压处理副猪嗜血杆菌4型和5型耐热蛋白,混合作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度为10μg/mL,37℃包被2h;封闭液选择含20g/L脱脂奶粉的PBST,封闭30min;血清的稀释度为1∶80;抗原抗体反应时间为45min;酶标二抗稀释度为1∶12000,作用时间为30min;底物显色时间为15min。特异性、重复性和敏感性试验及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,对已知阴阳性血清的临床样本检测结果与国外ELISA试剂盒一致,可用于副猪嗜血杆菌的血清抗体检测和血清流行病学调查。; 郑念广谭实勇何玲夏芳高娟罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌抗体间接酶联免疫吸附试验

猪瘟病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用被引量：1: 2011年; 针对CSFV基因组5′端非编码区序列设计并合成了高度特异的一对引物和一条探针,用于猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立。将提取的病毒的总RNA做为模板进行反转录和PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行大肠杆菌转化,提取阳性质粒做为标准品绘制标准曲线,成功地建立了特异性检测CSFV的荧光定量RT-PCR方法,其灵敏度达到100拷贝/μL。将猪瘟活疫苗(细胞源)采用不同剂量免疫猪后,取全血及组织,用所建立的方法进行检测,发现病毒主要分布在猪的血液、脾脏、淋巴结、扁桃体中。; 夏芳何玲罗满林陈瑞爱; 关键词：猪瘟病毒荧光定量猪瘟活疫苗病毒分布

表达猪圆环病毒2型ORF2和猪IFN-γ基因重组腺病毒的免疫保护作用: 2011年; 本研究以构建的猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2和猪IFN-γ重组腺病毒(简称rAd-OI)为免疫原免疫30日龄、母源抗体为阴性的三元杂商品仔猪。25头猪随机分为5组,每组5头。A组肌注免疫rAd-OI 106.12TCID50/头,B组肌注免疫rAd-OI 107.12TCID50/头,C组肌注免疫rAd-OI 108.12TCID50/头,D组肌注免疫rAd-OI 109.12TCID50/头,E组不作免疫,留作攻毒对照。一免后21 d进行二免,二免后21 d进行第3次免疫,免疫后每周采血检测抗体水平。免疫后56 d(即第三次免疫后14 d)所有猪攻毒PCV-2,剂量为5×105.67TCID50/头。攻毒前后每周采血检测抗体水平及病毒血症情况。攻毒21 d后处死所有猪,检测组织中的病毒含量。结果显示C组的抗体水平一直显著高于其他各组,攻毒后的病毒血症也低于其他各组。结合抗体水平、免疫和攻毒后的临床症状以及病毒血症水平得出,C组的免疫剂量较为理想,此结果为PCV-2ORF2及猪IFN-γ重组腺病毒疫苗的生产开发提供了理论依据。; 裴党帅郑念广唐明森夏芳陈瑞爱罗满林; 关键词：PCV-2 免疫保护抗体测定

仔猪益生乳酸菌的分离及其抗逆性筛选被引量：3: 2010年; 从仔猪肠道中分离出45株乳酸菌,从中筛选出4株耐酸、耐胆盐并具有良好益生性的菌株,小鼠试验证明其具有可靠的安全性,所分离出的4株乳酸杆菌可用于仔猪生产中用。; 夏芳罗满林陈瑞爱; 关键词：乳酸杆菌纯化耐酸

免疫佐剂的研究进展被引量：7: 2009年; 佐剂在改进免疫应答、提高免疫效应中发挥着重要作用。佐剂可以改变正常的免疫机能,吸引大量的巨噬细胞以吞噬抗原;改变抗原的构型,使抗原物质降解并加强其免疫原性;延长抗原在组织内的储存时间,使抗原缓慢降解和缓释,并发挥免疫细胞间协同作用。就几种常用的疫苗佐剂及DNA疫苗佐剂的应用进行了综述。; 夏芳罗满林郭林刘健赵志权; 关键词：免疫佐剂疫苗免疫应答

副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型方法的建立及其应用被引量：4: 2011年; 利用ERIC序列设计1对引物,分别对PCR反应的模板量、引物浓度、DNA聚合酶用量、dNTPs浓度、退火温度等影响ERIC-PCR扩增的因素进行了探索和优化,以选择最佳的PCR反应体系及反应条件。结果显示,确定的最适引物浓度为0.166～0.333μmol/L,DNA聚合酶的最适浓度为1.0U/μL,模板最适用量为8ng/μL,dNTPs为200μmol/L。利用所建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分子生物学分型技术,对临床分离菌株的指纹图谱进行了分析,13个分离菌株的ERIC-PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较,可分辨出6种血清型,并与琼脂扩散试验分型方法的结果一致。证实已建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型方法重复性好、可比性高。; 郑念广谭实勇陈瑞爱何玲夏芳罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌

白介素-15真核表达质粒对猪瘟免疫增强效果的研究被引量：1: 2009年; 将克隆至pcDNA3.1载体的含pIL-15基因真核表达质粒大量提取,联合猪瘟疫苗免疫小猪,并通过ELISA和猪脾脏淋巴细胞MTT试验测定pIL-15的免疫佐剂效果。ELISA结果表明,pcDNA-IL-15质粒免疫后,能有效提高猪瘟抗体水平;猪脾脏淋巴细胞增殖试验结果表明,联合免疫后,猪淋巴细胞免疫水平能得到明显提高。; 夏芳罗满林陈瑞爱; 关键词：白介素-15 猪瘟 MTT

猪瘟病毒实时荧光定量PCR方法的建立及其应用: 引言/目的中国猪瘟兔化弱毒株(HCLV)及其制备的疫苗现已被国内外广泛用于猪瘟的防控,通过对免疫猪群进行抗体水平监测,对疫病防控有着重要的作用。由于HCLV不能致细胞病变,确定其毒价一直采用的较传统的兔体定型热反应法,其...; 夏芳何玲罗满林陈瑞爱; 文献传递

猪瘟病毒实时荧光定量PCR方法的建立及其应用: 本研究针对HCLV基因组5’端非编码区设计并合成了一对引物和探针，采用从病毒中提取总RNA反转录PCR后，将产物克隆制作标准曲线，成功的建立了特异性检测HCLV的荧光定量方法。试验表明，所建立的荧光定量RT-PCR方法不...; 夏芳何玲罗满林陈瑞爱; 关键词：猪瘟病毒

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夏芳