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表达猪圆环病毒2型ORF2和猪IFN-γ基因重组腺病毒的免疫保护作用: 2011年; 本研究以构建的猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2和猪IFN-γ重组腺病毒(简称rAd-OI)为免疫原免疫30日龄、母源抗体为阴性的三元杂商品仔猪。25头猪随机分为5组,每组5头。A组肌注免疫rAd-OI 106.12TCID50/头,B组肌注免疫rAd-OI 107.12TCID50/头,C组肌注免疫rAd-OI 108.12TCID50/头,D组肌注免疫rAd-OI 109.12TCID50/头,E组不作免疫,留作攻毒对照。一免后21 d进行二免,二免后21 d进行第3次免疫,免疫后每周采血检测抗体水平。免疫后56 d(即第三次免疫后14 d)所有猪攻毒PCV-2,剂量为5×105.67TCID50/头。攻毒前后每周采血检测抗体水平及病毒血症情况。攻毒21 d后处死所有猪,检测组织中的病毒含量。结果显示C组的抗体水平一直显著高于其他各组,攻毒后的病毒血症也低于其他各组。结合抗体水平、免疫和攻毒后的临床症状以及病毒血症水平得出,C组的免疫剂量较为理想,此结果为PCV-2ORF2及猪IFN-γ重组腺病毒疫苗的生产开发提供了理论依据。; 裴党帅郑念广唐明森夏芳陈瑞爱罗满林; 关键词：PCV-2 免疫保护抗体测定

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：9: 2011年; 本试验采用121℃高压处理副猪嗜血杆菌4型和5型耐热蛋白,混合作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度为10μg/mL,37℃包被2h;封闭液选择含20g/L脱脂奶粉的PBST,封闭30min;血清的稀释度为1∶80;抗原抗体反应时间为45min;酶标二抗稀释度为1∶12000,作用时间为30min;底物显色时间为15min。特异性、重复性和敏感性试验及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,对已知阴阳性血清的临床样本检测结果与国外ELISA试剂盒一致,可用于副猪嗜血杆菌的血清抗体检测和血清流行病学调查。; 郑念广谭实勇何玲夏芳高娟罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌抗体间接酶联免疫吸附试验

副猪嗜血杆菌灭活疫苗的研制: 副猪嗜血杆菌(Haemopilus parasuis,HPS)是巴斯德菌科的猪上呼吸道的一种共栖菌,它可在特定条件下侵入机体而引起猪的多发性浆膜炎和关节炎(革拉泽氏病Glasser's disease)。该菌对产房以及保...; 郑念广; 关键词：副猪嗜血杆菌多发性浆膜炎外膜蛋白灭活疫苗基因重组 ELISA检测

副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型方法的建立及其应用被引量：4: 2011年; 利用ERIC序列设计1对引物,分别对PCR反应的模板量、引物浓度、DNA聚合酶用量、dNTPs浓度、退火温度等影响ERIC-PCR扩增的因素进行了探索和优化,以选择最佳的PCR反应体系及反应条件。结果显示,确定的最适引物浓度为0.166～0.333μmol/L,DNA聚合酶的最适浓度为1.0U/μL,模板最适用量为8ng/μL,dNTPs为200μmol/L。利用所建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分子生物学分型技术,对临床分离菌株的指纹图谱进行了分析,13个分离菌株的ERIC-PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较,可分辨出6种血清型,并与琼脂扩散试验分型方法的结果一致。证实已建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型方法重复性好、可比性高。; 郑念广谭实勇陈瑞爱何玲夏芳罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌

环介导等温扩增技术及其在病原微生物检测中的应用: 环介导等温扩增技术是一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比,LAMP不需要热循环,只需等温扩增,且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可不经过电泳,通过肉眼观察或浊度计即可...; 郑念广曾小娜罗满林; 关键词：环介导等温扩增病原微生物检测; 文献传递

猪圆环病毒2型ORF2重组腺病毒的构建与鉴定及其免疫效果研究被引量：6: 2010年; 为了研究含有猪圆环病毒2型(porcinecircovirus type 2,PCV2)的重组腺病毒作为基因工程疫苗的潜在应用价值,本试验根据GenBank中猪圆环病毒2型基因序列,设计了1对引物,用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增。将目的基因T/A克隆后,亚克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ORF2。经PCR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明该基因已成功连接后,重组腺病毒转移载体经PmeⅠ酶切线性化,在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-CMV-ORF2。经PCR方法和PacⅠ酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已构建成功。PacⅠ酶切线性化pAd-CMV-ORF2,脂质体法转染AD293细胞进行病毒的包装和扩增。PCR及RT-PCR、IFA、Westernblotting检测目的基因及其表达。结果表明,本试验成功构建了重组腺病毒pAd-CMV-ORF2。3次噬斑试验纯化重组腺病毒,测得其TCID50为10-8.75/0.1mL。将重组腺病毒接种SPF级雌性BALB/c小鼠,用ELISA抗体检测试剂盒检测特异性抗体水平。小鼠免疫试验测得其特异性抗体水平较高,为PCV2重组腺病毒基因工程疫苗的进一步研究打下基础。; 刘根梅谭实勇陈瑞爱黄红亮郑念广罗满林; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF2 重组腺病毒

环介导等温扩增技术及其在病原微生物检测中的应用: 环介导等温扩增技术是一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，只需等温扩增，且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀，扩增产物可不经过电泳，通过肉眼观察或浊度计即可...; 郑念广曾小娜罗满林; 关键词：病原微生物核酸扩增技术 LAMP法; 文献传递

猪β干扰素的基因改造及真核表达被引量：3: 2011年; 本试验选择高表达密码子重新设计合成猪β干扰素成熟肽核苷酸,通过设计特异的引物,在毕赤酵母表达系统中表达PoIFN-β,获得分泌表达的高活性重组PoIFN-β,并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水泡性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法测定重组猪β干扰素的效价,为指导重组PoIFN-β的临床使用和研究其生物学功能提供基础。; 唐明森陈瑞爱刘健裴党帅郑念广罗满林; 关键词：酵母表达高活性

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郑念广