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PCR产物直接测序快速识别病原菌被引量：3: 2008年; [目的]结合PCR和DNA测序技术,建立一种适用于传染性疾病预防控制的快速准确地识别病原细菌的分子检测方法。[方法]以布鲁氏菌为例,利用PCR分别从纯培养物、模拟标本中扩增布鲁氏菌16S和31kd基因,并对扩增产物测序,与数据库进行比对,根据比对结果确定扩增产物是否来源于布氏菌。[结果]从纯培养物和模拟标本成功扩增特异产物,测定序列与数据库比对,能很快准确确定病原的种类,优于单纯的PCR扩增。[结论]结合PCR扩增和产物测序的分子检测方法切实可行,为疾病预防控制体系中病原菌的快速识别提供了一个快速、高效和准确的方法。; 陈泽良王玉飞赵瑾赵红庆苑锡铜贾雷立杜昕颖刘京梅宋宏彬张伶黄留玉; 关键词：布鲁氏菌 PCR DNA测序病原细菌

奇异变形菌基因组文库的构建及标识序列的发现被引量：2: 2008年; 目的：构建用于筛选奇异变形菌的特异序列的基因组文库，并从中筛选变形杆菌特异的标识序列。方法：提取奇异变形菌的基因组DNA，用Sau3AI部分酶切，回收酶切产物，然后与BamHI酶切的pUC19质粒连接，转化JM109，构建奇异变形菌的基因组文库。随机挑取抗性克隆，用位于质粒上的引物进行扩增，确定插入片段的大小及分布情况。DNA测序确定部分克隆中插入的序列，根据序列设计引物，分析这些序列在奇异变形菌临床分离株中的分布，验证序列的特异性。结果：成功构建了奇异变形菌的基因组文库，库容量达到1.1×10^5CFU。阳性克隆的比例为95％，插入片段大小主要分布在200～500bp的范围。对其中14个克隆进行了序列测定，其中5个片段与已知序列有一定的同源性，另外9个与已知序列没有同源性，特异性分析发现了几个较好的标识序列。结论：成功构建了奇异变形菌的基因组文库，利用该文库发现了奇异变形菌特异的序列。; 赵瑾陈泽良王玉飞乔凤杜昕颖张伶黄留玉; 关键词：基因组文库

新兵免疫状况调查及其免疫方案探索: 本文论述了通过对新兵计划免疫现况调查和实脸室血清抗体水平检测的方法，初步了解新兵十种疫苗可预防疾病的血清抗体阳性率，初步探索制定了部队新兵切实可行的免疫预防接种方案。; 刘京梅赵志清宋宏彬贾红王勇张伶李荣杜昕颖孙走南赵君王波; 关键词：部队新兵预防接种免疫状况调查; 文献传递

注射狂犬病疫苗免疫效果观察: 狂犬病是由狂犬病毒感染所致的急性传染病。人被犬等动物咬、抓伤后接种狂犬疫苗是目前最有效的预防措施之一。为了解接种狂犬疫苗后机体受保护情况,对本单位2005年2月至2006年9月注射狂犬疫苗的457例被犬等动物咬、抓伤注射...; 杜昕颖王勇张伶宋宏彬; 关键词：狂犬病病毒感染狂犬疫苗免疫效果; 文献传递

O1群霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：5: 2010年; 目的:建立针对O1群霍乱弧菌的实时荧光定量TaqMan PCR快速检测方法,并进行模拟粪便标本的检测评价。方法:根据O1群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立检测O1群霍乱弧菌的实时荧光定量TaqMan PCR快速检测方法,对所建立的方法分别进行实验室内的灵敏度及特异性评价;将O1群霍乱弧菌灭活菌株悬液倍比稀释后与健康成人新鲜粪便混匀,制备成模拟带菌者粪便标本,提取DNA,进行Taq-Man PCR检测,用以评价该方法。结果:建立了快速检测O1群霍乱弧菌的实时荧光定量TaqMan PCR方法,灵敏度为每反应体系104拷贝;该方法对其他14种肠道菌DNA没有扩增;该方法对模拟粪便标本的检测灵敏度为每反应体系102 CFU。结论:建立了一种快速、高效检测O1群霍乱弧菌的荧光定量PCR检测方法,该方法可用于O1群霍乱弧菌临床粪便标本的检测。; 杜昕颖孙宏迪王玉飞陈泽良张伶宋宏彬孙岩松黄留玉; 关键词：O1群霍乱弧菌荧光定量PCR

以克隆载体为自杀载体快速构建布鲁氏菌的无痕缺失突变株被引量：11: 2007年; 构建突变株是病原微生物致病机理研究的重要手段。以往研究中布鲁氏菌的无痕缺失突变株都采用传统的自杀载体来构建,效率低下。首先对布鲁氏菌的电击转化条件进行了优化,然后选择含有反向筛选基因sacB的pEX18Gm质粒作为自杀载体,构建了缺失Ⅳ型启动子区的布鲁氏菌无痕缺失突变株。这不仅为构建布鲁氏菌的突变株提供了一个快速有效的技术平台,也为深入研究Ⅳ型分泌系统的功能奠定了基础。; 王玉飞陈泽良赵红庆苑锡铜黄留玉张伶刘京梅宋宏彬; 关键词：布鲁氏菌

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张伶