张卫星
- 作品数：17 被引量：49H指数：3
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省农业良种工程项目国家现代蜂产业技术体系建设专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 意大利蜜蜂工蜂幼虫饲粮的适宜亚硒酸钠添加水平被引量：3
- 2016年
- 【目的】探索意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂幼虫日粮的适宜亚硒酸钠水平,为意大利蜜蜂工蜂幼虫发育阶段硒的营养需要提供依据。【方法】共取1 440只1日龄意大利蜜蜂工蜂幼虫并平均分为两批,每批720只,一批用于化蛹率、羽化率的测定,一批用于理化指标和分子指标的测定。两批幼虫均按单因素完全随机设计分成6组,对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂亚硒酸钠添加量为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg·kg^(-1)的日粮,每组5个重复,每个重复24只幼虫。取3、5、7日龄幼虫测定体重、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、酚氧化酶(phenoloxidase,PO)活性,取5日龄幼虫测定硒磷酸合成酶(selenide water dikinase,Sel D)、丝氨酰-t RNA合成酶(seryl-t RNA synthetase,Ser Rs)、SECIS-结合蛋白1(SECIS-binding protein 1,Sbp1)、SECIS-结合蛋白2(SECIS-binding protein 2,Sbp2)基因表达量;7日龄时统计化蛹率。【结果】与对照组相比,日粮添加亚硒酸钠水平为0.2—0.6 mg·kg^(-1)时显著提高了幼虫的T-AOC(P<0.05),日粮添加亚硒酸钠水平为0.2—0.8 mg·kg^(-1)时显著提高了幼虫的T-SOD活性(P<0.05),各试验组均显著降低了幼虫的MDA含量(P<0.05)。日粮添加亚硒酸钠水平为0.4 mg·kg^(-1)时幼虫的PO活性显著高于对照(P<0.05)。日粮添加亚硒酸钠水平为0.6 mg·kg^(-1)时5日龄幼虫的Sel D、Ser Rs、Sbp1、Sbp2基因表达水平显著高于对照(P<0.05)。日粮添加亚硒酸钠水平为0.4 mg·kg^(-1)时幼虫化蛹前体重显著高于对照(P<0.05)。与对照组相比,日粮添加亚硒酸钠水平为0.2 mg·kg^(-1)时,幼虫化蛹率显著提高(P<0.05)。【结论】人工饲养条件下基础日粮硒水平为0.21 mg·kg^(-1)时,根据幼虫化蛹前体重、化蛹率做拟合曲线得出意大利蜜蜂工蜂幼虫日粮适宜亚硒酸钠添加水平为0.24�
- 苏中渠张卫星郗学鹏王红芳胥保华
- 关键词：意大利蜜蜂工蜂幼虫亚硒酸钠适宜添加水平
- 沂蒙山地区中华蜜蜂种群遗传多样性分析（英文）被引量：3
- 2018年
- 【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana是一种重要的种质资源和传粉昆虫,本研究旨在探究山东省沂蒙山地区中华蜜蜂种群遗传多样性和种群结构关系,为沂蒙山地区中华蜜蜂种质资源利用与保护提供理论依据。【方法】本研究通过选取山东省沂蒙山地区7个采样地点的114群中华蜜蜂采集蜂,根据Ruttner的形态学分析方法,对其36项形态学指标进行测定;并利用筛选后的11对荧光标记微卫星引物,研究其遗传多样性。【结果】形态学分析结果表明,沂蒙山地区中华蜜蜂工蜂的平均体长为12.064～13.351 mm,平均前翅长为8.198～8.694 mm。11个微卫星位点共检测到58个等位基因,每个位点的等位基因数从2～17不等,7个群体的平均期望杂合度和多态信息含量分别为0.3115和0.2872,平均等位基因数为2.4545(ST-AQ)～4.0000(BHY),平均期望杂合度为0.1916～0.3397,群体的平均遗传分化系数Fst为0.048。Nei氏遗传距离为0.0092(XL-DLZ到XZ-XLZ))～0.1000(XL-DLZ到XL-DJW)。聚类分析结果表明沂蒙山地区的中蜂可以分成3类。【结论】沂蒙山地区各个采样地点之间的中华蜜蜂种群结构接近,表明不同种群之间存在着基因交流,与其他地区中华蜜蜂种群比较,沂蒙山地区中华蜜蜂在形态和遗传结构上存在一定的特异性。
- 郗学鹏张卫星魏伟陈文凤李振芳夏振宇于静刘家昕马兰婷刘振国王红芳胥保华
- 关键词：中华蜜蜂形态学微卫星
- 中华蜜蜂工蜂cDNA文库的构建及ESTs测序分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】为了解中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂的抗逆性,构建了中华蜜蜂工蜂的cDNA文库,并对文库质量进行分析。【方法】本研究利用SMART技术构建了中华蜜蜂工蜂的全长cDNA文库。【结果】文库库容为3.6×106 cfu/m L,文库重组率为97%,插入片段长度多数分布在1 000 bp左右。挑取cDNA克隆进行EST测序,共进行了306个成功反应,软件拼接共得到234个单基因簇(Unigene),其中包括207个单拷贝(Singletons)序列及27个重叠群(Contigs)。使用Blastx将这些序列同Gen Bank等数据库进行查询、比对和注释,结果显示141条序列有相关同源性,其他序列没有明显的同源性,这也为我们发现新功能基因提供了可靠依据。【结论】此文库的构建在中华蜜蜂功能基因的分离、克隆、筛选以及基因功能研究等方面具有重要作用。
- 张卫星郗学鹏秦明王帅刘春蕾王红芳胥保华
- 关键词：中华蜜蜂CDNA文库SMART技术
- 外源添加山梨醇和海藻糖对意大利蜜蜂抗寒性能的影响被引量：2
- 2021年
- 本试验旨在通过测定意大利蜜蜂(简称意蜂)体内山梨醇、海藻糖等相关生化物质含量、抗氧化酶活性及抗寒基因表达的变化,探究外源添加山梨醇和海藻糖在蜜蜂抗寒过程中的作用机制。从意蜂姊妹蜂群中随机选取900只刚出房的蜜蜂,随机分成6组,每组3个重复,每个重复50只蜜蜂,分别饲喂蔗糖溶液(对照)、海藻糖溶液和山梨醇溶液。6组均于常温(30℃)下饲养12 d,其中3组在饲喂12 d后进行冷处理(4℃冷驯化2 h)。饲喂12 d后立即测定蜜蜂过冷却点、冰点,比较其抗寒性能差异。然后分别测定蜂体游离水、糖原、脂肪含量、山梨醇脱氢酶(SDH)、海藻糖酶(THL)活性以及海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)、SDH mRNA相对表达量的差异;另取900只意蜂,按照以上分组饲养,用于测定血淋巴中小分子糖醇含量。结果表明:1)与对照组相比,山梨醇组和海藻糖组过冷却点分别降低0.65(P<0.05)、0.41℃(P<0.05)。2)与对照组相比,常温以及冷处理条件下,山梨醇组和海藻糖组蜂体游离水含量变化不显著(P>0.05)。3)与对照组相比,常温以及冷处理条件下,海藻糖组和山梨醇组蜂体内脂肪含量变化不显著(P>0.05),而糖原含量显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比,常温以及冷处理条件下,山梨醇组和海藻糖组血淋巴中葡萄糖含量显著增加(P<0.05);常温条件下,山梨醇组血淋巴中果糖含量显著提高(P<0.05),而冷处理条件下,海藻糖组血淋巴中果糖含量显著降低(P<0.05);常温条件下,山梨醇组血淋巴中山梨醇含量显著增加(P<0.05),而冷处理条件下,结果差异不显著(P>0.05)。5)与对照组相比,常温以及冷处理条件下,山梨醇组和海藻糖组蜂体SDH和THL活性均显著提高(P<0.05)。6)与对照组相比,常温以及冷处理条件下,山梨醇组SDH mRNA相对表达量显著上调(P<0.05);常温条件下,海藻糖组TPS mRNA相对表达量显著下调(P<0.05)。综上所述,在室内饲养的离�
- 赵丽娜张卫星秦明王颖王红芳刘振国胥保华
- 关键词：意大利蜜蜂山梨醇海藻糖耐寒性
- 中华蜜蜂和意大利蜜蜂耐寒性能差异比较被引量：14
- 2017年
- 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)和意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)体内抗寒系统的组成,为探究中蜂和意蜂耐寒性能的差异提供理论依据。【方法】试验选取室外相同环境条件越冬的中蜂和意蜂各5群,于2015年12月20日每群随机选取蜜蜂立即测定两者的过冷却点、冰点,比较其耐寒性能差异。然后分别测定蜂体游离水、结合水、脂肪、糖原和蛋白质含量以及海藻糖酶的活性。利用高效液相色谱测定血淋巴中山梨醇、海藻糖、甘露醇的含量。在海藻糖的生物合成通路中确定4个重要调控基因,选择β-action和β-肌动蛋白分别作为中蜂和意蜂的内参基因,采用实时荧光定量PCR检测中蜂和意蜂海藻糖4个相关调控基因在越冬期时m RNA相对表达量的差异。【结果】越冬期中蜂和意蜂过冷却点差异显著,中蜂的过冷却点显著低于意蜂(P<0.05),但二者冰点没有显著性差异(P>0.05);越冬期中蜂和意蜂蜂体含水量存在显著差异,中蜂体内游离水含量显著低于意蜂(P<0.05),而结合水含量显著高于意蜂(P<0.05);越冬中期蜂体脂肪含量在两蜂种间差异不显著(P>0.05);中蜂和意蜂蜂体和血淋巴蛋白质含量差异不显著(P>0.05);意蜂在越冬期时体内糖原含量明显低于中蜂,并且差异显著(P<0.05);中蜂血淋巴中甘露醇、山梨醇含量接近于意蜂的两倍,海藻糖含量也相对高于意蜂,差异显著(P<0.05);中蜂蜂体和血淋巴的海藻糖酶活性均显著低于意蜂(P>0.05);以中蜂为对照组,实时荧光定量PCR检测意蜂的海藻糖酶基因(Tre-2)和尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(UGP)表达量明显高于中蜂(P<0.05);而基因Tre-1表达情况相反;海藻糖合成酶基因(TPS)表达量在中蜂和意蜂体内无显著差异(P>0.05)。【结论】与意蜂相比,中蜂能够通过降低体内游离水含量,提高糖原和小分子糖含量,调节海藻糖酶活性和相�
- 秦明王红芳刘振国王颖王帅郗学鹏刘春蕾张卫星胥保华
- 关键词：中华蜜蜂意大利蜜蜂过冷却点耐寒性
- 人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平被引量：3
- 2014年
- 本试验以酶水解酪蛋白为外源粗蛋白质,探究人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平。移取1日龄幼虫960只,平均分为5组：对照组饲喂幼虫基础饲粮,粗蛋白质水平为8%,试验组在其基础上分别添加不同剂量的酶水解酪蛋白,使各组粗蛋白质水平分别为9%、10%、11%和12%。采用人工饲养蜜蜂幼虫技术饲养幼虫直至羽化出房。结果表明：1）幼虫饲粮粗蛋白质水平9%、10%组的化蛹率和羽化率与对照组差异不显著（P〉0.05）,但显著高于其他试验组（P〈0.05）;粗蛋白质水平12%组只能少数化蛹,不能成功羽化。2）与对照组相比,粗蛋白质水平为9%～11%时,幼虫和蛹的体重显著升高（P〈0.05）;粗蛋白质水平对新出房工蜂的体重影响不显著（P〉0.05）。3）粗蛋白质水平显著影响蜂体各发育阶段的抗氧化能力（P〈0.05）,且对蛹和新出房工蜂而言,均表现粗蛋白质水平为8%时超氧化物歧化酶活性最强,9%时总抗氧化能力最大。4）与对照组相比,粗蛋白质水平为9%～10%时,幼虫和蛹的卵黄原蛋白基因相对表达量显著升高（P〈0.05）,但对新出房工蜂影响不显著（P〉0.05）。由此推断,人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平为8%～10%。
- 张怡丁张卫星胥保华刘锋
- 关键词：蜜蜂幼虫粗蛋白质水平人工饲养
- 中华蜜蜂Apidaecin的重组表达及其抗菌活性被引量：1
- 2019年
- 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana)抗菌肽Apidaecin在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的重组表达,并验证纯化后的重组抗菌肽Apidaecin在体内和体外是否具有抗菌活性,为开发新型、安全具有抗菌和免疫调节功能的抗菌肽制剂提供理论依据。【方法】以意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)Apidaecin为模板,克隆出中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,成功构建his-pHT43/Apidaecin表达载体,并参照MoBiTec所提供的制备方法成功制得枯草芽孢杆菌感受态细胞,现配现用,以保证其活性并得以在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达。使用His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)进行表达蛋白的分离纯化,使用Easy II Protein QuantitativeKit(BCA)试剂盒测定浓度。纯化得到的重组抗菌肽Apidaecin作用于大肠杆菌K88,在体外进行抑菌圈试验和最小浓度抑菌法测定;在体内,以小鼠为试验动物模型,试验组小鼠腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin,阴性对照组注射相同体积的生理盐水,阳性对照组注射相同体积的头孢霉素,然后人为感染大肠杆菌K88,感染24 h后对小鼠进行解剖,取得肠道样品和血液样品,并从肠道屏障和免疫功能两个方面探讨重组抗菌肽Apidaecin对感染大肠杆菌K88小鼠的保护作用。使用ELISA试剂盒对染菌小鼠血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)与肠道sIgA水平进行测定,采用qRT-PCR法对小鼠肠道紧密连接蛋白基因(claudin-1、ZO-2)以及小鼠肠道细胞因子(促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL6和抑炎因子IL10)的转录水平进行测定。【结果】克隆得到的中华蜜蜂Apidaecin含有183bp的碱基,编码60个氨基酸,包含Apidaecin的信号肽序列、一个基础的RR二肽以及抗菌肽Apidaecin的氨基酸序列(内含高度保守的8个氨基酸序列),编码的蛋白质命名为AccApidaecin,其分子量为15.6 kD,等电点为5.33。在IPTG终浓度为3 mmol·L^(-1),诱导温度为30℃,诱导表达12 h后,可从1 L表达上清�
- 陈文凤王红芳刘振国张卫星郗学鹏胥保华
- 关键词：中华蜜蜂抗菌肽大肠杆菌抗菌活性
- 饲粮α-亚麻酸水平对意大利蜜蜂工蜂幼虫生理机能的影响
- 2019年
- 【目的】探究饲粮中α-亚麻酸的添加水平对意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂幼虫抗氧化活性和免疫能力的影响。【方法】移取1日龄意大利蜜蜂工蜂幼虫1 200只,随机分为5组,每组5个重复,每个重复48只;其中1组为对照组,饲喂不添加α-亚麻酸的基础饲粮,4组为处理组,分别饲喂α-亚麻酸添加水平为0.02%、0.04%、0.06%和0.08%的饲粮。按照室内蜜蜂幼虫饲养方法,将1日龄幼虫用移虫针移至温度适宜的加入200μL饲粮的24孔细胞培养板内,培养板置于恒温培养箱中(温度33℃,相对湿度55%),试验期间每天更换饲粮。饲养至第6天末或第7天初,幼虫开始有直立或排便现象时,将幼虫转移至提前铺好灭菌纸的24孔细胞培养板内准备化蛹。从饲养第1天开始,每天检查并记录幼虫和蛹的死亡数量,并将死亡个体及时移除,直至未死亡的蛹全部羽化新蜂,记录成功化蛹和羽化新蜂个体数量,统计幼虫化蛹率和羽化率。各组分别取5、6和7日龄幼虫测定抗氧化、免疫、脂质代谢指标及相关基因表达量。【结果】饲粮中α-亚麻酸的添加水平为0.02%和0.04%时,化蛹率和羽化率显著高于与其他处理组(P<0.05),而工蜂幼虫血淋巴中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)含量显著低于对照组,高密度脂蛋白(HDL)的含量却显著高于对照组(P<0.05)。饲粮中α-亚麻酸的添加水平为0.04%时,工蜂幼虫超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性较对照组显著增加,丙二醛(MDA)的含量显著降低(P<0.05)。饲粮中α-亚麻酸的添加水平为0.02%、0.04%和0.06%时,6日龄工蜂幼虫的溶菌酶(lysozyme)和酚氧化酶(PO)活性显著高于对照组(P<0.05)。饲粮中α-亚麻酸添加水平为0.04%时,6日龄工蜂幼虫脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性显著低于对照组(P<0.05)。饲粮中α-亚麻酸添加水平为0.04%时,5和7日龄工蜂幼虫lysozyme和PO相对表达量显著高于对
- 于静张卫星马兰婷胥保华
- 关键词：意大利蜜蜂工蜂Α-亚麻酸
- 中华蜜蜂促分裂原活化蛋白激酶ERK-A基因的克隆与低温表达分析被引量：1
- 2018年
- 昆虫属变温生物,冷胁迫是其最常见的环境刺激。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与细胞应对外界刺激密切相关,为了解MAPK信号通路中ERK基因在中华蜜蜂耐寒机制中的作用,从NCBI上面查找意大利蜜蜂的ERK-A的序列,设计引物,以中华蜜蜂为模板,扩增cDNA;利用多种生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征;采用MEGA 5.2软件中的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建ERK-A与不同物种之间的进化树;通过实时定量PCR分析蜜蜂在4℃环境下ERK-A基因的表达情况。生物信息学分析表明,ERK-A全长1098 bp,编码365个氨基酸。ERK-A的理论分子量是42 kDa,含有ERK-A激酶所共有的磷酸化位点,属于MAPK超家族。实时定量PCR检测ERK-A基因在低温下的表达谱发现,4℃处理1 h后,ERK-A基因的表达上调与对照组差异显著(P<0.05),2 h时达到高峰,为对照组的4倍。研究结果表明ERK-A基因是冷响应的,可能在中华蜜蜂应对低温环境时发挥信号转导作用。
- 陈文凤张卫星王红芳胥保华
- 关键词：中华蜜蜂MAPK通路克隆
- 中华蜜蜂转录因子AP-1基因的克隆及特性分析被引量：2
- 2018年
- 【目的】克隆获得中华蜜蜂Apis cerana cerana转录因子AP-1(transcription factor AP-1)基因Acc AP-1序列,分析其在中华蜜蜂不同发育时期和组织中以及不同非生物应激条件下的表达差异,为该基因的功能研究提供参考。【方法】以中华蜜蜂全组织cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增克隆获得中华蜜蜂转录因子AP-1基因cDNA序列;利用生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征;采用MEGA 5.2软件中的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建中华蜜蜂转录因子AP-1与其他膜翅目昆虫同源AP-1蛋白系统发育树;通过实时定量PCR分析中华蜜蜂转录因子AP-1基因在不同发育时期(1-6日龄幼虫、预蛹、白眼蛹、红眼蛹、褐眼蛹、1日龄成年工蜂和15日龄成年工蜂)以及15日龄成年工蜂不同组织(头、肌肉、表皮、中肠、直肠和毒腺)中的mRNA表达情况;将15日龄成年工蜂分别置于极端温度(4℃,16℃和44℃)下,以及饲喂含有农药(0.01 mL/L百草枯)和重金属(1 mg/mL Cd Cl2)的蔗糖溶液条件下,分析目的基因mRNA的表达情况。【结果】克隆获得了中华蜜蜂转录因子AP-1基因Acc AP-1(GenBank登录号:MF994311)开放阅读框(ORF)的序列,其长度为813 bp,编码270个氨基酸,预测蛋白分子量为30.24 kD,理论等电点为8.31。保守结构域分析表明,在第7-137位氨基酸之间存在一个Jun超家族的保守结构域,在第195-255位氨基酸之间存在一个b ZIP_Jun超家族的保守结构域。氨基酸序列比对以及进化树结果显示,中华蜜蜂与西方蜜蜂Apis mellifera的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,Acc AP-1在各发育时期表达量差异显著(P<0.05),其中,在1日龄幼虫和15日龄成蜂期表达量最高;Acc AP-1在测试的各组织中均有表达,在肌肉中的表达量最高(P<0.05)。不同非生物应激条件下的表达量分析表明,4℃低温可以诱导Acc AP-1表达量显著升高(P<0.05),16℃处理0.5~2 h可显著提高其表达量(P
- 郗学鹏魏伟张卫星王红芳胥保华
- 关键词：中华蜜蜂转录因子AP-1基因克隆基因功能胁迫反应
