张小刚
- 作品数：33 被引量：183H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军第三○九医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划解放军总后勤部卫生部科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DIEFA快速诊断结核性脑膜炎
- 结核性脑膜炎(tuberculosis mengingitis,TBM)是肺外结核的重症结核病,也是常见的中枢神经系统感染疾病<'[1]>.儿童发病高于成人、农村高于城市、北方高于南方是这一疾病的显著特征<'[2]>.T...
- 张小刚何秀云庄玉辉
- 关键词：结核性脑膜炎
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- 结核分枝杆菌不同组份蛋白质组双向电泳研究
- 目的 研究结构分枝杆菌体外培养物蛋白质组,为揭示该菌生物学难题的本质提供分子遗传学依据。方法结核分枝杆菌H37RV株在苏通培养基内37℃培养3周,将培养物处理成上清滤液（A）、细胞浆（B）、细胞膜（C）蛋白质样品。以pH...
- 庄玉辉何秀云张小刚李国利丁勤学阙海萍
- 文献传递
- 中国部分地区耐利福平和异烟肼耐药基因的检测
- ＜正＞ 目的:研究我国部分地区耐利福平（RFP）和异烟肼（INH）结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因、KatG基因突变情况,评价其耐药分子机制。方法:采用PCR和聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）对373株...
- 金玉莲王庆张小刚王仲元
- 文献传递
- 母牛分支杆菌制剂通过一氧化氮进行免疫调节的作用被引量：48
- 1996年
- 目的用母牛分支杆菌制剂作用于不同状态的动物，通过产生一氧化氮（ＮＯ）而达到不同的效果。方法在第一组实验中，用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过检测ＮＯ－２间接反映ＮＯ的变化。在第二组实验中，用结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染豚鼠，１０天后给受染豚鼠注射母牛分支杆菌制剂。结果受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生ＮＯ－２水平明显高于未免疫小鼠（Ｐ＜０．０１）。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠间腹腔巨噬细胞产生ＮＯ－２水平差别不显著（Ｐ＞０．０５）。受染豚鼠注射母牛分支杆菌制剂后，ＮＯ－２产生水平明显低于单纯结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染组。结论母牛分支杆菌制剂不但能提高机体免疫水平，而且可以在结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染造成组织细胞破坏的条件下，调整免疫反应，进而减少组织损伤。
- 王国治赵桂芳李晓明刘勇沈小兵庄玉辉李国利张小刚吴雪琼
- 关键词：一氧化氮母牛分支杆菌免疫调节结核病
- 聚合酶链式反应检测结核杆菌的研究被引量：1
- 1992年
- 以人型结核杆菌基因组 DNA 为模板,合成二段引物各20个碱基进行聚合酶链式反应(PCR)。经琼脂糖凝胶电泳证实,获得一条245bp 扩增带。PCR 检测的敏感性染色体基因组DNA 为1pg,菌悬液为13个活菌/ml。在特异性试验中,人型结核杆菌、牛型结核杆菌、BCG可见此扩增带。被试的其它14种抗酸菌以及变铅青链霉菌、大肠杆菌质粒 PUC19、星状诺卡氏菌、红球菌均未见该扩增带。54例肺结核痰标本3种方法检查的阳性率分别为:萋尼氏抗酸染色16.7%,培养法14.8%,PCR 37.0%。前2种检查方法分别与 PCR 比较,经统计学处理均有显著性差异(P<0.01)。12例非结核性肺部疾患痰标本抗酸染色和 PCR 均为阴性。结果表明,PCR 技术是快速、敏感、特异诊断结核病的方法。
- 庄玉辉吴雪琼张小刚李国利
- 关键词：肺结核结核杆菌聚合酶链反应
- 中国部分地区耐利福平耐药基因的检测被引量：1
- 2003年
- 目的 研究中国部分地区耐利福平 (RFP)结核分支杆菌临床分离株rpoB基因突变情况并评价其耐药分子机制。方法 采用聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)对 45 3株结核分支杆菌临床分离株 (其中敏感株 14 8株 ,耐RFP或含耐RFP株 3 0 5株 )rpoB基因进行检测。并对其中 12株SSCP阴性的耐药株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果 北京市、上海市、河北省、河南省、辽宁省、吉林省、安徽省 ,结核分支杆菌耐RFP临床分离株rpoB基因突变率分别为 90 % ,92 % ,90 % ,90 % ,92 % ,94% ,93 %。经统计学处理不同地区间差异无显著性 ( χ2 =0 3 1,P >0 0 5 )。同时敏感株均无突变 ,特异性为 10 0 %。 12株SSCP阴性耐药株中经测序 4株在 5 3 1位密码子TCG→TTG ,1株 5 2 6位密码子CAC→TAC ,1株发生在 5 16位密码子GAC→GTC ,6株未改变。结论 中国不同地区耐利福平耐药基因突变率大致相同 ,rpoB基因突变是耐RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制 ,PCR
- 陈红兵王仲元张小刚何秀云董亚俊张晓娟
- 关键词：利福平耐药基因结核分支杆菌基因突变
- 结核分支杆菌耐利福平耐药基因的检测
- 2001年
- 目的 评估应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR-SSCP方法对93株结核分支杆菌临床分离株(其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株58株)和33例耐RFP肺结核病人痰标本rPOB基因突变进行检测,并对部分常规药敏试验耐药而用PCR-SSCP未检测到rPOB基因突变的PCR扩增产物阴性菌株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果 以结核分支杆菌H_(37)RV为对照,35株药物敏感株的rPOB基因PCR扩增产物258 bp片段SSCP图谱正常;58株耐RFP分离株中,52株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为89.7％。SSCP图谱正常的5株耐RFP的PCR产物经测序证实,4株在531位密码子TCG→TTG,1株在526密码子CAC→TAC,l株未改变。33例耐RFP肺结核病人痰标本有30例PCR扩增阳性,23例SSCP图谱与H_(37)RV株有差异,rPOB突变率为76.7％。结论 PCR-SSCP技术可以快速、准确地检测结核分支杆菌rPOB基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。
- 张小刚何秀云李书琳张永胜
- 关键词：结核分支杆菌RPOB基因PCR-SSCPDNA序列分析利福平药物敏感性
- 结核分枝杆菌培养物不同组份蛋白质组研究被引量：16
- 2002年
- 将结核分枝杆菌H3 7RV株在苏通培养基内 ,3 7℃培养 2 1d ,然后将培养物分成上清液(A)、细胞浆 (B)和细胞膜 (C)蛋白质样品。以pH3 0～ 1 0 0的IPG预制胶条等电聚焦电泳为第一向 ,SDS PAGE为第二向进行双向电泳 (2 DE)、银染。经扫描、计算机处理。A组份的部分蛋白质斑点采用质谱仪进行蛋白质鉴定。A、B和C 3个组份蛋白质斑点总数分别为 90 7、884和 6 81 ;3个组份蛋白质分子量分布基本相似 ,约 70 5 %～ 74 4%在 1 0～ 49kD之间 ;蛋白质等电点 (pH)A、B两组份分布基本相似 ,约 80 9%～ 83 5 %在pH3 0～ 6 4之间 ,而C组份pH7 6～ 1 0 0之间的蛋白质斑点数比A和B两组分略多 ;A、B和C 3个组份表达丰度较高的蛋白质斑点数占各组蛋白质斑点总数的比例分别为 7 8%、2 7 4%和 2 8% ,蛋白质等电点90 0 %均分布在pH3 0～ 6 4范围内。B组份蛋白质分子质量 73 1 %分布在 1 0～ 49kD之间 ,比A、B两组份略高。A组份 1 4个蛋白质斑点经肽质量指纹谱分析 ,其中 ,9个点有同源性的或推测的蛋白质功能 ,5个蛋白质功能不清楚。总之 ,初步获得了结核分枝杆菌H3 7RV株在上述体外培养条件下收获的培养物的上清液、细胞浆、细胞膜蛋白质组 2 DE图谱及其特点 。
- 庄玉辉何秀云张小刚李国利阙海萍刘绍军
- 关键词：结核分枝杆菌培养物蛋白质组
- 结核分支杆菌耐药分子机制的检测技术的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :探讨结核分支杆菌对异烟肼、利福平耐药的分子机制 ,建立快速检测耐药分支杆菌基因型的分子生物学方法。方法 :采用聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)同时检测结核分支杆菌敏感株和耐异烟肼、利福平耐药株的KatG基因、rpoB基因突变。结果 :78株结核分支杆菌临床分离株均未发现KatG、rpoB基因缺失。以结核分支杆菌H37RV为对照 ,3 6株药物敏感株的KatG、rpoB基因SSCP图谱均正常。 42株同时耐异烟肼和利福平的多耐药株中 ,KatG和rpoB基因突变率分别为 66.7% (2 8/4 2 ) ,90 .5 % (3 8/4 2 )。结论 :结核分支杆菌耐异烟肼、利福平耐药性的产生是由于KatG基因和rpoB基因突变所致。应用PCR -SSCP技术可同时快速检测结核分支杆菌异烟肼。
- 张小刚何秀云陈红兵王仲元张晓娟李书琳
- DNA探针杂交检测结核分支杆菌的研究被引量：4
- 2005年
- 张晓娟董亚俊张小刚何秀云陈红兵
- 关键词：结核分支杆菌DNA探针杂交检测生物素标记PCR产物显色反应
