张晓敏
- 作品数：74 被引量：195H指数：9
- 供职机构：天津医科大学眼视光学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 叉头框转录因子F2小发夹RNA对人眼小梁网细胞外基质蛋白表达的抑制作用被引量：8
- 2019年
- 目的探讨叉头框转录因子F2(FoxF2)对小梁网细胞外基质表达的调控作用。方法将培养人眼小梁网细胞(HTMCs)分为Scramble对照组和FoxF2小发夹RNA(shRNA)组,构建FoxF2重组干扰载体FoxF2 shRNA,应用FoxF2 shRNA慢病毒颗粒感染HTMCs,采用Western blot法检测FoxF2 shRNA的敲低效果及细胞外基质(ECM)蛋白的表达变化,利用Transwell计数实验分析HTMCs的迁移能力。结果体外培养的HTMCs呈长梭形,生长状态良好,形态符合HTMCs形态学特征。FoxF2 shRNA组FoxF2蛋白相对表达量为0.72±0.02,显著低于Scramble对照组的1.27±0.05,差异有统计学意义(t=16.68,P<0.01)。FoxF2shRNA组纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达量分别为0.43±0.03、0.53±0.08和0.86±0.15,显著低于Scramble对照组的0.87±0.04、1.66±0.06和1.73±0.13,差异均有统计学意义(t=15.08、18.81、7.50,均P<0.01)。FoxF2 shRNA组HTMCs的迁移数量为117.30±11.41,显著低于Scramble对照组的251.00±10.37,差异有统计学意义(t=8.72,P<0.01)。结论成功制备可特异性敲低HTMCs内源性FoxF2表达的FoxF2 shRNA病毒,并证实FoxF2干扰对HTMCs中ECM的表达及细胞迁移具有抑制作用。
- 刘爱华高美子黄亮瑜刘勋苏睿虹赵今稚王礼明张晓敏李筱荣东莉洁
- 关键词：小梁网细胞
- 角膜缘干细胞组织工程复合体及其制备方法
- 本发明涉及一种以3T3成纤维细胞为滋养层的人角膜缘干细胞—羊膜组织工程复合体，其角膜缘上皮细胞在体外分化为结构与角膜上皮类似，表型与角膜缘上皮接近的复层上皮结构，复层上皮细胞的基底层细胞能够保留原始细胞特性，上皮细胞之间...
- 孙慧敏张晓敏李筱荣
- 文献传递
- 间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎视网膜中白细胞介素17表达的影响被引量：4
- 2012年
- 背景研究显示Th17细胞是实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）发病的重要致炎细胞群。而白细胞介素17（IL-17）作为Th17细胞的标志性因子参与了EAU的发生与发展。间充质干细胞（MSCs）作为一种免疫调节剂在多种自身免疫性疾病中对Th17具有抑制作用。目的研究MSCs对EAU的治疗作用以及对IL-17在大鼠视网膜表达的影响。方法从10只SPF级Wistar大鼠股骨骨髓中分离、培养MSCs并进行传代，第3—5代细胞用于实验。54只SPF级6—8周龄Lewis大鼠按随机数字表法分为实验组48只和正常对照组6只。光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）与含有结核杆菌素HR37a的2．5g／L弗氏完全佐剂（CFA）等体积混合后行实验组大鼠单后足垫皮下注射建立EAU动物模型，然后按照分层随机原则分为模型对照组和MSCs治疗组，每组24只大鼠。MSCs治疗组于造模的同时行1mlMSCs尾静脉注射（5×10。个／m1），连续注射3d，模型对照组以同法注射等体积PBS。注射后每日在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部炎症反应，并根据Caspi临床分级进行评分。分别于造模后9、12、15、20d随机选取模型对照组和MSCs治疗组各6只大鼠制备视网膜切片，采用组织病理学方法观察大鼠视网膜形态学改变和炎症反应，参照Caspi组织学分级法进行评分。采用免疫组织化学染色法检测造模后9、12、15、20d大鼠视网膜中IL．17的表达。结果培养的细胞呈梭形生长，漩涡状排列，经流式细胞术鉴定CD29、CD44表达阳性，CD45、CD34表达阴性。MSCs治疗组造模后9、12、15、20d眼前节炎症反应评分均低于模型对照组（U=2．815，P=0．005；U=2．768，P=0．006；u=2．900，P=0．004；u=2．855，P=0．004），视网膜组织学检测炎症评分均低于模型对照组，差异均有统计学意义（U=2．345，P=0．019；U=2．559，P=0．011；U=2．166，P=0．030；U=2．373，P=0．018）。免疫组织化
- 袁立飞张晓敏李光达李筱荣
- 关键词：实验性自身免疫性葡萄膜炎间充质干细胞白细胞介素17
- 间充质干细胞在葡萄膜炎中的应用探讨
- 张晓敏
- 人脐带间充质干细胞源性小细胞外囊泡静脉注射对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用被引量：2
- 2021年
- 目的探讨静脉注射人脐带间充质干细胞(MSCs)源性小细胞外囊泡(sEVs)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠的治疗作用。方法分离并培养人脐带MSCs,收集细胞培养上清液,采用超速离心法分离MSCs源性sEVs。采用Nanosight分析sEVs粒径,透射电子显微镜下鉴定sEVs形态;采用Western blot法检测sEVs表面标志物CD9、CD81和CD63蛋白的表达。取48只SPF级7周龄C57BL/6雌性小鼠,采用光感受器间维生素A类结合蛋白651-670(IRBP_(651-670))注射法制备EAU模型。采用随机数字表法将模型小鼠随机分为sEVs治疗组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,每组24只。sEVs治疗组小鼠于EAU造模后第11天尾静脉注射MSCs源性sEVs 50μg,PBS对照组以同样方法注射同体积PBS。造模后第8天各组分别随机选取6只小鼠扩瞳后检眼镜下观察眼底炎症情况,隔日1次,并进行炎症评分。造模后第18天采用颈椎脱臼法各组处死6只小鼠,立即摘取双眼眼球制作眼球石蜡切片并行苏木精-伊红染色,进行眼底病理炎症评分。各组分别随机选取6只小鼠,于造模后第18天颈椎脱臼法处死,立即摘取双眼眼球,采用流式细胞术检测小鼠眼球组织中辅助性T细胞1(Th1细胞)、Th17细胞浸润情况;于造模后第14天各组分别颈椎脱臼法处死6只小鼠,立即分离脾脏及引流淋巴结中的T细胞,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法检测终质量浓度为0、1、10和20μg/ml IRBP_(651-670)条件下T细胞增生情况。另选取3只正常小鼠,采用磁珠阴选法分离脾脏初始T细胞,分为sEVs处理组和PBS对照组,根据分组加入10μg/ml的MSCs源性sEVs或等体积PBS进行共孵育,分别在Th1/Th17细胞分化条件下培养,采用流式细胞术检测各组初始T细胞向Th1/Th17细胞分化情况。结果分离的人脐带MSCs源性sEVs直径平均为(102.4±33.6)nm,透射电子显微镜下sEVs呈双层膜囊泡结构,sEVs中CD9、CD63和CD81蛋白呈高表达。造模后14、16、18、20和22
- 栗勇涛段雅楠李焕张智慧任新军李筱荣张晓敏
- 关键词：间充质干细胞自身免疫性葡萄膜炎
- 高表达Krüppel样因子6对紫外线B诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响被引量：4
- 2019年
- 目的探讨Krüppel样因子6(KLF6)高表达对于紫外线B(UVB)诱导晶状体上皮细胞(HLECs)凋亡的影响。方法利用脂质体转染的方法将已成功构建的真核表达质粒pEGFP-C2-KLF6转染到HLECs中,采用Westernblot法测定细胞中KLF6蛋白的表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染后细胞活力;经苏木精-伊红染色法观察细胞形态;采用Live/Dead染色法观察细胞受损情况;采用Westernblot法检测细胞中凋亡标志物bax和bcl-2的相对表达量,并计算bax/bcl-2比值;采用细胞凋亡检测试剂盒定量测定细胞凋亡水平,并检测细胞中活性氧簇(ROS)的表达水平。结果0.5μg转染组和1.0μg转染组细胞生存力较空载体对照组下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。KLF6高表达组细胞稀疏,细胞形态狭长,细胞质浓缩。正常对照组细胞形态稳定,数量均匀,为绿色活细胞;KLF6高表达组红色死亡细胞数量显著增多。UVB照射后,KLF6高表达组HLECs细胞凋亡值、bax相对表达量、bax/bcl-2比值、ROS表达量均高于空载体对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高表达的KLF6通过调控凋亡相关蛋白的表达及促进内质网内ROS堆积来加剧UVB照射导致的HLECs凋亡,提示KLF6参与HLECs的凋亡调控。通过生物学手段特异性下调KLF6的表达有可能在一定程度上发挥对HLECs的保护作用。
- 田芳赵今稚黄亮瑜徐嫚鸿张哲滕贺张晓敏李筱荣东莉洁张红
- 关键词：晶状体上皮细胞凋亡紫外线B氧化应激
- 间充质干细胞与环孢霉素对角膜移植排斥治疗作用的比较
- 赵少贞张晓敏贾喆
- TLR7激动剂CL097对实验性自身免疫性葡萄膜炎中Th17细胞活性的促进作用被引量：2
- 2015年
- 背景 研究表明,Toll样受体7（TLR7）在自身免疫性疾病中发挥重要作用,但TLR7在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中是否通过树突状细胞（DCs）调控辅助性T淋巴细胞17（Th17）的作用机制鲜见报道.目的 探讨TLR7激动剂CL097处理的小鼠骨髓树突状细胞（BMDCs）对光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP） 1-20-特异性Th17细胞的影响.方法 采用C57BL/6小鼠股骨和胫骨分离小鼠骨髓细胞,将重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）及重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）加入培养基在体外定向诱导BMDCs,于诱导后第6天在培养基中加入5μg/ml CL097作用8h,对照组加入PBS,采用实时荧光定量PCR技术检测CL097处理组与对照组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β及转化生长因子-β（TGF-β） mRNA的相对表达量.小鼠腹腔内注射百日咳毒素1μg,注射后2h将IRBP1-20与等容积含有结核分枝杆菌HR37RA的完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫C57BL/6小鼠,眼底检查参照Caspi 0 ～4分的标准进行炎症评分.免疫后第13天取眼球制作病理切片,苏木精-伊红染色后行组织病理学检查,并分离小鼠脾脏及淋巴结中IRBP1.20-特异性T细胞,分别与CL097处理组及对照组的BMDCs共培养5d,收集细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测2个组细胞中IL-17、γ干扰素（IFN-γ）、维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）和T细胞中表达的T盒21转录因子（T-bet） mRNA的相对表达量;采用流式细胞仪检测并分析CL097处理组和对照组Th1与Th17细胞比例的变化.结果 EAU模型成功建立.实时荧光定量PCR检测结果显示,CL097处理组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=4.560,P=0.045; t=5.476,P=0.032; t=17.240,P=0.003）,而TGF-β mRNA相对表达量明显低于对照组,差异有统计学意义（t=10.410,P=0.009）.CL097处理组BMDCs与IRBP1-20-特异性T细胞共培养后,RORγt和IL-17 mRNA
- 陈琳粘红魏瑞华张红梅张晓敏肖青李雪李筱荣
- 间充质干细胞在视网膜疾病中的临床应用展望被引量：2
- 2011年
- 间充质干细胞(MSC)用于治疗视网膜疾病有两种移植方法:全身静脉注射和局部移植,后者具有更好的针对性。根据疾病不同,需要采用不同的MSC治疗策略:(1)MSC定向分化替代受损细胞,如光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞;(2)利用其免疫抑制作用治疗自身免疫性葡萄膜视网膜炎;(3)利用其神经保护作用减轻或延缓视网膜组织损伤,如目前的视网膜色素变性、视网膜缺血再灌注损伤和青光眼动物模型;(4)转基因后的MSC移植靶向治疗,如脉络膜新生血管的治疗;(5)利用MSC抗炎和促进创伤愈合作用治疗多种视网膜疾病。迄今为止,其抑制葡萄膜视网膜炎进展以及视神经营养保护作用较为明确。但MSC在各种视网膜疾病中的疗效还需要严格评估,其发挥作用的机制尚未完全明了,不同研究结果差异较大。此外,MSC的移植途径和方法,治疗的远期效果及安全性也有待进一步评估。
- 李筱荣张晓敏
- 关键词：间充质干细胞干细胞疗法
- 单核细胞趋化蛋白在视网膜疾病中的表达和作用被引量：2
- 2016年
- 单核细胞趋化蛋白（MCP-1）属于趋化因子CC亚家族，眼部主要表达于视网膜色素上皮（RPE）细胞、光感受器细胞和小胶质细胞。生理状态下适量分泌MCP-1有助于维持RPE细胞和胶质细胞的形态，保证视网膜发挥正常功能。病理状态下RPE细胞、光感受器细胞和小胶质细胞中MCP-1表达明显上升，募集单核-巨噬细胞向炎症部位迁移，促进小胶质细胞活化，在损伤部位吞噬细胞碎片。在视网膜脱离、糖尿病视网膜病变、后部葡萄膜炎和老年性黄斑变性患者眼内液及动物模型的视网膜中，均发现有MCP-1过度表达，且其表达程度与视网膜炎症严重程度密切相关。因此，MCP-1被认为是体现视网膜炎症程度最为客观的指标之一，可作为判断视网膜疾病活动性指标并有望成为视网膜疾病治疗的新靶点。
- 王蕾张晓敏李筱荣
- 关键词：趋化因子CCL2
