东莉洁
- 作品数：58 被引量：143H指数：9
- 供职机构：天津医科大学眼视光学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转录抑制因子PSF调控IL-4/STAT6基因转录活性分子机制的研究
- 目的：STAT6是STATs(Signal Transducersand activatovs of Transcription)信号转导子与转录激活因子家族的一员,可被细胞因子IL—4特异激活。IL—4与其受体结合后,...
- 东莉洁
- 关键词：PSFHDAC负性调控
- 文献传递
- 重组pEGFP-C2-FOXC1-C真核表达质粒的构建与表达
- 2012年
- 目的:将人FOXC1-C基因定向连入pEGFP-C2质粒,使FOXC1-C蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究FOXC1-C蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoR I和NotI双酶切方法,从pcDNA3.1(+)-FOXC1-C质粒中获得FOXC1-C蛋白的cDNA羧基末端;连入pEGFP-C2质粒的C端。将构建成功的pEGFP-C2-FOXC1-C质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见FOXC1-C片段;(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)FOXC1-C cDNA羧基末端成功连入pEGFP-C2质粒(;2)FOXC1-C蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。
- 刘博董亮李颖郝永娜魏瑞华东莉洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
- 多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对缺氧诱导人视网膜微血管内皮细胞功能的影响被引量：6
- 2020年
- 目的观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)功能的影响。方法采用三质粒系统构建慢病毒颗粒(LV)-PSF。LV-PSF体外感染hRMECs后通过流式细胞计数法测定其感染效率。应用实时定量PCR(RT-PCR)检测经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表达水平。将实验分为体内和体外两部分。体内实验:7日龄健康C57B/L6小鼠20只,采用随机数字表法分为正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)组、OIR+LV-空载体(Vec)组和OIR+LV-PSF组,每组5只。除正常组外,其余3组构建OIR模型。OIR组除缺氧刺激外,不做其余处理。OIR+LV-Vec组和OIR+LV-PSF组小鼠分别玻璃体腔注射LV-Vec或LV-PSF。观察LV-PSF对视网膜新生血管(RNV)形成的影响。体外实验:将hRMECs分为正常组、缺氧组、空载组、PSF高表达组。正常组为正常体外培养的hRMECs;缺氧组为缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs;空载组、PSF高表达组分别为用LV-Vec、LV-PSF感染48 h,再用缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs。采用MTT比色法观察PSF对细胞增生能力的影响。采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验观察PSF对缺氧刺激下细胞迁移能力的影响。采用RT-PCR观察各组细胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表达。结果成功构建可稳定高表达PSF的LV-PSF,流式细胞仪测定其感染效率为97%,RT-PCR测得经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明显上调。体内实验:OIR组、OIR+LV-Vec组小鼠RNV面积较正常组明显增加(t=18.31、43.71),OIR+LV-PSF组小鼠RNV面积较OIR组(t=11.30)、OIR+LV-Vec组(t=15.47)明显减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外实验:MTT比色法检测结果显示,缺氧组hRMECs增生能力较正常组明显增强(t=2.57),PSF高表达组hRMECs增生能力较正常组、缺氧组、空载组明显降低(t=5.26、5.46、3.73),差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,缺氧刺激3 h恢复正常条件24 h或48
- 徐嫚鸿王林妮林婷婷任新军柯屹峰胡立颖焦明菲王勇王琼洪雅茹李筱荣东莉洁
- 关键词：视网膜新生血管化缺氧
- 氧诱导视网膜病变小鼠模型微小RNA表达谱分析被引量：4
- 2015年
- 目的 分析氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠模型的微小RNA表达谱,筛选可能与视网膜新生血管（RNV）形成有关的微小RNA.方法 7日龄健康C57BL/6J小鼠52只随机分为正常对照组和OIR组,每组26只.OIR组建立OIR小鼠模型;正常对照组不做任何处理.小鼠17日龄时,行视网膜铺片,观察视网膜血管形态;行视网膜石蜡切片,计数突破内界膜的视网膜血管内皮细胞核数;行微小RNA芯片分析,检测具有差异表达的微小RNA,再应用实时聚合酶链反应（RT-PCR）进行验证.结果 正常对照组小鼠视网膜血管平滑、均匀有序分布;OIR组小鼠周边视网膜血管纡曲、紊乱并伴有新生血管芽,中央视网膜无灌注区明显.正常对照组、OIR组小鼠视网膜无灌注区的相对面积分别为（6.57±3.6）％、（25.81±2.12）％;OIR组小鼠视网膜无灌注区的相对面积较正常对照组明显增大,差异有统计学意义（t=28.71,P＜0.001）.光学显微镜观察发现,正常对照组小鼠内界膜结构完整、平滑,血管内皮细胞排列整齐,偶见突破内界膜的血管内皮细胞核.正常对照组、OIR组平均每张切片突破内界膜的视网膜血管内皮细胞核数分别为（0.16±0.31）、（28.41±4.01）个.两组平均每张切片突破内界膜的视网膜血管内皮细胞核数比较,差异有统计学意义（t=54.45,P＜0.001）.微小RNA芯片分析结果显示,与正常对照组比较,OIR组有21个微小RNA的表达发生了1.5倍以上的变化.其中,上调者9个,下调者12个.差异表达倍数≥3.0的微小RNA为miR-3078、miR-140、miR-29b、miR-29c.RT-PCR检测发现,差异表达倍数≥3.0的4个微小RNA,其表达趋势与芯片分析结果一致.与正常对照组比较,OIR组miR-3078的表达明显上调,差异有统计学意义（t=-2.380,P＜0.05）;miR-140、miR-29b、miR-29c的表达明显下调,差异也有统计学意义（t=2.638、2.323、2,415,P＜0.05）.结论 OIR小鼠模型的微小RNA表达谱中,miR-3078、miR-140�
- 薄其玉东莉洁张琰周玉刘勋韩倩王飞
- 关键词：微RNAS
- 微小核糖核酸-204和211在人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞分化过程的变化被引量：1
- 2013年
- 目的观察人胚胎干细胞（hESC）向视网膜色素上皮（RPE）细胞诱导分化过程中微小核糖核酸（miRNA）204和211的变化特征。方法采用广1然分化法诱导hESC向RPE细胞分化，细胞鉴定。按细胞诱导分化HIf间秩序，分为hESC组、含色素细胞组、hESC源性RPE细胞组和原代培养的人胎RPE（hfRPE）细胞组。行miRNA基闪表达谱芯片分析、miRNA-204和211实时荧光逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测。结果miRNA芯片分析结果显示，随细胞诱导分化过程，miRNA204持续上调。其中，含色素细胞组足hESC组的5．026倍，hESC源性RPE细胞组是含色素细胞组的3．337倍；hfRPE细胞组是hESC源件RPE细胞的13．574倍。miRNA211在细胞诱导分化过程中上调不明显，但从hESC源性RPE细胞到hfRPE细胞，上调倍数为44．333倍，是miRNA表达谱中差异最大的miRNA。RTPCR检测结果显示，hESC组、含色素细胞组、hESC源性RPE细胞组、hfRPE细胞组miR-204相埘表达量分别为91．81±4．43、2263．09±206．39、5996．80±235．42、171676．45±999．82，差异有统计学意义（t=18．22、20．66、279．38，P〈0．001）；miRNA-211相对表达量分别为2．23±0．31、129．33±3．75、125．76±4．78、16682．00±352．97。含色素细胞组和hESC细胞组、hfRPE细胞组和hESC源性RPE细胞组miR-211相对表达量比较，差异均有统计学意义（t=58．58、81．24，P〈0．001）。结论miRNA-204和211在hESC向RPE细胞诱导分化过程中持续单一变化。
- 李文博李筱荣鲁振宇张云山东莉洁王飞董荣
- 重组腺相关病毒-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜新生血管形成的抑制作用被引量：13
- 2014年
- 目的 观察重组腺相关病毒（rAAV）-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用.方法 7日龄C57BL/6J小鼠18只,随机分为正常组、rAAV-PSF注射组、rAAV注射组,各组均6只.蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠视网膜组织中PSF的表达.7日龄C57BL/6J小鼠48只随机分为正常组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组,各组均为12只.除正常组外,其余各组小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为（75±2）％的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型.12日龄时,OIR rAAV-PSF治疗组小鼠玻璃体腔注射病毒滴度为5×10^13pfu/ml的rAAV-PSF重组载体2μI; OIR rAAV治疗组小鼠玻璃体腔注射相同病毒滴度的单纯rAAV载体2μl.OIR模型组小鼠出氧箱后不作任何处理.石蜡切片苏木精-伊红染色并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;Western blot检测视网膜中VEGF蛋白表达含量.结果 正常组小鼠视网膜PSF蛋白表达与rAAV-PSF注射组比较,差异有统计学意义（F=16.05,P=0.001）,与rAAV注射组比较,差异无统计学意义（F=16.05,P=0.890）.正常组、OIR模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组突破内界膜的视网膜新生血管内皮细胞核数比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.007）;rAAV-PSF治疗组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.002）;OIR rAAV治疗组与OIR模型组差异无统计学意义（F=101.00,P=0.550）.各组视网膜VEGF蛋白表达比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.005）,OIR模型组与OIR rAAV-PSF治疗组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.001）;OIR模型组与OIR rAAV组差异无统计学意义（F=13.20,P=0.071）.结论 rAAV-PSF玻璃体腔注射可以抑制OIR小鼠视网膜VEGF表达,从而抑制其新生血管生成.
- 田芳东莉洁周玉王飞张晓敏李筱荣
- 关键词：动物实验
- 以病毒为载体的基因转导技术在眼科研究中的应用被引量：1
- 2020年
- 随着分子生物学技术的进步和基因遗传学的发展,病毒载体系统不断地得到改良及优化,并以其特有的优势逐渐成为眼科基因治疗的良好载体之一。目前,多种病毒载体已应用于眼科疾病的基因治疗研究并取得较好成果。腺病毒载体具有瞬时表达的特点,在减轻角膜移植免疫反应等领域发挥重要作用;慢病毒载体具有稳定高效的特点,在体内可长期缓慢表达,为青光眼治疗提供了新的给药方案;腺相关病毒载体具有免疫原性低,精准持久等特点,可感染多种视网膜细胞,其与成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9联合使用,为眼科遗传疾病的精准治疗提供了新的思路。病毒载体的出现大大提高了基因治疗的应用潜力,具有传统疗法不可比拟的优势。相信随着技术的进步,以病毒为载体的基因转导技术将会很快进入临床应用,解决更多的眼科疑难问题。
- 东莉洁张慧王琼洪雅茹李筱荣
- 关键词：病毒载体
- 人类p100蛋白是调控基因转录和pre-mRNA剪接加工的偶联蛋白
- 真核细胞中蛋白的准确表达必须经过基因转录、pre-mRNA剪接加工、翻译和翻译后修饰等过程形成具有活性的蛋白。无论是基因转录还是pre-mRNA 剪接加工,均需要蛋白复合物的精密调控作用,例如真核基因转录活性的调节依赖于...
- 杨洁步天栩东莉洁姚智
- 关键词：偶联蛋白剪接体
- 文献传递
- MicroRNA在眼部的表达及其功能被引量：9
- 2012年
- MicroRNA（miRNA）是近年来发现的普遍存在于生物基因组的非编码蛋白质的单链小RNA，长约22个核苷酸。它们通过在转录后和翻译水平调节基因表达而调控生理和病理过程。在眼部组织表达的miRNA有百余种，它们在眼部发育，分化，损伤后再生以及昼夜节律调控等生理过程中发挥重要的调控功能。另一方面，miRNA也在眼部新生血管生成，自身免疫性葡萄膜炎，视网膜色素变性，青光眼和视网膜母细胞瘤等病变的发生与发展中起到至关重要的调控作用。miRNA及其作用靶点在眼部生理、病理过程中的机制研究将为眼病的新型分子治疗提供理论依据。
- 张丽娟张琰东莉洁李筱荣
- 关键词：微RNAS基因表达眼疾病
- 卵泡抑素样蛋白1在增生型糖尿病视网膜病变进程中的潜在作用机制初步探讨被引量：5
- 2020年
- 目的观察增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者血清中卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)的变化。方法临床检查确诊的PDR患者(PDR组)20例及正常人20名(正常组)纳入研究。人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)分为HRCEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组;人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组。应用实时定量PCR(RT-PCR)及ELISA测定所有受检者外周血和各组细胞中FSTL1、TGF-β、VEGF、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达。受检者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA和蛋白比较行独立样本t检验;HRCEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组,HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力、mRNA表达比较行单因素方差分析。结果PDR组患者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达分别为1.79±0.58、0.97±0.21、1.85±0.69、1.38±0.44;FSTL1、TGF-β1蛋白表达分别为(1.19±0.50)、(0.71±0.24)ng/ml和(734.03±116.45)、(649.36±44.23)ng/L。与正常组比较,差异均有统计学意义(tmRNA=0.90、0.21、2.85、1.77,P=0.00、0.00、0.04、0.02;t蛋白=1.88、7.68,P=0.00、0.02)。HRCEC缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力分别为0.66±0.05、0.64±0.04;与空白对照组比较,差异有统计学意义(F=13.02,P=0.00)。HUVEC缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力分别为0.63±0.06、0.68±0.06;与空白对照组比较,差异有统计学意义(F=26.52,P=0.00)。HRCEC空白对照组、缺氧3 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达比较,差异有统计学意义(F=14.75、44.93、85.54、6.23,P=0.01、0.00、0.00、0.03);与HRCEC空白对照组上清液中FSTL1、TGF-β1蛋白表达比较,缺氧3 h组,蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧6 h组,TGF-β1蛋白表达差异有统计学意义(P=0.03),FSTL1蛋白表达差异无统计学意义(P=0.68)。HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达比较,差异均有统计学意义(F=19.08、25.12、
- 牛瑞东莉洁杜雪利何燕华聂泽彤崔伟娜陈琼胡博杰
- 关键词：人脐静脉内皮细胞糖尿病视网膜病变
