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马鹿-牛种间核移植胚胎的克隆和培养: 本试验旨在探索天山马鹿细胞核在牛卵母细胞的去分化潜能性。本试验用体细胞核移植的方法分别构建了马鹿-牛异构胚和牛-牛同构胚.试验结果表明,马鹿细胞可在牛去核卵母细胞内去分化并发育至囊胚阶段,但马鹿异构胚8-16细胞发育阻滞...; 刘韬赛务加甫彭新荣钱其军; 关键词：马鹿体细胞核移植细胞发育; 文献传递

体外培养的山羊乳腺上皮细胞形态研究被引量：29: 2004年; 　通过有效的细胞培养方法获得山羊乳腺上皮细胞系,对这些细胞形态进行光镜观察,结果发现,细胞可形成闭合型和开放型细胞群,闭合型细胞群边界清晰,细胞之间结合紧密;开放型细胞群边界不清,细胞相互分散存在于一局限的范围内。乳腺上皮细胞与成纤维细胞混生时分区生长,界线明显;细胞之间形成许多腔状结构。纯化的乳腺上皮细胞通过单细胞悬浮后传代,部分细胞形成岛屿状聚集,部分细胞以贴壁的自由单个细胞散在形式存在。上皮细胞增殖可形成圆顶型结构,呈乳头状(称之为乳球体);乳腺上皮细胞可产生并分泌乳汁,分泌到细胞外的乳汁流动形成网状结构。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,大多数上皮细胞呈短梭形或多角形,细胞之间紧密相靠,互相衔接,连接成片,呈蜂窝状;细胞核呈圆形或椭圆形,核仁2～4枚;部分细胞呈圆饼状,体积较大;出现部分长形细胞;部分细胞表面出现绒毛状突起;接触抑制的上皮细胞形态不均一。; 郑月茂彭新荣徐永平石玉强张涌; 关键词：体外培养山羊乳腺上皮细胞细胞形态

EGF和不同血清对牛卵母细胞成熟及核移植胚体外发育的影响被引量：4: 2007年; 分离牛卵母细胞,分别用添加表皮生长因子(EGF)和发情牛血清(发情当天血清(OCS(0 d))和发情第7天血清(OCS(7 d)))的培养液进行成熟培养后去核,构建牛体细胞核移植胚并进行体外培养,研究EGF和OCS对卵母细胞成熟及核移植胚体外发育的影响。结果表明EGF添加组和OCS(0 d)添加组卵细胞的成熟率及核移植胚的卵裂率和囊胚率分别为74.5%,84.6%,25.9%和83.9%,78.8%,31.3%。在牛卵母细胞成熟液中添加EGF、OCS(0 d)更有利于牛核移植胚胎的发育。; 王亚刚隋丽娜彭新荣赛务加甫郭志林李向臣王勇胜张涌; 关键词：表皮生长因子胎牛血清

提高牛体细胞核移植效率的研究: 为提高牛体细胞核移植和生产转基因动物的效率，本研究主要从囊胚发育率，囊胚细胞数和囊胚细胞凋亡指数三个方面研究了供体细胞转染端粒酶和癌化对体细胞核移植的影响，卵母细胞胞质成熟与重构胚胎发育的关系，激活方法与重构胚发育的关系...; 彭新荣; 关键词：体细胞核移植卵母细胞囊胚发育率; 文献传递

精子提取液对绵羊同异种核移植重构胚的激活效果被引量：2: 2008年; 应用绵羊精子提取物体外激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,比较了不同浓度的绵羊精子提取物对绵羊同种和异种重构胚的激活作用,并与传统的化学激活方法对重构胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数做了比较。结果表明,绵羊精子提取物可以有效地激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,每一重构胚注射3 pL浓度为5 mg/mL的绵羊精子提取物,对同种和异种胚的发育效果均为最好,并显著高于其他试验组(P<0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊-山羊异种核移植胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异不显著(P>0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊同种核移植胚的卵裂率和囊胚率的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异也不显著(P>0.05),但精子提取物注射法的绵羊核移植胚的囊胚细胞数显著(P<0.05)高于化学激活法的细胞数(72.4 vs 65.2)。; 赛务加甫彭新荣李向臣安志兴郑月茂权富生张涌; 关键词：绵羊重构胚

人Oct4与细胞穿膜肽融合蛋白的表达: 2010年; 目的通过原核表达获得人Oct4(hOct4)与细胞穿膜肽融合蛋白,优化其表达方法并观察其穿膜效果。方法通过基因工程手段构建了pET原核表达载体,利用BL21(DE3)和Rosetta2(DE3)蛋白表达菌表达蛋白。Ni亲和纯化方法纯化蛋白,蛋白质印迹分析检测融合蛋白组成。将融合蛋白用罗丹明染色后加入人正常皮肤成纤维细胞株BJ观察其穿膜进入细胞情况。结果构建了pET21a(+)-hOct4-11R-His和pET21a(+)-EGFP-11R-His表达载体,转入大肠杆菌中后诱导获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,经蛋白质印迹分析检测表明融合蛋白正确。经BJ细胞测试,观察到融合蛋白进入细胞中。结论成功获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,且融合蛋白能够高效进入BJ细胞并聚集于细胞核周围。; 周承亮徐凤青王春红刘韬彭新荣钱其军; 关键词：重组融合蛋白质类

人端粒酶基因(hTERT)对牛耳成纤维细胞凋亡的影响: 2007年; 为了提高体细胞核移植的效率,试验探讨了转染外源性hTERT基因对核移植供体细胞———牛耳成纤维细胞的影响。试验应用脂质体介导hTERT基因转染,用相差显微镜观察转染前后的细胞状态,用RT-PCR、W estern blot法检测hTERT基因是否整合并表达,用流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化和凋亡的情况,并进行核型分析。结果表明:转染48 h后能看到明显的荧光,经600μg/mLG418筛选后,获得阳性克隆,转染后的细胞形态上基本无变化,hTERT基因整合并表达;经流式细胞仪检测,转染前后生长周期无明显变化,凋亡率极显著降低(P<0.01),核型正常;转染hTERT基因后的牛耳成纤维细胞的凋亡率显著低于未转染的细胞,并且形态正常,表明转染hTERT后,使体外培养的牛耳成纤维细胞生命力得到延长,为核移植提供了数量更多的高质量的核供体细胞。; 隋丽娜彭新荣王亚刚张涌; 关键词：HTERT基因转染细胞凋亡

绵羊精子提取物对卵母细胞的孤雌激活作用被引量：5: 2006年; 研究了绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞的孤雌激活作用，确定了绵羊精子提取物的最佳注射剂量，并将其孤雌激活效果与离子霉素联合6-DMAP法的激活效果进行了比较。结果表明，绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞有孤雌激活作用，最佳注射剂量为每个绵羊卵母细胞注入2～4pL浓度5～6mg／mL的绵羊精子提取物；绵羊精子提取物的孤雌激活效果与离子霉素联合6-DMAP法的激活效果差异不显著。; 赛务加甫张立彭新荣郭志林杨丽李向臣何宽军安志兴张涌; 关键词：绵羊卵母细胞孤雌激活显微注射

山羊-绵羊种间体细胞核移植重构胚构建被引量：2: 2006年; 以山羊皮肤成纤维细胞为供体细胞,绵羊去核卵母细胞为受体细胞进行种间体细胞核移植,构建山羊-绵羊重构胚,并对其采用离子霉素联合6-DM AP法和胞质注射绵羊精子提取物法进行激活,比较两种不同激活方法对山羊-绵羊种间体细胞核移植重构胚的激活效果。结果表明,共构建获得山羊-绵羊重构胚238枚,重构胚在体外能够发育至囊胚阶段;离子霉素联合6-DM AP法激活的卵裂率为58.33%(70/120),囊胚发育率为4.28%(3/70);胞质注射绵羊精子提取物法激活的卵裂率为63.55%(75/118),囊胚发育率为6.66%(5/75),两种方法的激活效果差异不显著。; 赛务加甫张立杨丽彭新荣郭志林李向臣权富生安志兴郑月茂赵雪张涌; 关键词：异种核移植成纤维细胞山羊绵羊

山羊乳腺组织块冷冻保存试验被引量：2: 2005年; 　采用快速冷冻方法冻存山羊乳腺组织块,比较不同大小组织块、不同冻前预处理和每管冻存不同块数对冻存效果的影响。结果表明,冻前预处理0,6和12h,直径<0.3mm组织块的贴壁存活率分别为63.0%,89.8%和81.5%,直径为0.3～0.5mm的贴壁存活率分别为47.2%,63.0%和56.5%,直径为0.5～1.0mm的贴壁存活率分别为27.8%,35.2%和29.6%;每管冻存6块、9块和12块对冻存效果影响不显著,以6块最佳。结果显示,以添加100mL/LDMSO的D-MEM/F12为冷冻液,将直径<0.3mm的组织块冻前预处理6h,山羊乳腺组织块的保存效果较好。; 孙苏军安志兴彭新荣张涌; 关键词：山羊乳腺冷冻保存

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